乌龟肠道微生物区系和排泄物抗菌研究

探讨乌龟排泄物对鱼病病原菌的抑制作用.对乌龟前肠、中肠、后肠和尿囊中微生物进行了分离和纯化,鉴定出乌龟肠道微生物区系优势菌群有肠杆菌属、埃希氏菌属、极毛杆菌属等菌属;厌氧菌有革兰氏阴性球菌、杆菌、消化链球菌,革兰氏阳性球菌、杆菌等.嗜水产气单胞菌、白色链珠菌表现对乌龟排泄物上清液最为敏感;灭菌后的乌龟排泄物上清液对供试菌均无抑制作用.     

和田维吾尔族长寿老人肠道益生乳酸菌的分离鉴定

【目的】从和田维吾尔族长寿老人粪便中筛选并鉴定定植肺遣的益生乳酸篱。通过数量和种类与一般人进行比较,为后续筛遗高抑茵活性,具有降胆固醇功能的茵株提供基础。【方法】首先用微生物平板计数法统计粪便中的细菌总数,然后用改良的MRS＋CaCO3固体培养基筛选乳酸茵,经形态学．生理生化实验进行初步鉴定,挑进出18株长寿老人源肪道乳酸茵和9株一般人源肠道乳酸菌,并进行16SrDNA序列鉴定。【结果】从和田长寿老人粪便中分离得到乳酸茸18株,其中8株属于植物乳杆菌,10株属于肺球菌,一般人粪便中分离得到乳酸菌9株,都属于肠球菌。长寿老人肠道中腑球菌占优势,但是一般人肠道中没有植物乳杆菌,只有肪球菌。【结论】经形态学,生理生化,分子錾定等方法从和田长寿老人腑道中分离出的27椿乳酸茼属于肠球茸和植物乳杆菌的不同变异品系,为进一步研究抑菌活性,降胆固醇功能,安全性并益生茵与长寿的关系莫定一定的基础。     

致羔羊脑炎粪肠球菌人工感染羔羊的试验研究

将从发生羔羊脑炎病例中分离纯化的粪肠球菌经静脉注射接种于健康的2只美利奴羔羊和1只土种羔羊.结果显示,被感染羊均表现出与自然感染绵羊相似的临床症状和病理变化,并从脑、心血、肝等组织中回收到了接种菌,从而证明了该粪肠球菌分离株具有较强的致病性.     

大鼠与鲫鱼肠道内含物中微生物菌群的研究

目的 对生活环境差异较大的动物肠道内含物中微生物菌群分布规律进行研究。方法 通过提取SD大鼠与鲫鱼不同肠段的内含物菌液,用不同的选择性培养基进行分离培养,鉴定后进行平板计数。结果 大鼠肠道中乳酸杆菌所占比重高于鲫鱼肠道,其余菌落(双歧杆菌、肠球菌、大肠杆菌)比重明显小于鲫鱼肠道;大鼠和鲫鱼肠道厌氧的双歧杆菌沿肠道向下数量递增。需氧的肠球菌在鲫鱼、大鼠整个肠道中的数量级相当。结论 研究不同动物肠道的微生物信息可以为病理学、毒理学的研究提供理论信息。     

益生菌、肠道菌群与人体健康

 肠道菌群与人体长期互作、共同进化,帮助宿主消化吸收食物中的营养物质、代谢宿主肠道中产生的有毒废物,同时产生人体必需的氨基酸、维生素、短链脂肪酸等功能物质为宿主所用。肠道菌群紊乱将导致诸如糖尿病、肠易激综合征等多种人体疾病的发生。因此,维护健康的肠道菌群平衡状态对维持机体健康十分关键。益生菌可以调节人体肠道菌群结构、抑制致病菌在肠道中的定殖,同时帮助宿主建立健康的肠黏膜保护层,增强肠道屏障作用,增强宿主的免疫系统。本文综述了乳酸菌、益生菌、人体肠道菌群的研究进展,论述了中国人群的肠道菌群特征,分析了基因型与饮食对肠道菌群的影响,指出了肠道菌群领域的研究热点及发展趋势。     

乳酸菌表达质粒的构建

粪肠球菌是乳酸菌的一个属．采用生物信息学方法,预测了粪肠球菌AS1．2984基因组中乳酸脱氢酶和三磷酸甘油醛脱氢酶的组成型启动子序列．设计引物通过PCR扩增得到这2段启动子序列,并克隆到乳酸菌一大肠杆菌穿梭质粒pNZ8037上,在启动子下游接上绿色荧光蛋白基因作为标记,构建乳酸菌的组成型蛋白表达质粒．通过电转化将上述改造过的pNZ8037质粒导入粪肠球菌中,在共聚焦显微镜中可以观察到绿色荧光蛋白的表达．在乳酸菌MRS培养基中加入乳酸、盐酸、氢氧化钠等试剂,发现可以调节绿色荧光蛋白的表达量．     

野外放归大熊猫和圈养大熊猫肠道正常菌群的研究

对四川卧龙中国保护大熊猫研究中心1只放归亚成体大熊猫和3只圈养亚成体大熊猫肠道正常菌群的种类、数量和分布情况进行了比较研究，结果鉴定出17种细菌，发现放归大熊猫和圈养大熊猫肠道优势菌群均为肠杆菌、肠球菌和乳杆菌，与圈养大熊猫相比，大熊猫放归野外后，肠道菌群中的肠球菌增多，肠杆菌和乳杆菌的数量有所下降，芽孢杆菌和酵母菌的检出率增大。     

幽门螺杆菌感染对肠道菌群的影响

 为研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对肠道菌群的影响,收集Hp 阴性和Hp 感染(阳性)患者的粪便标本,选择Hp 和肠道菌群中具代表性的大肠杆菌O157、乳酸杆菌、肠球菌、双歧杆菌进行PCR 扩增。实验结果表明,Hp 阴性组中未见Hp 表达,与¹³C 呼气实验结果基本一致;Hp 阴性组中乳酸杆菌、肠球菌、双歧杆菌表达较高,而Hp 感染组中3 者表达较少;Hp 阴性组中未检测到大肠杆菌O157。幽门螺杆菌感染可改变肠道菌群中乳酸杆菌、肠球菌、双歧杆菌等菌落的数量。     

牦牛源产细菌素的乳酸菌的筛选鉴定

为筛选优良的产细菌素乳酸菌,用含0.5%碳酸钙的MRS固体培养基从19份牦牛粪便样本中分离出91株乳酸菌,进一步采用牛津杯法筛选产细菌素的乳酸菌,并结合16S rRNA序列扩增测序鉴定该批乳酸菌.结果表明:在排除有机酸、过氧化氢等抑菌因素后,从91株乳酸菌中筛选到9株对大肠杆菌ATCC25922和金葡球菌ATCC25923有明显抑制作用的乳酸菌菌株,该9株菌株对蛋白酶敏感,初步认定为产细菌素乳酸菌;经16S rRNA序列扩增测序鉴定该9株菌分别为海氏肠球菌,屎肠球菌,蒙氏肠球菌株和植物乳杆菌,其对常见抗生素不耐药,可作为益生菌的候选菌株.     

贡嘎蝠蛾幼虫肠道菌群的分析

贡嘎蝠蛾(Hepialus gonggaensis)幼虫是名贵中药材冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的优势寄主.研究贡嘎蝠蛾幼虫肠道菌群,对研究蝠蛾的营养生理,提高幼虫成活率,进而人工培殖冬虫夏草具有重要意义.实验以四川康定采集的贡嘎蝠蛾为实验材料,对贡嘎蝠蛾幼虫的肠道细菌进行了分离和鉴定.实验结果表明,贡嘎蝠蛾肠道细菌都属低温菌,最适生长温度15 ℃,在15 ℃培养2 d后才长出典型菌落.从肠道中分离纯化出12个不同菌群,其中优势菌群为葡萄球菌,菌群数量为2.05×109 mL-1,检出率100%,应为幼虫肠道中的常住菌群,其它菌群检出率均低于50%,可能为肠道中的过路菌群.生化鉴定大多数菌群的符合值都较低,这与蝠蛾生活于高海拔高寒地区,其肠道微生物与常见微生物菌群有较大差异一致.     

菌群感应AHLs分子对小鼠肠道菌群多样性影响的分析

目的 探讨菌群感应信号分子N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl homoserine lactones,AHLs)对小鼠肠道微生物菌群构成的影响,为感染状态下肠道微生态的紊乱补充理论依据。方法 3-oxo-C10-HSL分子经腹腔注射小鼠后,于24 h分别在小鼠十二指肠及空回肠部位用拭子涂抹法取样,并通过Illumina Hiseq 2500高通量测序平台对样品16S rDNA测序,并进行微生物菌群分类构成及多样性分析。结果 在实验小鼠肠道内共检出22个细菌门,109个细菌属;对照组和3-oxo-C10-HSL处理组小鼠肠道不同部位菌群均以厚壁菌门(>50%)和变形菌门(>20%)为主,但两组在属水平菌群构成有明显差异,对照组优势菌属依次为葡萄球菌、埃希氏-志贺菌、乳球菌、假单胞菌、肠球菌,3-oxo-C10-HSL处理组优势菌属主要为肠球菌、埃希氏-志贺菌、葡萄球菌;多样性和丰度分析提示3-oxo-C10-HSL处理组肠道菌群多样性均有提高,大肠埃希菌属等主要优势菌丰度显著上升,而且空回肠部位的菌落丰度最高。结论 AHLs对小鼠肠道菌群构成影响较小,而对菌群内部某些特定类群结构变化影响较明显。     

驴源肠道乳酸细菌的筛选及生物学特性研究

以健康德州驴肠道内容物为样品,筛选驴源乳酸细菌。经形态学观察、分子生物学手段对菌种进行鉴定,并对筛选菌种的安全性能、生长特性、产酸性能、产酶性能、耐受性能及抑菌特性等进行初步研究。结果显示,本研究成功分离获得一株驴源乳酸细菌,经鉴定为屎肠球菌,编号HR-03;安全性试验表明,屎肠球菌HR-03不产生溶血圈,无潜在致病性;该菌株还表现出良好的耐酸和耐胆盐性能,且能够抑制致病性大肠杆菌生长。结果提示,屎肠球菌HR-03具有优良的生物学特性,可作为后续开发驴源益生菌制剂的候选菌种。     

肠球菌研究进展

肠球菌是人类和动物肠道正常菌群的重要成员。由于抗生素的广泛使用,使肠球菌的感染不断上升,成为医院内感染的主要致病菌。由于肠球菌携带多种毒力因子和具有多重耐药性、天然耐药性以及获得性耐药等特性,给临床肠球菌感染的治疗和控制带来了极大的困难。文章就肠球菌生物学特性、分类地位、致病机制、耐药性、实验室诊断以及治疗等方面进行阐述。     

肠道菌群模式菌株的HPLC分离条件优化及其表征

采用高效液相色谱分别考察了肠道菌群模式菌株及各单菌的色谱行为,成功建立了HPLC分离分析肠道菌群模式菌株的最佳洗脱方法,即阶梯式梯度洗脱.结果显示,肠道模式混合菌株经过高效液相色谱分离得到5个明显的洗脱组分,分别为0.10 mol·L~(-1)(脆弱拟杆菌和金黄色葡萄球菌)、0.20 mol·L~(-1)(青春双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌)、0.25 mol·L~(-1)(粪肠球菌)、0.30 mol.L~(-1)(奇异变形杆菌、克雷伯肺炎杆菌和产气荚膜梭菌)和0.50 mol·L~(-1)(大肠杆菌和产气荚膜梭菌)洗脱峰.色谱柱的上样浓度为培养菌液(OD600=0.576)的5倍时,其最大上样量为500μL,且方法分辨率高、重现性好、结果稳定.     

乳酸菌的分离和鉴定及其1,3-PDO的活性测定

从红原取样的酸奶中分离出7株乳酸菌,根据《伯杰氏细菌鉴定手册》和《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》,依据细菌的菌落特征、菌体形态、生理生化特性初步鉴定这7株乳酸菌分别属于乳球菌属,链球菌属,乳杆菌属.并且通过1,3-丙二醇氧化还原酶活性检测,发现其中一株具有活性.     

一株高耐受性乳酸菌的分离及其在木质纤维素发酵生产高浓度L-乳酸中的应用

利用资源丰富的纤维质原料生产新一代可降解聚乳酸塑料的单体原料L-乳酸,是目前一个极为重要的研究热点和产业方向。从高温纤维乙醇发酵介质中分离到一株高耐受性乳酸菌,经16S rDNA分子生物学鉴定为乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）,并命名为P.acidilacticiDQ2。此菌株具有极为优异...     

沟眶象成虫肠道好氧及兼性厌氧菌群的研究

对沟眶象(Eucryptorrhynchus chinenis)成虫的肠道菌群进行了分离和鉴定.结果表明,葡萄球菌属(Sta phylococcus)是优势菌群.同时,还分离出了芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseidp,pmas)、邻单胞菌属(Plesiomonas)、芽孢八叠球菌属(Sporasarcina)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、埃希氏菌属(Escherichia)、孤菌属(Vibirio)等共9个属.利用纤维素碳源培养基分离到了纤维素降解菌,它们与沟眶象营养及消化生理可能有极为密切的关系.     

新生儿粪便中分离的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)RZ18提高肠道黏膜屏障完整性

本实验旨在研究新生儿粪便样品中乳酸菌对肠道黏膜屏障完整性的促进作用.从健康新生儿粪便中分离出15株乳酸菌.对这些乳酸菌进行耐酸、耐胆盐和细胞黏附能力的实验,分析其定植能力.再通过荧光素酶报告基因分析实验、实时荧光定量PCR(Real-timePCR)、酶联免疫吸附测定检测各菌发酵上清液对HT-29细胞中黏蛋白2(mucin2,MUC2)表达的影响,结果显示粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)RZ18发酵上清液对MUC2启动子活性、转录和翻译水平均有增强作用.并通过Real-timePCR、免疫印迹实验检测E. faecalisRZ18发酵上清液对肠道黏膜屏障中闭锁蛋白、封闭蛋白1、闭锁小带蛋白1表达的影响,发现该菌可以促进这些紧密连接蛋白的表达.最后用牛津杯法研究发现该菌对藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌和大肠杆菌等多种致病菌生长具有抑制作用.上述结果说明,新生儿肠道早期定植的E. faecalis可能对新生儿肠道黏膜屏障完整性的发育具有促进作用,有望应用于炎症性肠病的预防与治疗.     

一株乳酸菌产类细菌素Enteriocin LK-S1的初步研究

从鸡肠道分离的 5 9株乳酸菌中 ,筛选出一株产类细菌素的乳酸菌 ,编号为SE - 81.初步鉴定为肠球菌属 (Enterococcus) .在排除有机酸和过氧化氢的干扰作用后 ,SE - 81菌株对溶壁微球菌(Micrococcuslysodeikticus)、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)和枯草杆菌 (Bacillussubtilis)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌 (Escherichiacoli)及鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium)等革兰氏阴性菌有强烈的抑制作用 .用胰蛋白酶处理发酵上清液后 ,抑菌活性丧失 .因此初步认为该菌株产生一类具有广谱抑菌活性的类细菌素物质 ,命名为EnteriocinLK -S1.它具有较广的抗菌谱 ,作用pH在 4 .0～ 6 .0 ,有很好的热稳定性 .     

瑞替普酶在乳酸乳球菌中的表达

为建立溶栓药物瑞替普酶(r PA)的乳酸菌表达系统,从实验室前期构建的大肠杆菌表达质粒p ET22b-rpa上扩增出目的基因rpa,将该基因与乳酸菌表达质粒pCYT连接,构建了pCYT-rpa质粒.此外,为提高r PA在乳酸乳球菌NZ9000中的稳定性,同时构建了rpa位于葡萄球菌(Staphylococcal)耐热核酸酶基因nuc下游融合表达的重组质粒pCYT-nuc-rpa.将质粒p CYT-rpa和p CYT-nuc-rpa分别电转化至乳酸乳球菌NZ9000中,经Nisin诱导表达,Western blot结果显示Nuc可提高r PA在乳酸乳球菌中的稳定性,从而增加了rPA在乳酸菌中的表达量.重组r PA及Nuc-rPA在复性后均具有溶栓活性,活性分别为800,U/L和1,000,U/L.