血清抗Sm抗体ELISA检测方法的建立

目的：建立血清抗Sm抗体的ELISA检测方法。方法：应用纯化的Sm抗原,采用棋盘滴定等方法确立ELISA方法检测血清抗Sm抗体的最适实验条件。结果：建立了血清抗Sm抗体的ELISA检测方法。SLE患者血清抗Sm抗体的阳性率为29．2％,正常人和其它自身免疫病患者未查到此抗体。结论：本文建立的血清抗Sm抗体检测方法敏感性达到国外进口试剂盒的水平,且操作简便,重复性好,因此临床很有实用价值。     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

SLE患者血清抗Sm抗体免疫PCR的方法学评价

目的为SLE患者血清抗Sm抗体提供免疫PCR测定方法.方法评价免疫PCR方法检测抗Sm抗体的特异性、敏感性、重复性和相关性.结果免疫PCR方法测定SLE患者血清抗Sm抗体特异性强,敏感性是ELISA方法的107倍,而且与ELISA方法呈高度正相关.结论免疫PCR方法用于血清抗Sm抗体测定具有临床实用价值.     

CHO-HPA-1a细胞快速检测人血小板同种(异型)抗体方法的建立

应用蛋白印迹(WB)、悬浮细胞免疫荧光流式细胞分析(SIFT)、单抗分析血小板抗体检测(MAIPA)以及限制性内切酶片段长度分析对新生儿血小板减少患儿母体作基因分型和血清分型比较研究.从两例新生儿血小板减少症患儿母亲的血清中检测到了抗β3抗体.CHO-SIFT方法的敏感性和MAIPA分析相似.和间接免疫荧光或MAIPA分析相比,WB分析法敏感性稍低,可能是SDS使HPA-1a抗原决定簇发生了改变.以较温和条件对CHO细胞进行固定时,不但细胞表面的HPA-1a抗原表位未受影响,而且细胞的保存时间被大大的延长.这些结果表明,作为分型血小板的替代物,固定化的细胞可能更适合于一般妇幼保健门诊对大量血清样品进行筛查.研究结果表明,表达有重组β3整合素的CHO细胞可以用来检测母体血清中的抗HPA-1a同种(异型)抗体.     

猴腺病毒Ⅰ型间接免疫荧光检测方法的建立与初步应用*

摘要: 目的建立检测血清中猴腺病毒Ⅰ型( SAdV-1) 抗体的间接免疫荧光方法( IFA) ,为检测实验猴群中SAdV-1 的感染情况提供参考依据。方法用SAdV-1 病毒感染BSC-1 细胞,待50% 细胞出现病变时,用胰蛋白酶消化以 20μL 1 × 107 个/mL 浓度的细胞液滴到24 孔镀膜玻片上,丙酮固定。利用制备的抗原片通过浓度滴定确定猴血清、 羊抗猴二抗最佳工作条件。对IFA 进行特异性、敏感性、重复性验证并初步检测猴血清样本。结果建立了SAdV- 1 抗体的间接免疫荧光检测方法。在采集的21 份猴血清样本中,检出SAdV-1 抗体阳性9 例,12 例血清检测为阴 性。结论方法具有良好的特异性和稳定性,可作为SAdV-1 检测的可靠方法。     

长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法的建立与应用

摘要: 目的建立长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种SeV,制备鸡胚尿囊液正常抗原和SeV 特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0. 1 μg /mL、2 μg /mL 和1∶ 5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为9. 6% 和8. 4%,批间平均变异系数分别为9. 0% 和5. 9%; 检测灵敏度为1∶ 10 240; 与沙鼠小鼠肝炎病毒( MHV) 、小鼠肺炎( PVM) 、呼肠孤病毒3 型( Reo3) 均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA 方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好,检测结果,准确、可靠。可用于长爪沙鼠体内SeV 抗体的检测。     

BK病毒样颗粒制备及血清学检测方法的建立

将BK病毒 ( BK polyomavirus, BKV )的结构蛋白VP1 通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达, 并自发装配成BKV病毒样颗粒(BK virus like particles, BK VLPs). 以BK VLPs作为包被抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的血清学检测方法: 抗原最佳包被浓度为3.1 μg/mL, 血清最佳稀释度为1∶200, 酶标抗体最佳工作稀释度为1∶40000.并以该方法在国内对540名健康成年人进行BKV抗体阳性率情况调查, 结果显示我国健康成年人BKV抗体阳性率为79.94%.     

有氧和力竭游泳运动对DNA疫苗免疫效果的影响及机制研究

将48只雌性C57BL/6小鼠随机分成对照组(16只),有氧游泳运动组(16只)和力竭游泳运动组(16只).在小鼠分别进行6周有氧和力竭游泳运动后,肌肉注射DNA疫苗3次,每次间隔14d.末次免疫后14d,处死小鼠,收集血液和脾细胞,检测抗原特异性的体液和细胞免疫反应.为了进一步研究不同强度有氧运动影响疫苗的免疫效果的作用机理,小鼠运动6周后,处死小鼠,收集脾细胞分析CD4⁺CD25+CD25⁺调节性T细胞(Treg)的数量及其抑制功能和IL-2的变化.结果显示:和对照组比,有氧运动增强了抗原特异性的细胞免疫反应和细胞毒T淋巴细胞反应(CTL);与之相反,力竭运动抑制抗原特异性的细胞免疫反应和CTL反应.但两种不同强度的游泳运动都不影响血清中抗体的产生.机理研究发现,力竭运动增加Treg细胞的数量及抑制功能,而有氧运动并不影响Treg的数量和功能,但增加脾细胞IL-2的表达.以上结果表明:1)有氧和力竭运动不影响DNA疫苗的体液免疫效果;2)有氧运动可能通过增加脾细胞中IL-2的产生而增强DNA疫苗的细胞免疫效果;3)力竭游泳运动可能通过改变Treg的数量及其抑制功能而削弱DNA疫苗的细胞免疫效果.     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

噬菌体展示的白色念珠菌热休克蛋白90特异表位在小鼠体内诱发的免疫应答

将展示白色念珠菌热休克蛋白(HSP)90特异表位的杂合噬菌体作为抗原免疫C57BL/6J小鼠,以检测该抗原在小鼠体内诱发的体液免疫和细胞免疫.实验结果表明:抗原PA刺激机体产生了较强的抗白色念珠菌HSP90特异性抗体;脾CD4 T和CD8 T淋巴细胞出现率明显增高;脾细胞分泌IL-2的能力有增高趋势.此外,将免疫后的小鼠通过尾静脉进行系统性白色念珠菌感染,采用组织病理学方法观察了抗原对小鼠肾脏白色念珠菌寄居数量的影响,实验结果表明,抗原对系统性白色念珠菌感染具有明显的保护作用.     

HLA-DQ is epistatic to HLA-DR in controlling the immune response to schistosomal antigen in humans

Antigens that produce an antibody response in some members of a species may fail to do so in others. The response to an antigen is controlled by a gene termed the immune response (Ir) gene, which is transmitted as a single dominant trait. We have provided evidence for similar immune suppression (Is) genes which control non-responsiveness through the antigen specific suppressor T cell. The non-responsiveness is also dominantly inherited and the Is genes are linked to the histocompatibility (HLA) antigen system. Here we report that the HLA-DR2 molecule from a non-responder haplotype (HLA-Dw12-DR2-DQwl) is required for the proliferative T cell response to schistosoma japonicum (Sj) antigen, as a restriction element, indicating that the HLA-DR2 is the product of the Ir gene, and that the HLA-DQwl molecule of the non-responder haplotype is important in the antigen-specific suppression of the response to this antigen, suggesting that it is the product of the Is gene. We therefore conclude that the HLA-DR and DQ molecules, which are controlled by the distinct genes in the MHC multigene family, regulate immune response and immune suppression and that the gene for HLA-DQ is epistatic to that for HLA-DR in controlling the immune response to schistosomal antigen in humans.     

B7-2基因工程抗体的制备及体内外抗B淋巴瘤作用研究

 构建B7-2人-鼠嵌合抗体基因表达质粒pIRES/ch3C8,经脂质体法转染真核表达细胞株CHO制备B7-2人-鼠嵌合抗体（命名为ch3C8）。该抗体能够识别人恶性B淋巴瘤细胞株Raji表面的B7-2分子并诱导其凋亡。ch3C8结构中来源于人Ig 的Fc段可介导高效的ADCC及CDC效应。经ch3C8结合的Raji细胞接种于BALB/c裸鼠后的致瘤性消失。该抗体在 B7-2相关肿瘤的生物治疗中具有潜在的应用价值。     

猴免疫缺陷病毒(SIV)双抗原夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用

目的研制灵敏、特异的检测血清中猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodeficiency Virus,SIV)的双抗原夹心ELISA(dsELISA)诊断试剂盒并进行初步应用。方法采用原核表达系统表达并纯化的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)包膜蛋白(gp41)作为包被用抗原,建立dsELISA诊断方法。通过优化反应条件和筛选试剂,研制ELISA诊断试剂盒,经敏感性、特异性和重复性试验考核试剂盒的质量,并与美国BIORELIANCE公司试剂盒进行比较,将结果经美国VRL验证,判断本试剂盒与美国BIORELIANCE公司试剂盒两者之间的符合率。结果该试剂盒具有良好的灵敏度、稳定性和准确性。4℃条件下能保存8个月,与其他血清无交叉反应,与美国BIORELIANCE公司试剂盒检测结果的符合率为96%。结论研制成功的实验猴SIV ELISA检测试剂盒可用于临床检测。     

抗巨片形吸虫同型抗体在动物巨片形吸虫感染所致的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应( ADCC )免疫应答作用的研究

以印尼短尾羊（ITT）和美利奴细毛羊（Merino）两种品系的绵羊为实验动物，研究动物感染巨片形吸虫后所产生的抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应的免疫应答。结果显示：对巨片形吸虫感染具有抗性的印尼短尾羊不产生特异性的IgG2，而易感品系的美利奴细毛羊感染巨片形吸虫后体内产生高滴度特异性IgG2抗体、特异性IgG2抗体在免疫应答中起着封闭抗体的作用，抑制巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应。由于印尼短尾羊不产生特异性IgG2抗体，对巨噬细胞抗体依赖性细胞介导的细胞毒反应不产生抑制作用，因此印尼短尾羊对巨片形吸虫的感染具有一定的抵抗力。使用纯化的IgG1和IgG2进行体外杀虫试验，结果IgG1有很强的促进体外杀虫效果，而自感染巨片形吸虫的美利奴细毛羊血清标本纯化的IgG2没有体外杀虫作用。体外实验还显示嗜酸性粒细胞在免疫血清、补体和IL-5的共同参与下具有较强的杀虫作用。     

BA-ELISA法用于血清中白喉抗毒素检测的实验探讨

56例精白类免疫前后配对血清,用BA-ELISA、常规ELISA和PHA等三种方法作平行比较试验,其结果:PHA法GMT免疫前1.83;免疫后62.43,抗体滴度升高34.1倍;常规ELISA法GMT免疫前4.86;免疫后340.8,抗体滴度升高70.05停;BA-ELISA法GMT免疫前9.05;免疫后1037.05,抗体滴度升高114.6倍。以免疫后PHA法GMT62.43作为敏感度1,则常规ELISA法比PHA法敏感5.46倍;BA-ELISA法比PHA法敏感16.61倍。而BA-ELISA法用于血表中白喉抗毒素检测取得了非常满意的结果。     

Expression of cell-surface HLA-DR, HLA-ABC and glycophorin during erythroid differentiation

The unexpected discovery that Ia-like (HLA-DR) antigens in humans were present on blast cells from acute myeloblastic leukaemia led to the finding that normal granulocytic progenitors, in contrast to their mature descendents, also expressed HLA-DR antigens. Thus, anti-Ia sera stain a proportion of myeloblasts in normal bone marrow, inhibit myeloid progenitor (CFU-GM) colony formation in the presence of complement and can be used to label and separate CFU-GM on a fluorescence-activated cell sorter (FACS). Winchester et al. subsequently reported that erythroid progenitors (BFU-E and CFU-E) were also inhibited or killed by anti-Ia (p28,37) and complement. These observations raised the possibility that HLA-DR (or presumptive I-region equivalent) products might have a regulatory role in early haematopoiesis. We have now analysed HLA-DR and HLA-ABC antigen expression on normal erythroid progenitors using monoclonal antibodies to non-polymorphic determinants and fluorescence-activated cell sorting. In parallel experiments, we tested a monoclonal antibody to glycophorin, a well defined erythroid-specific cell-surface membrane glycoprotein. We report that HLA-DR, HLA-ABC and glycophorin are all expressed at various stages during erythroid differentiation.     

反复输血患者血小板相关抗体检测及临床意义

为探求血小板相关抗体的产生规律,评价血小板相关抗体筛查的临床意义,对解放军总医院43例反复输注血小板成分的患者采用ELISA方法进行HLA相关抗体筛查。8例结果为阳性,阳性率为18．6％。8例阳性患者的血小板输注次数均在20次以上,说明血小板相关抗体产生几率随着输注次数的增加而增高,选择适当时机进行血小板相关抗体筛查,根据抗体产生情况决定配型与否,既降低医疗成本,又能提高临床输注疗效。     

不同小鼠肝炎病毒对ELISA方法检测其血清抗体的影响

目的 建立小鼠肝炎病毒（Mouse Hepatitis Virus,MHV）血清抗体ELISA检测方法,用于本地区MHV的日常监测,以便对SPF小鼠感染状况及时作出判断。方法 选取3种MHV毒株MHV1、MHV-JHM和MHV-A59,通过L929细胞扩增培养获得纯化浓缩抗原并筛选适合包被抗原类型;免疫BALB/C小鼠,获得高效价免疫阳性血清;优化ELISA反应体系建立规范化的ELISA试剂盒并用于临床小鼠血清样品的检测。结果 筛选出适合本地区的MHV包被抗原类型为MHV1,建立了病毒扩增及浓缩纯化方法,制备的MHV抗血清达到同批次大量高滴度的水平,可作为标准化质控血清。包被抗原、待检血清和酶结合物最佳工作浓度分别为4. 0μg/m L (10 -7. 73 /0. 1 m L TCID50)、1∶40和1∶4 000稀释;批次内和批次间平均变异系数分别为5. 13%和5. 57%;检测灵敏度为1∶4 000稀释;与小鼠仙台病毒（SV）、小鼠肺炎病毒（PVM）、呼肠孤病毒III型（Reo3）、小鼠细小病毒（MVM）和鼠痘病毒（Ect）阳性血清均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于10%。对165份血清样品进行检测,阳性血清相符率97. 37%（37/38）,阴性血清相符率92. 19%（118/127）。结论 本研究建立的ELISA方法检测小鼠血清MHV抗体具有较高的特异性、敏感性和结果可重复性,可以用于本地区MHV日常病原学监测,以便对小鼠感染状况作出准确判断。     

Mapping CD20 molecules on the lymphoma cell surface using atomic force microscopy

Atomic force microscopy (AFM) was used to locate CD20 molecules on the surface of lymphoma Raji cells. Rituximab (a monoclonal antibody against CD20) molecules were linked onto the AFM tip via a polyethylene glycol (PEG) linker. Raji cells were adsorbed onto glass slides coated with poly-L-lysine. First, the CD20 distribution in a local area of the cell surface was visualized using the AFM lift scan mode. Second, 16 × 16 force curves were obtained from the same cell area to construct the CD20-rituximab binding force map. Finally, free rituximab was added to block the CD20 molecules on the cell surface and the lift phase image and CD20-rituximab force map were obtained again. The experimental results indicated that when the lift height was greater than the length of the PEG linker, no recognition sites were observed in the lift phase image. However, as the lift height decreased to the length of the PEG linker, some recognition sites were observed in the lift phase image and these sites were generally consistent with the pixels in the force map. After blocking, both the recognition sites in the lift phase image and the gray pixels in the binding force map decreased markedly. These results can improve our understanding of the distribution of protein molecules on the cell surface and facilitate further investigations into cellular functions.