hNIS转基因介导131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG.采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况.CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况.结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS.CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8 min.131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01).结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡.     

~(131)I-标记大黄素在动物体内的药物动力学和组织分布

本文采用同位素示踪法研究尾静脉注射131I-标记大黄素在大鼠体内的药物动力学和小鼠体内的组织分布.在NBS催化剂作用下,将131I-NaI与大黄素反应得到产物2-131I-大黄素,放射性化学产率为96%,放射性化学纯度95%,且标记物在大鼠血浆中24h内稳定.131I-标记大黄素在大鼠体内的药物动力学过程符合一室模型,半衰期(t1/2)为0.25h,清除率(CL)为0.007L/(h·kg).小鼠的组织分布特征为肺部和肾脏最高,脑组织最低,其它组织水平基本相似.研究结果表明静脉注射131I-标记大黄素后在体内分布和清除速度较快,主要经过肾脏排泄,且不易透过血脑屏障.     

甲硝唑衍生物混配配合物 99mTcN(PNP5)(MN-cys-OS)的制备及生物性能研究

合成了一种新的含甲硝唑药效团的双功能配体: 2-[3-(2-甲基-5-硝基咪唑基)丙酰胺基]-3-巯基丙酸(MN-cys-OS),并与[ 99mTcN] 2 int中间体反应,制备得到一种 99mTcN核标记的混配配合物: 99mTcN(PNP5)(MN-cys-OS),其标记率大于95%.研究表明 99mTcN(PNP5)(MN-cys-OS)为电中性、脂溶性配合物(P=3.17±0.06),具有较好的体外稳定性.正常昆明小鼠体内生物分布研究结果显示该配合物具有很快的肝、血清除性能,进一步的荷MA891肿瘤小鼠研究显示其具有一定的乏氧选择性,但肿瘤摄取较低.     

LPM3480226联合索拉菲尼抗小鼠肾癌Renca

本文旨在研究吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂LPM3480226联合多靶点抗血管生成药物索拉菲尼的抗肿瘤效应及其潜在作用机制。采用小鼠肾癌Renca移植瘤模型,经口灌胃给予200 mg/kg LPM3480226(2次/d),15 mg/kg索拉菲尼(1次/d),或二者联用,连续19 d,观察荷瘤小鼠体重、肿瘤体积、肿瘤重量、肿瘤浸润CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺T细胞比例以及肿瘤组织CD34阳性微血管密度(CD34-MVD)。结果显示,LPM3480226与索拉菲尼联用时动物体重未显著降低,二者联用的抗肿瘤作用优于药物单用,且肿瘤组织内CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺效应T细胞比例显著提高,CD34-MVD水平显著降低。本研究表明,LPM3480226与索拉菲尼在Renca小鼠模型中具协同抗肿瘤作用,与增加肿瘤浸润淋巴细胞比例和降低血管形成有关。基于IDO抑制剂的免疫治疗与抗血管生成药物联用可能成为...     

用电解法标记~(99m)Tc-氨基酸、肽类及还原~(99m)Tc 净电荷的研究

自1961年 M.Blau 等人提出用~(75)Se-硒蛋氨酸进行胰腺显影以来,虽然它的物理半衰期(120 d)和生物半衰期(140 d)都较长,并对胰腺的摄取也不大,但至今仍是主要的胰腺显影剂。从六十年代末开始,人们试图用各种其他放射性核素如~(11)C~([3-5])、~(13)N~[6]、~(18)F~([7-8]),各种放射性碘~([9-10])和~(99m)Tc~([11-15])标记氨基酸及肽类来代替~(75)Se-硒蛋氨酸,但多数还是处于研制和动物实验阶段。     

99mTc-MAAG2肿瘤显像剂的合成及生物分布研究

合成并表征了新的小肽配体N-(S-三苯甲基巯基乙酰基)丙氨酰甘氨酰甘氨酸(Tr-MAAG2).通过直接标记法制备了水溶性配合物99mTc-MAAG2,并对其体外稳定性进行了检测.研究了配合物99mTc-MAAG2在荷瘤鼠体内的生物分布以及血液清除,结果表明,99mTc-MAAG2在肿瘤和肌肉中的质量摄取率am之比为2.67,肿瘤和血液的am之比为0.75,血液清除较快.     

鍀~(99m)(~(99m)Tc)-四环素的制备及其在正常和肿瘤动物中的分布及临床肾扫描的初步结果

一、前言四环素是一个广谱性能的抗菌素,Rail等最早报告了四环素在肿瘤组织中有大量的积累,继后,Loo、Klingert等也报导了四环素萤光集中在小鼠和人体的肿瘤,而且进一步运用于临床,检验胃液脱落细胞中的四环素萤光作为胃癌诊断指标之一。另一方面,利用四环素很易和金属进行螯合的特性,早在1960年Dunn等就用放射性碘(~(131)Ⅱ)标记     

新型99mTcN核混配配合物的制备和小鼠生物分布

经配体交换反应制备了5种新配合物:[99mTcN(PNP5)(CBDTC)] ,[99mTcN(PNP5)(CPEDTC)] ,[99mTcN(PNP5)(CHDTC)] ,[99mTcN(PNP5)(CHPDTC)] 和[99mTcN(PNP5)(MCHDTC)] ,放化纯均大于90%.小鼠生物分布结果显示:5种配合物主要经肾排泄,在血、肝和肺等非靶组织中的清除较快;[99mTcN(PNP5)(CBDTC)] 在5 min时的心肌初始摄取和心与肝比最高,利于快速心肌显像;[99mTcN(PNP5)(MCHDTC)] 的心肌滞留最好,靶与非靶比较高,通过结构修饰提高其心肌摄取,可能发展为一种新型心肌灌注显像剂.     

基于镭同位素示踪方法的大风江河口水体滞留时间估算

为评估广西北部湾沿岸的重要入海河流河口区——大风江河口的水体更新速率,本研究对大风江河口水体中的²²⁴Ra和²²³Ra放射性活度进行测定,基于短长半衰期镭同位素的活度比值,对大风江河口的水体滞留时间进行估算,得出大风江河口枯季的平均水体滞留时间为(8.36±2.88) d。整体来讲,大风江河口的水体更新速率相对较慢,在其遭受陆源污染时应在相应时间尺度上进行污染防控,以期为大风江河口水体的物质交换和输运提供基础信息。     

对羟基苯甲酸构筑的混合价态双核铽配合物的合成、晶体结构及荧光性质

用溶液法制备了混合价态双核铽配合物NH₄[Tb₂(PHBA)₈],利用红外光谱、质谱和X射线单晶衍射对其结构进行表征.该配合物属斜方晶系,Pccn空间群,为[NH₄]⁺与[Tb₂(PHBA)₈]^-的盐.每个结构单元含有2个铽离子(Tb³⁺,Tb⁴⁺),每个铽离子与6个不同PHBA配体中的羧基O原子以8配位方式(2个羧基为螯合,4个为桥式)配位,构建具有混合价态的双核铽配合物.该配合物在紫外光激发下,发射出以493、548、589和625 nm为中心的发射峰,这是由Tb³⁺从⁵D₄激发态到⁷F_J(J=6,5,4,3)的能级跃迁引起的.     

芪参补气药茶清除线粒体活性氧研究

以黄芪和党参为原料,根据中医学原理组方制成芪参补气药茶(ACT),探索ACT清除线粒体活性氧作用及促进健康的机制。分别用AlCl₃比色法和硫酸苯酚法测定ACT的功能因子总黄酮、总糖及总多糖含量。以还原型辅酶Ⅰ/吩嗪硫酸甲酯(NADH/PMS)为超氧阴离子(O₂·^－)生成系统,过氧化氢(H₂O₂)/Fe²⁺体系为羟自由基(·OH)生成系统,分别用氮蓝四唑(NBT)还原法和Fenton反应显色法测定ACT清除O₂·^－及·OH的能力;用Na₂S₂O₃滴定法测定ACT清除H₂O₂的能力。ACT总糖质量分数为(26±1.3) mg·mL^-1,总多糖质量分数为(12.5±0.8) mg·mL^-1,总黄酮质量分数为(121±8.5) μg·mL^-1。ACT可一定程度上清除O₂·^－、·OH和H₂O₂。ACT具有温和的抗氧化作用,从而维持机体氧化与抗氧化平衡,这是ACT促进健康的潜在机制。     

低剂量Activin A通过激活CD8+T细胞发挥抗肿瘤效应

Activin A属于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族中的多功能细胞因子,存在于多种免疫细胞中.CD8⁺T细胞是发挥抗肿瘤活性的主要免疫细胞类型.以H22细胞移植瘤模型旨在探讨Activin A对CD8⁺T细胞功能的调控和作用机制.本研究首先在分离出的CD8⁺T细胞上发现Activin A受体及下游信号分子的表达.体外实验表明Activin A对小鼠H22肝癌细胞系的凋亡及增殖无显著影响.H22荷瘤鼠的体内研究发现低浓度Activin A抑制肿瘤生长,高浓度Activin A促进肿瘤生长.在Activin A对肿瘤CD8⁺T细胞作用的研究中,发现大剂量Activin A处理的肿瘤中CD8⁺T细胞含量减少,小剂量Activin A处理组中CD8⁺T细胞含量则增加.以上数据表明,不同剂量的Activin A可能通过调控CD8⁺T细胞的浸润对肿瘤的生长发挥双重作用.     

藤茶多糖组分AGP-3的体外抗氧化活性研究

研究了藤茶多糖组分AGP-3的体外抗氧化活性.用K3[Fe(CN)6]模型测定多糖的还原能力,用试剂盒方法测定丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量,用分光光度法测定小鼠红细胞溶血和小鼠肝线粒体肿胀度.结果表明,AGP-3在化学模拟体系具有一定的还原能力和清除活性氧能力,一定浓度范围内具有体外清除小鼠血清活性氧的作用,并能减少小鼠肝组织及肝线粒体MDA的生成,可抑制小鼠红细胞溶血和肝线粒体肿胀.     

99mTcN-IPDTC的制备、生物分布及与99mTc-IPDTC的对比研究

采用SnCl2@2H2O为还原剂,丁二酰二酰肼(SDH)为N3-离子提供体,在室温下制备[99mTcN]2+int中间体,然后与配体二水@N-异丙基-二硫代氨基甲酸钠(IPDTC)发生交换反应,得到放化纯度大于90%的99mTcN-IPDTC配合物.小鼠体内生物分布表明,99mTcN-IPDTC有较高的脑摄取和较好的脑滞留,有望成为一类新型脑灌注显像剂.为了对比99mTcN-IPDTC与99mTc-IPDTC的异同,同时采用甲脒亚磺酸(FSA)作还原剂对配体IPDTC进行了99mTc直接标记.小鼠生物分布结果表明,99mTc-IPDTC主要在肝内浓集,而脑摄取很少,这也充分表明放射性药物分子中引入[99mTcN]2+核会引起生物分布性质的明显改变.这些结果对于设计新型放射性药物具有重要参考价值.     

表达人二肽基肽酶4(hDPP4)转基因小鼠的主要生物学特性指标测定

目的 分析表达人二肽基肽酶4(hDPP4)的转基因小鼠的生物学特性指标，为将其应用于中东呼吸综合征的相关研究提供基础数据。方法 本实验室构建了表达hDPP4的转基因小鼠C57BL/6J-TgN (UBC-hDPP4-GFP) CLARS,简称Tg^hDPP4。对不同性别(每组5只)的Tg^hDPP4小鼠的10项血液生化指标、18项血液生理指标、4～16周龄生长发育指标和8项脏器指数进行测定，并与不同性别(每组5只)的野生型C57BL/6J小鼠进行比较，用统计学方法进行分析。结果 与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雄鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均降低，血糖和血尿氨素均升高；与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雌鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均升高；Tg^hDPP4 F₃雄鼠的体质量自5周龄开始均高于野生型雄鼠。结论 hDPP4的转入对Tg^hDPP4小鼠的血糖、血尿...     

(131)~I标记卵清蛋白及其载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒SPECT显像

制备载(131)~I-OVA的荷正电聚乳酸-乙醇酸(PLGA/DDAB)纳米粒,探讨其在活体动物体内的生物分布与转运研究。氯胺T法对卵清蛋白(OVA)进行(131)~I标记,Sephadex G 25纯化标记抗原,纸层析法测定标记物的生物活性和体外稳定性。纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,将其与(131)~I-OVA共混吸附,制备载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒。动物试验选择C57/BL6小鼠,肌肉注射载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒,分析(131)~I-OVA在小鼠组织器官中的分布情况,并于注射疫苗制剂后不同时间行SPECT正位静态显像,观察小鼠不同组织内放射性浓聚情况。结果显示,标记抗原经纯化后,测得(131)~I-OVA比活度达32~42μCi·μg-1,标记率达(71.92±0.08)%,放射性化学纯度为(85.94±0.15)%。标记物在新鲜血清中存放72 h后,仍保持很高的反应活性,表明标记的OVA稳定性良好。采用纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,平均粒径、分散系数和Zeta电位分别为122.8 nm、0.084和+31.5 m V。将其与(131)~I-OVA共混吸附,抗原携载率达(89.60±0.21)%。注射载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米球疫苗制剂,与无佐剂疫苗相比,抗原在注射部位消失的速度更为缓慢。结果表明,成功制备了载(131)~I-OVA的PLGA/DDAB纳米球,生物活性较好,可用于抗原在活体动物的生物分布与转运研究。     

栗果草酸青霉菌的室内最适培养条件

<正>随着板栗( Castanea mollissima Blume) 产量的提高,板栗贮藏期的病害逐年加重^[1]。其中,栗实腐烂病危害日渐凸显,果实腐烂率最高达到 40% ～ 50%^[2],严重威胁着板栗产业的发展。关于栗实贮藏期腐烂病发生原因的研究较多,普遍认为是由致病微生物侵染引起,常见的致腐微生物有链格孢属( Alternaria alternata) 、聚端孢属( Trichothecium sp． ) 、壳梭孢属( Fusicoccum sp．) 、小穴壳属( Dothiorella sp． ) 、丝核菌属( Rhizoctonia sp．) 、青霉菌属( Penicillium sp．) 、镰孢菌属( Fusarium sp．) 等^{[3 ～ 6]}。其中,青霉菌属广泛分布于我国南北各产区腐烂栗实中^[6],小刺青霉、扩展青霉等均已报道能够侵染板栗果实^[7,8],但关于草酸青霉致病力的研究相对较少,相关报道主要围绕草酸青霉在纤维素降解、发酵生产、生物防治等方...     

红缘层孔菌多糖对小鼠核酸蛋白质合成及对肿瘤S-180病毒CBV_3、HSV-Ⅰ细胞增殖的影响

本文用放射性前体掺入法研究红缘层孔菌多糖对小鼠体内核酸及蛋白质合成的影响。结果表明,该多糖较明显地提高了[~3H-Letu]掺入正常小鼠血清蛋白及肝脏蛋白的速率,对部份肝切除小鼠肝脏合成蛋白质的能力也有显著的促进作用;同时,该多糖使[~3H-UR]掺入肝脏脾脏RNA的量对比照组分别增加了12％及26％,但对[~3H-TdR]掺入肝、脾DNA的量无显著影响。红缘层孔菌多糖分别与S-180肿瘤细胞、柯萨奇病毒(CBV_3)及Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)进行体外培养,结果表明该多糖对三种细胞的增殖无显著影响。     

131I标记OVA及其载131I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒SPECT显像研究

制备载131I-OVA的荷正电聚乳酸-乙醇酸(PLGA/DDAB)纳米粒,探讨其在活体动物体内的生物分布与转运研究。氯胺T法对卵清蛋白(OVA)进行131I标记,Sephadex G 25纯化标记抗原,纸层析法测定标记物的生物活性和体外稳定性。纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,将其与131I-OVA共混吸附,制备载131I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒。动物试验选择C57/BL6小鼠,肌肉注射载131I-OVA的PLGA/DDAB纳米粒,分析131I-OVA在小鼠组织器官中的分布情况,并于注射疫苗制剂后不同时间行SPECT正位静态显像,观察小鼠不同组织内放射性浓聚情况。结果显示,标记抗原经纯化后,测得131I-OVA比活度达32～42 μCi.μg-1,标记率达(71.92±0.08)%,放射性化学纯度为(85.94±0.15)%。标记物在新鲜血清中存放72 h后,仍保持很高的反应活性,表明标记的OVA稳定性良好。采用纳米沉淀法制备PLGA/DDAB纳米球,平均粒径、分散系数和Zeta电位分别为122.8 nm、0.084和+31.5 mV。将其与131I-OVA共混吸附,抗原携载率达(89.60±0.21)%。注射载131I-OVA的PLGA/DDAB纳米球疫苗制剂,与无佐剂疫苗相比,抗原在注射部位消失的速度更为缓慢。结果表明,成功制备了载131I-OVA的PLGA/DDAB纳米球,生物活性较好,可用于抗原在活体动物的生物分布与转运研究。     

胡桃楸树皮抗肿瘤有效成分对H22荷瘤小鼠T细胞亚群的影响

 为测定胡桃楸树皮提取物(HT)抗肿瘤有效成分对H₂₂荷瘤小鼠T细胞亚群的影响,将昆明小鼠随机分为HT高剂量组、HT低剂量组、阳性药环磷酰胺组、模型组和正常组,采用接种法复制H₂₂肿瘤移植模型。利用荧光标记抗体-流式细胞术检测HT对建立的H₂₂荷瘤小鼠模型外周血中CD4⁺/CD8⁺细胞亚群比值变化; ELISA法检测CD4⁺细胞所分泌细胞因子IL-4和IFN-γ的含量,以测定Th1/Th2细胞亚群比例。结果显示,与阳性药注射用环磷酰胺(CTX)相比,HT高、低剂量组能显著降低机体CD8⁺亚群比例(P<0.01),HT低剂量组可明显提高CD4⁺/CD8⁺比值(P<0.05)。HT高、低剂量组的IL-4含量显著低于阳性药CTX组(P<0.001),明显低于模型组(P<0.05)。HT高剂量组的IFN-γ/IL-4水平明显高于阳性药CTX组(P<0.05)。研究表明,胡桃楸树皮提取物具有明显的抑瘤作用,能保护胸腺和脾脏,能减轻荷瘤机体的T细胞免疫功能的损伤。