共查询到20条相似文献,搜索用时 187 毫秒
1.
利用阴离子交换、凝胶过滤和高压液相柱层析对细胞溶素基因进行了纯化,获得了纯度极高的酶样品。经lysil内肽酶进行定点酶切后,利用高压液相柱层析纯化出了该酶的多个短肽片段。其中,经测序获得了3个短肽片段的氨基酸序列。根据两栖动物中密码子的使用频率,可推测出其相应的cDNA的核苷酸序列,进而制备出了3个cDNA探针。利用这些合成的探针,便可从精子cDNA文库中筛选细胞溶素基因。 相似文献
2.
扩展青霉(Penicilliumexpansum)PF868脂肪酶的纯化 … 总被引:1,自引:0,他引:1
扩展青霉(P.expansum)PF868所脂肪酶通过硫酸铵沉淀纤维素柱层析以及Sephacryl200柱层析等步骤被纯化了74倍。最终比活力为69.7u/mg。纯化后的脂肪酶经过SDS-PAGE纯和微内径高效液相色谱纯。分子量经SDS-PAGE确定为28.44KD。脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是:ATADAAAAFPD-这与其他一些真菌产的脂肪酶的序列具有国闫的同源性。 相似文献
3.
通过RT-PCR方法,从129小鼠脑组织中克隆到CgA基因cDNA5‘端部分片段,序列分析结果表明:所克隆到的片段序列与文献中完全一致,以此片段为探针,从129小鼠基因组库中筛选获得阳性噬菌体1-1,克隆了CgA基因,并与文献中的小鼠CgA基因限制性内切酶图谱进行了比较分析。 相似文献
4.
用脂多糖诱导正常人单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总RNA,以特上物经逆转录PCR扩增出粒细胞集落刺激因子mRNA和cDNA,将其插入经改造的分泌型表达载体pIN-omp A,并转化受体菌E.coli。克隆的cDNA通过限制性酶双酶切的3'端、5'端及中间序列探针分子杂交鉴定,结果与预期一致。表达质粒在大肠杆菌哟IPRTG诱导,粒细胞集落刺激因子被分泌到细菌的周质中。产物提取后 相似文献
5.
盐藻磷酸甘油脱氢酶基因cDNA文库的构建 总被引:9,自引:0,他引:9
采用Lambda gt10载体构建了盐藻cDNA文库,文库大小为10^6/mL插入片段平均长度大于1kb。根据果蝇,兔,鼠编码其3-磷酸甘油脱氢酶基因的辅酶NAD的结合功能区保守序列设计一对引物,大小分别为21bp和18bp。PCR扩增得到与果蝇相同的290bp特异扩增片段,以该片段为探针,采用缺口平移系统标记原位杂交,从盐藻cDNA文库中获得36个3-磷酸甘油脱氢酶基因的阳性克隆。 相似文献
6.
采用异硫氰酸胍法从发芽3~4d的番茄幼苗中提取出总RNA,用Oligo(dT)纤维素亲和层析分离纯化mRNA.以mRNA为模板,Oligo(dT)为引物用逆转录法合成双链cDNA.将cDNA与EcoRI接头连接后克隆到表达载体λgt11的单一EcoRI位点,经体外包装后感染宿主菌Y1090,成功地构建了完整的番茄幼苗cDNA文库.用颜色筛选法筛选重组子,然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选,得到两个阳性克隆.挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化DNA,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,显示确有外源DNA存在.该插入片断序列测定正在进行. 相似文献
7.
恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱 总被引:1,自引:0,他引:1
恶臭假单胞菌(PseudomonasputidaG7)携带的质粒NAH7,经限制性内切酶EcoRI切割后,产生含有萘降解酶全部基因(24,6kb)的片段,此片段插入到载体pUC119的多克隆位点,构成了pKAO质粒,此质粒经HpaI,EcoRI酶切获得的5.1kb片段亚屯隆到pUC119中,衍生出pNN1质粒,绘制出内切酶图谱。从pNNI质粒上切下含目的基因nahI、nahN和nahL的kpnI-kpnI片段(2.3kb).正向插入载体BluescriptⅡSK+中获得重组质粒pNN2,反向插入为pNN3,将其转化到大肠杆菌XL1-Blue中,目的基因得以大量增殖。 相似文献
8.
参照国外报道的豌豆GPAT基因cDNA序列,设计并合成一对寡核苷酸引物,通过RTPCR技术,从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了GPAT基因的编码cDNA片段,并将其纯化后直接克隆到pGEMT载体系统中,经NcoⅠ和NotⅠ双酶切鉴定,所得的重组质粒中含有1380bp左右的片段.采用PstⅠ,HindⅢ两种限制性内切酶进行酶切,酶切图谱分析表明所克隆的豌豆GPAT基因编码cDNA的酶切图谱与国外所报道的该基因cDNA的酶切图谱一致,暗示了该基因在进行上具有一定的保守性. 相似文献
9.
本实验室从正常狗脑中又分离获得一个暂称这为“60a”的肽。冻干粉经SephaderG-50和羧甲基纤维素CM22柱层析,再经反相高效液相层析纯化得最后样品,经SDS电泳和等电聚焦电泳鉴定均为一条带,分子量约8000,等电点在pH7.8左右;N-末端氨基酸为Met;自N-末端的部分氨基酸序列为:H2N-Net-Leu-Ser-Pro-Als-Asp-Leu-Thr-Asp-Ile-Leu-Phe-T 相似文献
10.
不同纬度野生大豆种群间的遗传变异 总被引:18,自引:2,他引:16
选用了经初步筛选的20个短随机序列引物和2个长随机序列引物对5个不同纯度来源的野生大豆进行了DNA随机扩增,其中有19个引物扩增出多态性片段,区获得70个RAPD多态性片段,平均每个引物3.68条,运用自编的计算机程序对扩增进行聚类分析。 相似文献
11.
通过使用原核表达载体大量表达H5N1病毒RNA聚合酶亚基PA-C257,PB1_N25,再经过GST亲和层析和Sephadex G-200层析柱纯化,获得了高纯度的蛋白复合体.采用悬滴气相扩散法筛选蛋白晶体,在1~1.5mol/L乙酸钠和pH7.9条件下获得了理想的晶体,为解析禽流感病毒RNA聚合酶三维结构并进一步认识其生物功能奠定了基础. 相似文献
12.
通过N,N-二甲基甲酰胺(L)配体与二氯化镉反应合成了一种新的一维的以氯原子为桥的桥连一维聚合物:{CdC l2[(CH3)2NCHO]2}n,并通过X射线单晶衍射对其进行了表征,配合物1属于单斜晶系,C2/c空间群,其晶胞参数为a=12.9073(14),b=13.5631(15),c=6.8759(12),α=90°,β=91.9650(10),°γ=90,°Z=4,V=1203.0(3)3,Dc=1.821g/cm3,μ=2.234mm-1,F(000)=648,R1=0.0210,wR2=0.0563.该配合物是中心对称的以氯原子为桥的一维聚合物,镉离子与分别来自2个氯原子和2个L配体的2个氧原子发生配位作用,形成一个六配位的以金属镉原子为配位中心的八面体几何构型,而且,一维聚合链之间还通过分子间的C-H…C l弱作用形成了一个二维的网状结构. 相似文献
13.
以双氰胺钠[Na(dca)]和N,N-二甲基甲酰胺(L)为共配体与二氯化钴反应合成了一种新的一维的以双氰胺为桥的桥联聚合物:{Co(dca)2[(CH3)2NCHO]2}n.该配合物通过元素分析、红外光谱及X射线单晶衍射对其进行了表征,配合物1属于单斜晶系,C2/m空间群,其晶胞参数为a=13.554(2),b=7.3858(10),c=8.1046(13),α=90o,β=112.412(2)o,γ=90o,Z=2,V=750.05(19)3,Dc=1.493g/cm3,μ=1.161mm-1,F(000)=346,R1=0.0232,wR2=0.0632.该配合物是一个既是轴对称又是中心对称的一维结构,钴离子与分别来自2个dca的四个氮原子和2个L配体的2个氧原子配位,形成六配位的八面体几何构型,整个分子显示了一个以dca为桥的一维链结构,链和链之间通过分子间弱的C-H…N氢键作用形成了一个二维的网状结构. 相似文献
14.
利用一个新的有机配体L与乙酸锰为初始反应物[ L =4,5-二氮杂芴-9-[3,5-二羧基]苯亚胺],通过常规的方法合成了一个新的含有螺旋状水链的三维超分子配合物,[Mn(C19H9N3O4)(H2O)4]·7H2O (1),并通过元素分析、红外光谱和X-射线单晶衍射方法对化合物的结构进行了表征.结构分析表明化合物1属于正交晶系, P212121空间群;晶胞参数:a=0.99573(8) nm,b=1.34347(12) nm,c=2.06644(18) nm.化合物1展示了一个由新颖的螺旋状的水链和[Mn(C19H9N3O4)(H2O)4]构筑单元通过氢键作用而形成的三维超分子结构. 相似文献
15.
黄长晖 《复旦学报(自然科学版)》1998,37(4):387-394
应用PCR技术,对P16抑癌基因进行体外定突变。在P16cDNA中引入第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)和第74位密码子GAC(Asp)→AAC(Asn)突变,构建了p16-P48L和p16-D74N突变体,并把它们导入纯合缺失P16基因的人肺癌细胞株H460。 相似文献
16.
ZHONG Jing HUANG Ping WEN MiaoHeng LIANG LiJun ZHANG Xin TAN SongNuan & ZHU XiaoLan 《科学通报(英文版)》2012,(22):2908-2913
The neuraminidase (NA) in viral surface is one of the main subtype-specific antigen of influenza type A viruses.Neuraminidase is an enzyme to break the bonds between hemagglutinin (HA) and sialic acid to release newly formed viruses from infected cells.In this study,the H3N2 subtype virus NA genes were sequenced and NA proteins were screened for B-cell epitopes and assessed based on immunoinformatics.Based on this results,four peptides DR6,EY7,VG8 and RE8 (covering amino acid residues 151-156,368-374,398-405 and 428-435,respectively) of the NA protein were synthesized artificially.These peptides were used to immunize New Zealand rabbits subcutaneously to raise antisera.Experimental results showed that these four peptides were capable of eliciting antibodies against H3N2 viruses in a specific and sensitive feature,detected in vitro by enzyme-linked immunosorbent assay.Moreover,hemadsorption anti-releasing effects took place in three three-antisera-mixtures at a dilution of 1:40.Alignment using NA gene database showed that amino acid residues in these four epitope peptides were substituted at specific sites in all the NAs sequenced in this study.It was suggested that these NA epitope peptides might be used in combination with HA proteins as vaccine antigens. 相似文献
17.
在实验室条件下,研究了不同氮(0、0.1、0.4、0.8、1.0、1.2 g/L)、磷(0、0.015、0.025、0.030、0.045、0.060 g/L)浓度下杜氏盐藻生长增殖的关系和特征,以及氮磷比(c(N)/c(P))变化等对该藻生长的影响。实验结果表明:杜氏盐藻对氮、磷有着较强的适应能力,浓度增大藻增长率增大,浓度继续增大反而抑制藻的增长,属于营养依赖型藻类。不同氮质量浓度梯度对杜氏盐藻生长具有显著性影响(P<0.05),但对杜氏盐藻生长率K的影响不显著(P>0.05),最适宜的氮浓度为1.0 g/L;不同磷质量浓度梯度对杜氏盐藻的生长和生长率K具有显著性的影响(P<0.05),最适宜的磷浓度为0.025 g/L。当c(N)/c(P)为40时,最适合杜氏盐藻的生长。 相似文献
18.
100℃条件下,通过溶剂热原位合成反应,氯化镁和N,N-二甲基甲酰胺在甲苯中生成了一种甲酸镁框架化合物,(C3H3MgO6)n·n(C2H6NH2);并用元素分析、红外光谱和X-射线单晶衍射对该化合物进行了表征.在该化物中,中心Mg(Ⅱ)离子和甲酸根阴离子构建了一个立方形的三维金属-有机框架结构,客体二甲胺阳离子占据在它的孔道中. 相似文献
19.
在经典分类学中,社鼠和针毛鼠分类地位一直不是很明确,外形及头骨的形态差异微小,有关社鼠亚种的分类问题争论较多.基于在四川采集的标本,通过单因素方差分析和多变量分析,发现社鼠与针毛鼠主要在体长、腭后长及上颊齿等量度区别较明显;利用多变量分析和多因变量方差分析对社鼠的3个亚种处理,结果显示:社鼠亚种问的鉴别特征主要在于颧板宽、听泡长、下齿列等. 相似文献
20.
多齿配体N,N,N’,N’一四羟乙基乙二胺(简写为H4edte)和Fe(C10。)3-9H20或FeCl3’6H20在MeOH或MeOH/MeCN(体积比6:1)的溶液中合成了一个二核铁配合物[Fe:(H:edte):](C104)2(1)和一个有斗μ1,3-叠氮桥连的含NaCl型结构的三维配位聚合物(NMe。)2[FeNa(N3)6](2).x一射线晶体学表征结果显示,配合物1是个二核铁配合物,属于单斜晶系,空间群P2,/c,a=0.074401(9)nm,b=1.20539(1g)nm,c=1.7575(2)nm,d=T=90°,β=97.562(2)。,V=1.5627(3)nm3,Z=2;配合物2属于立方晶系,空间群尸2(1)3:a=b=C=1.27509(6)nm,α=β=y=90。,V=2.07311(17)nm’,Z=12.配合物1的结构中多齿配体H4edte只脱了两个醇羟基中的质子,且有一个醇羟基没有与金属配位.配合物2属于立方晶系,空间群为尸2(1)3,在配合物2中,多齿配体H。edte并未参与配位,只起到调节溶液酸碱性的作用,大阳离子NMe4+则通过微弱的氢键与Fe一(μ1,3,-Nj)-Na组成的框架作用,起到了稳定框架的模板作用. 相似文献