牛乳腺上皮细胞的快速分离和培养

以西门塔尔肉牛为材料,采集已被屠宰的奶牛乳腺组织,利用机械剪切组织块及胶原酶消化的方法,在体外进行原代乳腺上皮细胞分离和培养.结果发现,组织块接种法成功地培养出原代乳腺上皮细胞,而胶原酶消化法没有成功.研究表明,组织块接种法是一种简便快速的牛乳腺细胞培养方法,经数次传代后,细胞增殖依旧旺盛.     

牦牛乳腺上皮细胞的体外培养的研究

采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牦牛乳腺上皮细胞．形态学观察表明,培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征．染色体数目分析表明,细胞核型稳定,在离体培养条件下不发生转化．牦牛乳腺上皮细胞染色体数目为60,染色体组型为2n=60．     

小白菜子叶离体培养再生系统的建立

对４个小白菜栽培品种的离体培养条件进行研究，结果表明：在含有ＢＡ２＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上，添加ＡｇＮＯ３４～６ｍｇ／Ｌ能显著提高所试小白菜品种不定芽的分化频率，ＡｇＮＯ３与ＡＢＡ配合使用不仅能提高其不定芽的分化率，而且还能抑制愈伤组织生长，本实验所建立的直接出芽程序的小白菜的遗传转化研究提供一个良好的再生体系。     

建立人输卵管上皮细胞无血清培养

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养,DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10,在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中,HOEC可贴壁生长,生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％,一般可传代2次,最长培养可维持38d,细胞形态与有血清培养差别不大,虽然无血清培养HOEC的生长速度、密度、传代成功率远不及有血清培养,但能抑制成纤维细胞生长,维持较纯的上皮细胞。     

补骨脂离体培养研究

本文利用补骨脂的嫩茎、叶柄和叶片为外植体进行离体培养,均获得成功。其中以嫩茎培养的效果最好。培养基中附加成分对芽和根分化的影响较大,Ms基本培养基附加IBA 0.5、6—BA1(单位均为mg/l)时,芽的分化率最高;1/2Ms基本培养基附加IBA0.5时,根的诱导效果较好。大部分试管苗可移栽成活。     

用离体培养无性繁殖苦瓜

切取由苦瓜种子形成的试管苗的顶芽及带芽茎段,移植于附加４￣６ｍｇ／Ｌ ＺＴ或４￣６ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ的ＭＳ培养基上,可以促进芽的增殖,形成芽簇,每月每株可增殖４苗;移植于附加４ｍｇ／Ｌ ＺＴ及０．５ｍｇ／Ｌ ＫＴ或附加４ｍｇ／Ｌ ＺＴ及ＬＨ（水解乳蛋白）的培养基上,每月每株可增殖５苗。将幼苗接转于ＭＳ＋ＺＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上,生长健壮。丛芽生根选用大量元素减半的ＭＳ培养基,蔗糖浓度为２％效果     

兔角膜缘上皮细胞在体外壳聚糖共混膜上的培养及生物学鉴定

目的：探讨壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜作为兔角膜缘上皮细胞体外培养载体的可行性。方法：采用消化培养法,用特殊培养液在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上培养兔角膜缘上皮细胞,第7d应用免疫组化方法对培养细胞作生物学鉴别并在扫描电子显微镜下观察细胞形态。结果：上皮细胞AE1／AE5单克隆抗体免疫组化阳性,培养第7d的上皮细胞有多种细胞形态,细胞胞体饱满,相互通过突起连接,表面可见微绒毛。结论：兔角膜缘上皮细胞可在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上生长,并具有分裂增殖能力。     

戴瑞奶绵羊乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定

乳腺上皮细胞系是研究动物泌乳调控机制的理想细胞模型。实验采用组织块培养法结合差时消化法,分离纯化了戴瑞奶绵羊乳腺上皮细胞,并通过细胞形态学观察、生长曲线测定、免疫荧光染色、特异性基因表达检测和细胞染色体数目分析等多种方法对细胞进行鉴定。结果表明,分离得到的乳腺上皮细胞呈典型的“铺路石形”或“多角形”,细胞生长周期符合一般生物学规律且细胞染色体数为2n=54;细胞稳定表达CK7、CK8和β-casein基因,免疫荧光染色实验也显示细胞表达CK7。本研究成功建立了戴瑞奶绵羊乳腺上皮细胞系,为奶绵羊泌乳调控机制的研究奠定了基础。     

银杏成熟胚的离体培养研究

用银杏成熟胚为材料,在含不同激素或添加物的培养基上进行萌发出苗培养,结果表明：以６,７－Ｖ＋活性炭１．０ｇ／Ｌ＋水解乳蛋白１．０ｇ／Ｌ＋抗坏血酸１００ｍｇ／Ｌ为最适宜培养基;光照培养比黑暗培养好,培养基中添加０．１ｍ,ｇ／Ｌ的ＮＡＡ能有效地促进萌动胚的胚根伸长和发育成苗;植物激素６－ＢＡ不适合成熟胚的萌发,当其浓度为０．１－１．０ｍｇ／Ｌ时会抑制胚根生长并致胚芽发育畸形。     

人类输卵管上皮细胞培养

从１６例妇女的正常输卵管标本中获取壶腹部上皮细胞建立体外培养并传代，通过倒置显微镜和相差显微镜观察细胞形态及生长状况，所有标本的细胞均可在培养的６￣９ｄ形成融合的单层细胞，并可传代４￣６次，每次历时５￣７ｄ，最长的培养可维持３５ｄ，与提供标本的妇女的月经周期及年龄关系不大。     

孕激素对子宫内膜上皮细胞增殖调控机制研究进展

子宫内膜是卵巢激素的主要靶器官,女性进入青春期后,在下丘脑垂体的调节下,雌激素、孕激素出现周期性分泌,子宫内膜的形态和功能也随之发生改变.黄体期,血清中上升的孕激素可拮抗雌激素的作用,抑制子宫内膜上皮细胞的增殖,使其分化为具有分泌功能的上皮细胞.孕激素抑制子宫内膜上皮细胞增殖并促使其分化的机制主要是:一方面孕激素通过降低子宫内膜上皮细胞雌激素受体(ER)的表达,降低颗粒细胞分泌细胞色素P450芳香化酶的表达和活性,增加17β-HSDII在子宫内膜局部的表达和活性,增强雌激素代谢,从而抑制雌激素对子宫内膜上皮细胞的促增殖作用,间接抑制子宫内膜上皮细胞的增殖;另一方面孕激素通过与子宫内膜上皮细胞的孕激素受体结合后进入核内,调节细胞周期调控蛋白、原癌基因等参与细胞周期调控的分子表达,直接抑制子宫内膜上皮细胞的增殖并促使其分化.     

三七悬浮细胞高密度培养生产人参皂甙和多糖

研究了在摇瓶培养中接种量和各种营养成分对三七悬浮细胞高密度培养的影响，结果表明，磷起始浓度为３．７５ｍｍｏｌ／Ｌ对其细胞培养较佳，接种量对细胞量和产物形成量有一定程度影响，而对细胞倍增数影响更大，在摇瓶培养中采用１２层纱布较棉花塞有利于氧代应，进一步考察了培养过程中糖和其它营养成分的补料策略，发现仅添加合适浓度的糖可使干细胞达到３５ｇ／Ｌ，人参皂甙和多糖分别可高达１．５７ｇ／Ｌ和５．２２ｇ／Ｌ；其     

自体细胞来源的组织工程皮肤及其实验研究

利用患者自体来源的皮肤细胞,在经过短时间的体外培养后构建组织工程皮肤,并对其移植后的转归进行动物实验观察.分离培养头皮中的角质形成细胞及创面来源的成纤维细胞,并在体外进行传代扩增.利用三维立体培养系统构建复合细胞膜片,移植于裸鼠背部全层缺损创面,以单层细胞膜片为对照,对其转归进行大体及病理学观察.体外分离培养的皮肤细胞在体外扩增2周后即可用于构建复合细胞膜片,在移植覆盖裸鼠全层皮肤创面后,伤口愈合良好,移植2月后的病理结果显示皮肤结构明显优于单层膜片移植.证明利用患者自体来源的皮肤细胞可快速构建组织工程皮肤,有望成为治疗大面积深度烧伤患者的途径之一.     

中国红豆杉悬浮细胞高密度培养

采用３０ｇ／Ｌ起始糖浓度,通过在细胞对数生长后期补料的方法成功地在２５０ｍＬ摇瓶和１．５Ｌ搅拌式生物反应器中进行了细胞高密度培养,经２０ｄ培养,细胞干重超过２５ｇ／Ｌ。在反应器培养中,次生代谢产物紫杉烷的产量较低。通过高密度培养,明显增加了细胞量,还可以提高反应器中紫杉烷的产量。     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外发育的影响，将小鼠２细胞胚胎与人输卵管上皮细胞进行体外共培养．结果显示：无论原代培养还是传代培养的人输卵管上皮细胞都可使胚胎发育率提高，发育速度加快．经传代４次以后的细胞对胚胎发育的促进作用有下降的趋势，所以传代第１至第４代是应用于共培养的最佳选择．同一代细胞中已贴壁稳定生长的细胞对胚胎发育的促进作用比刚经传代尚未贴壁的细胞大．     

沙棘籽渣黄酮类化合物诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的研究

探讨了沙棘籽渣黄酮类化合物(flavonoids from seed residues of Hippophae rhamnoidesL.FHR)对人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡的影响和其作用机制.采用MTT法、Wright染色法、流式细胞术及免疫细胞化学等方法,观察在不同浓度和作用时间时,FHR对Bcap-37细胞生长抑制和细胞凋亡效应.结果显示FHR在10~1 000μg／mL等浓度范围内可以诱导人乳腺癌细胞Bcap-37产生典型的凋亡形态学变化;1 000 μg／mL FHR处理24 h、48 h和72 h后使Beap-37细胞周期S期减少,G0／G1期增加;FHR处理实验组p53蛋白表达较对照组明显增加,bcl-2蛋白表达较对照组降低.提示FHR对人乳腺癌Bcap-37细胞的生长抑制主要通过诱导细胞凋亡,且p53蛋白的增加和bcl-2蛋白的减少是其诱导细胞凋亡的机制之一.