酶解-超声法破碎大肠杆菌提纯包含体

大肠杆菌的破碎方法对包含体的纯度有较大影响.采用酶解和超声波相结合的方式进行了大肠杆菌的破碎实验研究,考察了溶菌酶用量、酶解温度、超声处理功率和时间等因素对菌体破碎程度的影响,通过测定破碎液的A650,A280,A260 nm来反映细胞的破碎程度和胞内蛋白及核酸物质的释放情况.在优化的条件下,每克湿菌体添加2 mg溶菌酶,30 ℃酶解60 min、500 W超声破碎50次后,经分离洗涤可获得纯度达57%的包含体.本方法可获得纯度更高的包含体,利于重组蛋白的进一步纯化.     

雨生红球藻提取虾青素不同机械破壁方法的研究

对雨生红球藻厚壁孢子细胞的几种常用机械破壁方法的工艺条件分别进行研究,得到高压均质法,超声波法和冻融法的较优工艺条件.并分别在上述几种机械破壁方法的最佳工艺条件下比较了几种不同破壁方法对破壁率和虾青素提取率的影响.结果表明,高压均质法最适合于雨生红球藻厚壁孢子的破碎和虾青素的提取.高压均质的优化条件为:40MPa,循环3次,室温,破壁率达到91.4%,虾青素提取率为28.0μg mg(细胞干重),比未经破壁处理的提取率提高了10.1μg mg(细胞干重),提高了56.3%.     

两种胰蛋白酶酶解羊肌肉总蛋白样品的质谱分析

摘要: 目的比较国产和进口两种胰蛋白酶对蛋白质的酶解效果,为后续蛋白质组学稳定研究提供依据。方法用超声破碎法提取羊肌肉组织总蛋白,经两种胰蛋白酶酶解后液相色谱串联质谱检测酶解肽段,将结果上传蛋白质序列数据库,利用质谱分析鉴定方法分析比较两种胰蛋白酶的酶解效果,并借助生物信息学工具对所得数据进行分析。结果两种胰蛋白酶酶解同种蛋白质样品产生的肽段长度86%以上均为6-18 个氨基酸,适用于质谱检测。酶解后肽段产生的质量国产胰蛋白酶优于进口胰蛋白酶,国产胰蛋白酶比进口胰酶酶解可多鉴定到19% 的蛋白质和34%的肽段。结论进口、国产的胰蛋白酶在酶解蛋白质方面均可用于质谱检测前蛋白质的酶解消化。但国产胰蛋白酶价格明显低于进口胰酶,更具应用优势。本研究为评价胰蛋白酶酶解效果提供了一种有效、全面的研究方法。     

厌氧条件下扁藻破碎方法及其对氢酶活性的影响

为了分离纯化亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis)体内的可溶性氢酶,研究了在厌氧环境下藻细胞的破碎方法,以及各种破碎条件对氢酶活性的影响.实验结果表明,使用超声法在输出功率为400 W、超声为5 S、间歇为10 S、工作20次的条件下,破碎细胞后溶液中总蛋白含量最高,可达2.73 g/L珠磨法和体积分数为0.2%的Triton X-100法破碎的鲜细胞的氢酶提取效率较高,分别为1.44 U/g和1.27 U/g,其中使用Triton X-100法破碎后的粗提液所含其他蛋白的种类较少.实验的最终目的是获得足够量的氢酶进行下一步纯化,因此Triton X-100法是最合适的方法.     

压力对淀粉酶解程度的影响

研究了经高压(100～450MPa)处理后的淀粉对酶水解的敏感性.结果表明:高压处理对淀粉的酶解程度影响不大.     

花生分离蛋白与蓝园鲹酶解物TGase交联产物的乳化特性

利用转谷氨酰胺酶(TGase)将花生分离蛋白(PPI)与蓝园鲹酶解物(DPH)进行酶法交联,并经高压均质制成O/W型乳状液,研究TGase的交联作用对乳状液粒度分布、表面积平均粒径、显微结构及离心乳析率等的影响.结果表明:TGase可促使PPI与不同水解度的DPH交联,与交联前的电泳图相比,低分子质量亚基条带(14~31 ku)消褪,高分子质量亚基条带(大于97 ku)生成;DPH的水解程度对交联物的乳化性有重要影响,水解度为5.5%时所得交联物具有较好的乳化特性;交联作用提高了PPI-DPH异源蛋白的乳化活性与乳化稳定性.     

超声辅助提取紫花苜蓿黄酮类物质工艺优化

为了进一步优化紫花苜蓿中黄酮类物质提取工艺,选用青大1号紫花苜蓿盛花期青干草粉作为试验材料。实验采用超声辅助提取的方法提取紫花苜蓿中黄酮类物质,首先设计单因素实验考察料液比、超声温度、超声时间、酶解时间4个单因素对苜蓿提取率的影响,结果表明4个单因素处理分别对紫花苜蓿黄酮类物质提取率存在显著影响(P0.05)。以单因素试验结果为依据开展4因素(料液比、超声温度、超声时间、酶解时间)三水平正交试验。结果表明:影响黄酮类物质提取率的因素从大到小依次为料液比、超声时间、酶解时间、超声温度。综合分析获得最优提取条件为料液比1∶30,超声时间30 min,超声温度50℃,酶解时间1 h。超声辅助方法可以提高紫花苜蓿黄酮类物质提取率。     

酶法提取积雪草苷

采用酶法提取积雪草中的积雪草苷,对酶的种类、用量、积雪草与溶剂水的料液质量比、酶解液初始pH、酶解温度、酶解时间等因素进行了考察,结合正交实验设计筛选出酶解最优工艺参数,并将酶法提取结果与其他方法比较.研究结果表明,优化的提取条件为纤维素酶与底物积雪草质量比m(E)∶m(S)=1∶50,料液质量比为(积雪草与溶剂水的质量比)1∶25,pH 6.0,酶解温度40 ℃,酶解时间1.5 h.与传统提取方法相比,酶法提取速率快,工艺条件温和,得率高,是一种良好的提取方法.     

球孢白僵菌几丁质酶的定位研究

采用酶解球孢白僵菌菌丝细胞壁以获得原生质体,用超声破碎器破碎细胞,并用差速离心等方法,对此丝状病原真菌细胞中几丁质酶的定位进行了研究.采用球孢白僵菌 Eu-120株,分别用几丁质酶、蜗牛酶和纤维素酶,以不同比例混合进行脱壁处理.通过测定培养物上清液及原生质体溶解物的几丁质酶活性,发现此培养物上清液中的酶活性占其总酶活性的81.46%,而原生质体溶解物中酶活性极少.研究表明,球孢白僵菌几丁质酶主要存在于细胞的周质空间,并在菌生长过程中通过细胞壁分泌至细胞外.     

基于SPH方法的非均质煤层瓦斯渗流模拟（英文）

基于煤层瓦斯渗流方程,通过虚粒子法处理边界条件,提出了一种对非均质煤层瓦斯瞬态渗流进行模拟的光滑粒子流体动力学(smoothed particle hydrodynamics,SPH)方法。煤层存在三个典型的非均质性:(a)沿煤层走向的非均质性,(b)Weibull随机分布的非均质性,(c)是(a)和(b)两种情况都存在的非均质性。结果表明:通过SPH方法得到的数值模拟解与解析解一致,三种非均质煤层都会导致瓦斯渗流的非线性行为。而瓦斯流动的非线性程度与煤层的非均质性参数m和n有关。该数值模拟提供了一种揭示煤层中瓦斯渗流和瓦斯灾害非线性行为机理的有效方法。     

超声波辅助酶提取黄秋葵果胶工艺研究

以黄秋葵为原料,采用超声波辅助纤维素酶对黄秋葵果胶的提取进行研究.在单因素试验的基础上,采用响应面分析考察超声温度、超声时间、料液比、酶解时间四个因素对果胶得率的影响.得出最佳工艺条件为超声时间15 min、液料比35∶1(m L/g)、超声温度43℃、酶解时间25 min.在该工艺条件下果胶得率为8.84%.     

超声波对黑曲霉细胞破壁作用的研究

用均匀设计法考察了超声时间、超声温度和超声功率对黑曲霉细胞破壁效果的影响.实验结果表明最优条件为:超声时间50 min,超声温度60℃,超声功率200 W.超声法与高压均质法比较,超声法破壁效果较好.     

血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的酶法制备

以扇贝裙边的酶解产物——蛋白多肽对ACE活性的抑制率作为控制水解程度的指标,确定制备ACE活性抑制肽的最佳酶种及酶解工艺技术条件.通过胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合风味酶、枯草杆菌蛋白酶5种酶酶解扇贝裙边得到的蛋白多肽对ACE抑制能力的比较发现,5种酶在不同酶解时间所得到的酶解蛋白多肽都具有一定的ACE抑制能力,其中胃蛋白酶酶解蛋白多肽的ACE抑制率最高,为91.33%;再经L9(3)4正交实验对胃蛋白酶酶解工艺条件进行优化,确定酶解反应最佳条件是酶量400 U.g-底1物,pH 2.5,温度32℃,底物浓度(原料∶水)1∶2,酶解时间3 h;试验结果还表明,单酶(胃蛋白酶)的酶解蛋白多肽比复合酶(复合风味酶)和双酶(胃蛋白酶 木瓜蛋白酶)的酶解蛋白多肽对ACE活性的抑制能力都强.     

响应曲面法优化超声协同复合酶法提取广金钱草多糖工艺

采取超声波协同复合酶法探究广金钱草多糖的最佳提取工艺.采用加权评分法,以广金钱草多糖的得糖率和含糖量的综合得分为评价指标,考察液料比、超声时间、超声温度、酶解pH、酶解温度和酶解时间因素对广金钱草多糖综合得分的影响,在单因素试验基础上,筛选对广金钱草多糖综合得分影响较大的因素,根据Box-Behnken试验设计原理,优化广金钱草多糖的最佳提取工艺.实验研究表明,在复合酶提取(质量比木瓜蛋白酶:纤维素酶:果胶酶=1:1:1),酶添加量固定为1％的条件下,超声协同复合酶法提取广金钱草多糖的最佳提取工艺为:液料比为50:1(g/mL),超声时间为86 min,超声温度为50℃,酶解时间为60 min,酶解温度为60℃,酶解pH为5.5.在此条件下,得到多糖的综合得分达92.02,与响应面模型的预测值相符合.此方法可以很大程度提升广金钱草多糖的提取量,表明利用响应面法优化广金钱草多糖的提取工艺是可行的,可为其工艺提取提供参考.     

柳枝稷超高压爆破前处理研究

应用高压均质技术对柳枝稷（Panicum virgaturn）进行超高压爆破前处理。柳枝稷秸秆粉碎后用0．5％的NaOH加热处理,保持悬浮状态下通过高压均机进行100MPa爆破。结果表明,超高压爆破使柳枝稷颗粒悬浮液变为粘稠流体,粒度显著变小,超微结构由纤维状变为疏松的中空多孔状,木质素、灰分含量显著减少,碱消耗量显著增加,但对纤维素的结晶指数影响很小。处理后每克材料用4．7FPU的纤维素酶,5．3IU的木聚糖酶和0．4CBU的β-葡萄糖苷酶水解48h,酶解率97．6％,较未爆破对照提高21．1％。超高压爆破显著提高酶解率的主要原因是破坏了木质纤维的超微结构,增大了酶的作用面积,是一种有潜力的木质纤维材料前处理方法。     

碳酸盐岩油藏线性复合试井分析模型及其应用

针对多个区域表现为条带状沉积特征的北特鲁瓦碳酸盐岩油田的渗流规律难以准确描述问题,建立了一种碳酸盐岩油藏线性复合试井分析模型.利用点源函数理论、傅里叶变换等方法,求解得到内外区都为均质的线性复合井底压力解,并引入一种均质油藏压力解与双重介质油藏压力解的简单转换方法,得到碳酸盐岩油藏线性复合井底压力解.典型曲线分为9个主...     

稻草超高压爆破前处理研究

应用高压均质技术对稻草进行超高压爆破前处理。稻草粉碎后经1％的Na0H加热处理,保持悬浮状态下通过高压均机实施超高压爆破。结果表明,100MPa爆破使稻草颗粒悬浮液变为粘稠流体,粒度显著变小,超微结构由纤维状变为松软的中空多孔状,纤维素结晶指数降低19．76％,耗碱量增加163．41％。爆破对还原糖、木质素和灰分等成分含量几乎没有影响。处理后每克稻草用5．8FPU的纤维素酶,6．6IU的木聚糖酶和0．5CBU的p葡萄糖苷酶酶解72h,酶解率达100．09％,较对照提高44．85％。超高压爆破显著破坏了木质纤维的超微结构,增大了酶的作用面积。     

机械预处理对纤维素酶降解的影响

以机械破碎的麦草作为底物,进行酶解（50℃,pH4．8）试验,通过测定酶解液的还原糖含量确定破碎的最佳粒度,结果表明在麦草粉碎至300目以后,酶解速率没有明显变化．对预处理后麦草的X—衍射和透射电镜分析测定,从结晶度和酶作用位点综合分析了机械破碎对酶降解作用的影响．     

物理方法提高高温变性豆粕可溶性蛋白质的方法

研究了微波处理、水浴加热、超声处理及高压均质对高温变性豆粕可溶性蛋白含量的影响.通过实验证明微波处理和水浴加热对提高高温变性豆粕氮溶解指数效果明显,并对两种加热处理方式进行了正交L9(34)优化试验.结果表明,微波(700 W)处理在pH 8.0,底物质量分数3%,时间5 min时氮溶解指数达到70.39%;加热处理高温变性豆粕的较佳条件为pH 8.0,反应时间90 min,底物质量分数为1%,其溶液氮溶解指数可达74.81%;但在较高底物质量分数(3%)下,加热处理高温变性豆粕的氮溶解指数只达到63.96%.微波处理后蛋白质的其他功能性要优于酶处理后的,因此微波加热处理高温变性豆粕可有效提高生产效率,有利于实现工业化生产.     

超声辅助酶解法制备兔肉抗氧化肽工艺

以搅碎的兔肉末为原料，以超声辅助酶解制备抗氧化肽，对其抗氧化活性进行评价，发现抗氧化活性较好.比较不同酶制备的抗氧化肽的DPPH自由基清除率，从胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶中筛选出最佳用酶，利用单因素实验和响应面法优化了兔肉酶解的工艺条件.结果表明，酶解效果最好的是胰蛋白酶，在超声时间22.5 min,超声温度37℃,超声功率330 W的条件下酶解得到的抗氧化肽DPPH自由基清除率最好，为81.17%,与响应面优化实验回归模型的预测值基本一致；在此基础上制备兔肉抗氧化肽，对酶解液的ABTS、羟基自由基和超氧阴离子清除率进行检测，值分别为44.03%、94.69%和34.32%,均大于未酶解液.该研究可以为制备兔肉抗氧化肽方面提供理论依据和数据支持.