蟾蜍（Bufo japonicus）细胞溶素基因筛选用探针的制备

利用阴离子交换、凝胶过滤和高压液相柱层析对细胞溶素基因进行了纯化，获得了纯度极高的酶样品。经ｌｙｓｉｌ内肽酶进行定点酶切后，利用高压液相柱层析纯化出了该酶的多个短肽片段。其中，经测序获得了３个短肽片段的氨基酸序列。根据两栖动物中密码子的使用频率，可推测出其相应的ｃＤＮＡ的核苷酸序列，进而制备出了３个ｃＤＮＡ探针。利用这些合成的探针，便可从精子ｃＤＮＡ文库中筛选细胞溶素基因。     

扩展青霉（Penicilliumexpansum）PF868脂肪酶的纯化 …

扩展青霉（Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ）ＰＦ８６８所脂肪酶通过硫酸铵沉淀纤维素柱层析以及Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ２００柱层析等步骤被纯化了７４倍。最终比活力为６９．７ｕ／ｍｇ。纯化后的脂肪酶经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯和微内径高效液相色谱纯。分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ确定为２８．４４ＫＤ。脂肪酶Ｎ－端氨基酸序列测定的结果是：ＡＴＡＤＡＡＡＡＦＰＤ－这与其他一些真菌产的脂肪酶的序列具有国闫的同源性。     

129小鼠CgA基因cDNA5‘端部分片段及CgA基因的克隆

通过ＲＴ－ＰＣＲ方法,从１２９小鼠脑组织中克隆到ＣｇＡ基因ｃＤＮＡ５‘端部分片段,序列分析结果表明：所克隆到的片段序列与文献中完全一致,以此片段为探针,从１２９小鼠基因组库中筛选获得阳性噬菌体１－１,克隆了ＣｇＡ基因,并与文献中的小鼠ＣｇＡ基因限制性内切酶图谱进行了比较分析。     

人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆与表达

用脂多糖诱导正常人单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总ＲＮＡ，以特上物经逆转录ＰＣＲ扩增出粒细胞集落刺激因子ｍＲＮＡ和ｃＤＮＡ，将其插入经改造的分泌型表达载体ｐＩＮ－ｏｍｐ Ａ，并转化受体菌Ｅ．ｃｏｌｉ。克隆的ｃＤＮＡ通过限制性酶双酶切的３＇端、５＇端及中间序列探针分子杂交鉴定，结果与预期一致。表达质粒在大肠杆菌哟ＩＰＲＴＧ诱导，粒细胞集落刺激因子被分泌到细菌的周质中。产物提取后     

盐藻磷酸甘油脱氢酶基因cDNA文库的构建

采用Ｌａｍｂｄａ ｇｔ１０载体构建了盐藻ｃＤＮＡ文库，文库大小为１０＾６／ｍＬ插入片段平均长度大于１ｋｂ。根据果蝇，兔，鼠编码其３－磷酸甘油脱氢酶基因的辅酶ＮＡＤ的结合功能区保守序列设计一对引物，大小分别为２１ｂｐ和１８ｂｐ。ＰＣＲ扩增得到与果蝇相同的２９０ｂｐ特异扩增片段，以该片段为探针，采用缺口平移系统标记原位杂交，从盐藻ｃＤＮＡ文库中获得３６个３－磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆。     

植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅱ)──番茄幼苗cDNA文库构建与植酸酶基因筛选

采用异硫氰酸胍法从发芽３～４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ．以ｍＲＮＡ为模板,Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ．将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ接头连接后克隆到表达载体λｇｔ１１的单一ＥｃｏＲＩ位点,经体外包装后感染宿主菌Ｙ１０９０,成功地构建了完整的番茄幼苗ｃＤＮＡ文库．用颜色筛选法筛选重组子,然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选,得到两个阳性克隆．挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化ＤＮＡ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,显示确有外源ＤＮＡ存在．该插入片断序列测定正在进行．     

恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱

恶臭假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＧ７）携带的质粒ＮＡＨ７，经限制性内切酶ＥｃｏＲＩ切割后，产生含有萘降解酶全部基因（２４，６ｋｂ）的片段，此片段插入到载体ｐＵＣ１１９的多克隆位点，构成了ｐＫＡＯ质粒，此质粒经ＨｐａＩ，ＥｃｏＲＩ酶切获得的５．１ｋｂ片段亚屯隆到ｐＵＣ１１９中，衍生出ｐＮＮ１质粒，绘制出内切酶图谱。从ｐＮＮＩ质粒上切下含目的基因ｎａｈＩ、ｎａｈＮ和ｎａｈＬ的ｋｐｎＩ－ｋｐｎＩ片段（２．３ｋｂ）．正向插入载体ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋中获得重组质粒ｐＮＮ２，反向插入为ｐＮＮ３，将其转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中，目的基因得以大量增殖。     

豌豆中GPAT基因编码cDNA的克隆及分析

参照国外报道的豌豆ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，通过ＲＴＰＣＲ技术，从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了ＧＰＡＴ基因的编码ｃＤＮＡ片段，并将其纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，经ＮｃｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切鉴定，所得的重组质粒中含有１３８０ｂｐ左右的片段．采用ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶进行酶切，酶切图谱分析表明所克隆的豌豆ＧＰＡＴ基因编码ｃＤＮＡ的酶切图谱与国外所报道的该基因ｃＤＮＡ的酶切图谱一致，暗示了该基因在进行上具有一定的保守性．     

狗脑抗吗啡镇痛肽“60a”的分离纯化及部分一级结构

本实验室从正常狗脑中又分离获得一个暂称这为“６０ａ”的肽。冻干粉经ＳｅｐｈａｄｅｒＧ－５０和羧甲基纤维素ＣＭ２２柱层析，再经反相高效液相层析纯化得最后样品，经ＳＤＳ电泳和等电聚焦电泳鉴定均为一条带，分子量约８０００，等电点在ｐＨ７．８左右；Ｎ－末端氨基酸为Ｍｅｔ；自Ｎ－末端的部分氨基酸序列为：Ｈ２Ｎ－Ｎｅｔ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｌｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｔ     

不同纬度野生大豆种群间的遗传变异

选用了经初步筛选的２０个短随机序列引物和２个长随机序列引物对５个不同纯度来源的野生大豆进行了ＤＮＡ随机扩增,其中有１９个引物扩增出多态性片段,区获得７０个ＲＡＰＤ多态性片段,平均每个引物３．６８条,运用自编的计算机程序对扩增进行聚类分析。     

禽流感病毒H5N1亚型RNA聚合酶蛋白表达纯化及晶体生长

通过使用原核表达载体大量表达H5N1病毒RNA聚合酶亚基PA-C257,PB1_N25,再经过GST亲和层析和Sephadex G-200层析柱纯化,获得了高纯度的蛋白复合体.采用悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体,在1～1.5mol/L乙酸钠和pH7.9条件下获得了理想的晶体,为解析禽流感病毒RNA聚合酶三维结构并进一步认识其生物功能奠定了基础.     

氯桥联镉（Ⅱ）一维配位聚合物的合成及晶体结构研究

通过N,N-二甲基甲酰胺（L）配体与二氯化镉反应合成了一种新的一维的以氯原子为桥的桥连一维聚合物：{CdC l2[（CH3）2NCHO]2}n,并通过X射线单晶衍射对其进行了表征,配合物1属于单斜晶系,C2/c空间群,其晶胞参数为a=12.9073（14）,b=13.5631（15）,c=6.8759（12）,α=90°,β=91.9650（10）,°γ=90,°Z=4,V=1203.0（3）3,Dc=1.821g/cm3,μ=2.234mm-1,F（000）=648,R1=0.0210,wR2=0.0563.该配合物是中心对称的以氯原子为桥的一维聚合物,镉离子与分别来自2个氯原子和2个L配体的2个氧原子发生配位作用,形成一个六配位的以金属镉原子为配位中心的八面体几何构型,而且,一维聚合链之间还通过分子间的C-H…C l弱作用形成了一个二维的网状结构.     

双氰胺根离子桥联钴（Ⅱ）一维聚合物的合成及晶体结构研究

以双氰胺钠[Na（dca）]和N,N-二甲基甲酰胺（L）为共配体与二氯化钴反应合成了一种新的一维的以双氰胺为桥的桥联聚合物：{Co（dca）2[（CH3）2NCHO]2}n.该配合物通过元素分析、红外光谱及X射线单晶衍射对其进行了表征,配合物1属于单斜晶系,C2/m空间群,其晶胞参数为a=13.554（2）,b=7.3858（10）,c=8.1046（13）,α=90o,β=112.412（2）o,γ=90o,Z=2,V=750.05（19）3,Dc=1.493g/cm3,μ=1.161mm-1,F（000）=346,R1=0.0232,wR2=0.0632.该配合物是一个既是轴对称又是中心对称的一维结构,钴离子与分别来自2个dca的四个氮原子和2个L配体的2个氧原子配位,形成六配位的八面体几何构型,整个分子显示了一个以dca为桥的一维链结构,链和链之间通过分子间弱的C-H…N氢键作用形成了一个二维的网状结构.     

一个含有螺旋状水链的三维超分子配合物［Mn（C19 H9 N3 O4）（H2 O）4］·7H2 O的合成与结构表征

利用一个新的有机配体L与乙酸锰为初始反应物[ L ＝4,5-二氮杂芴-9-[3,5-二羧基]苯亚胺],通过常规的方法合成了一个新的含有螺旋状水链的三维超分子配合物,[Mn（C19H9N3O4）（H2O）4]·7H2O （1）,并通过元素分析、红外光谱和X-射线单晶衍射方法对化合物的结构进行了表征．结构分析表明化合物1属于正交晶系, P212121空间群;晶胞参数：a＝0．99573（8） nm,b＝1．34347（12） nm,c＝2．06644（18） nm．化合物1展示了一个由新颖的螺旋状的水链和[Mn（C19H9N3O4）（H2O）4]构筑单元通过氢键作用而形成的三维超分子结构．     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

Antigenic epitope peptides of influenza H3N2 virus neuraminidase gene based on experiments

The neuraminidase (NA) in viral surface is one of the main subtype-specific antigen of influenza type A viruses.Neuraminidase is an enzyme to break the bonds between hemagglutinin (HA) and sialic acid to release newly formed viruses from infected cells.In this study,the H3N2 subtype virus NA genes were sequenced and NA proteins were screened for B-cell epitopes and assessed based on immunoinformatics.Based on this results,four peptides DR6,EY7,VG8 and RE8 (covering amino acid residues 151-156,368-374,398-405 and 428-435,respectively) of the NA protein were synthesized artificially.These peptides were used to immunize New Zealand rabbits subcutaneously to raise antisera.Experimental results showed that these four peptides were capable of eliciting antibodies against H3N2 viruses in a specific and sensitive feature,detected in vitro by enzyme-linked immunosorbent assay.Moreover,hemadsorption anti-releasing effects took place in three three-antisera-mixtures at a dilution of 1:40.Alignment using NA gene database showed that amino acid residues in these four epitope peptides were substituted at specific sites in all the NAs sequenced in this study.It was suggested that these NA epitope peptides might be used in combination with HA proteins as vaccine antigens.     

不同浓度氮、磷对杜氏盐藻生长的影响

在实验室条件下,研究了不同氮(0、0.1、0.4、0.8、1.0、1.2 g/L)、磷(0、0.015、0.025、0.030、0.045、0.060 g/L)浓度下杜氏盐藻生长增殖的关系和特征,以及氮磷比(c(N)/c(P))变化等对该藻生长的影响。实验结果表明:杜氏盐藻对氮、磷有着较强的适应能力,浓度增大藻增长率增大,浓度继续增大反而抑制藻的增长,属于营养依赖型藻类。不同氮质量浓度梯度对杜氏盐藻生长具有显著性影响(P<0.05),但对杜氏盐藻生长率K的影响不显著(P>0.05),最适宜的氮浓度为1.0 g/L;不同磷质量浓度梯度对杜氏盐藻的生长和生长率K具有显著性的影响(P<0.05),最适宜的磷浓度为0.025 g/L。当c(N)/c(P)为40时,最适合杜氏盐藻的生长。     

甲酸镁框架化合物的原位溶剂热合成及晶体结构(英文)

100℃条件下,通过溶剂热原位合成反应,氯化镁和N,N-二甲基甲酰胺在甲苯中生成了一种甲酸镁框架化合物,(C3H3MgO6)n·n(C2H6NH2);并用元素分析、红外光谱和X-射线单晶衍射对该化合物进行了表征.在该化物中,中心Mg(Ⅱ)离子和甲酸根阴离子构建了一个立方形的三维金属-有机框架结构,客体二甲胺阳离子占据在它的孔道中.     

四川社鼠、针毛鼠及社鼠亚种间的比较探讨

在经典分类学中，社鼠和针毛鼠分类地位一直不是很明确，外形及头骨的形态差异微小，有关社鼠亚种的分类问题争论较多．基于在四川采集的标本，通过单因素方差分析和多变量分析，发现社鼠与针毛鼠主要在体长、腭后长及上颊齿等量度区别较明显；利用多变量分析和多因变量方差分析对社鼠的3个亚种处理，结果显示：社鼠亚种问的鉴别特征主要在于颧板宽、听泡长、下齿列等．     

酸碱调控的两个三价铁配合物的合成和结构研究

多齿配体N,N,N’,N’一四羟乙基乙二胺（简写为H4edte）和Fe（C10。）3-9H20或FeCl3’6H20在MeOH或MeOH／MeCN（体积比6：1）的溶液中合成了一个二核铁配合物[Fe：（H：edte）：]（C104）2（1）和一个有斗μ1,3-叠氮桥连的含NaCl型结构的三维配位聚合物（NMe。）2[FeNa（N3）6]（2）．x一射线晶体学表征结果显示,配合物1是个二核铁配合物,属于单斜晶系,空间群P2,／c,a=0．074401（9）nm,b=1．20539（1g）nm,c=1．7575（2）nm,d=T=90°,β=97．562（2）。,V=1．5627（3）nm3,Z=2;配合物2属于立方晶系,空间群尸2（1）3：a=b=C=1．27509（6）nm,α=β=y=90。,V=2．07311（17）nm’,Z=12．配合物1的结构中多齿配体H4edte只脱了两个醇羟基中的质子,且有一个醇羟基没有与金属配位．配合物2属于立方晶系,空间群为尸2（1）3,在配合物2中,多齿配体H。edte并未参与配位,只起到调节溶液酸碱性的作用,大阳离子NMe4＋则通过微弱的氢键与Fe一（μ1,3,-Nj）-Na组成的框架作用,起到了稳定框架的模板作用．