凝集素的分离纯化、基因克隆及功能研究进展

凝集素(lectin)研究近年来发展迅速，尤其在植物基因工程中，植物外源凝集素基因越来越受到重视。本文从凝集素的分离纯化、基因克隆、理化性质和功能等方面进行了综述。此外还讨论了凝集素基因在植物基因工程中的应用。     

验证功能原理的实验方法

介绍了在气轨上验证功能原理的一种实验方法,从而使功能原理得到进一步的验证.     

VLIW体系结构微处理器功能验证模型

为了系统而有效地设计微处理器功能验证激励,针对VLIW体系结构微处理器的结构特征,特别是多操作流水线并行特征,提出了VLIW体系结构微处理器的功能验证模型,基于该模型, 针对一个规模为1 500 kbit等效逻辑门的VLIW体系结构微处理器, 完成了功能验证方案的制定和105周期功能验证激励的设计.     

一种基于覆盖率的功能验证方法

针对功能验证的特点，在传统功能验证的基础上，引入覆盖率作为验证程度的反馈信息，从而有针对性地完善了验证环境，提高了验证程度．并以一款8位MCU为例，介绍了基于覆盖率的功能验证方法的具体实现．     

时序电路的功能验证探析

本文笔者比较了基于状态转换表和基于状态转换图的功能验证方法,并总结出两种方法各自的特点和适合时序电路功能验证的方法,为验证工程师挑选验证方案提供了有利的数据支持。     

CPU系统级验证平台的研究与实现

随着CPU设计尺寸和设计复杂度的不断增加，功能验证已经成为整个设计过程中的严重瓶颈，文章回顾了系统级验证的一些技术，针对我们设计的64位CPU系统级验证，设计了CPU系统级自动化验证平台．实用表明，该平台简化了验证流程，提高了验证效率．     

基于SystemVerilog的SoC功能验证方法研究

SoC功能复杂度不断提高,结合了最新验证语言SystemVerilog的断言、随机约束、功能覆盖率等特点以及Verification Methodology Manual(VMM)验证架构,对SoC验证的各阶段进行了改进.模块验证阶段灵活应用了形式验证和动态仿真验证;集成验证阶段依据可重性的思想搭建验证环境、采用迭代开发的思想提前了集成验证启动时间;系统验证阶段采取了软硬件协同验证;同时利用随机约束技术开发验证向量,利用功能覆盖率技术评价随机约束向量对功能的覆盖.通过这些改进措施达到了提SoC功能验证效率的目的.     

基于SystemVerilog的SoC功能验证方法研究

结合最新验证语言SystemVerilog的特点以及VMM（Verification Methodology Manual）验证架构,分别讨论了SoC设计过程中模块验证,集成验证和系统验证的一些改进措施,达到提高功能验证效率的目的。     

SoC自动化验证方法的研究与实现

为解决SoC(System-on-Chip)验证覆盖率和工作量问题,基于可重用思想、采用事务验证模型、随机激励生成的方法,建立了一个层次化的具有自主知识产权的自动化功能验证系统（LSAVS：LiShan Automatic Verification System）。采用该验证系统后,SoC验证工程师开发测试向量的工作量由使用传统验证方法的60％降低到10%,同时保证了功能验证100%的覆盖率,达到快速高覆盖率的验证目的。     

APKD基因克隆

综述了成人多囊肾病（ＡＰＫＤ）的基因定位、异质性位点的发现、人基因组中ＡＰＫＤ基因克隆及大白鼠基因组中ＰＫＤ１基因克隆的研究进展．     

人野生型p53基因的克隆及原核表达

利用RT PCR方法由人外周静脉血淋巴细胞中获得人p53 cDNA片段, 并将其克隆入原核表达载体pQE40中, 构建重组质粒pQE40-p53; 转化于E.coli M15宿主菌, 经IPTG诱导, 表达了N端融合6His的p53融合蛋白. 利用6His与Ni²⁺高亲合力结合的性质, 经镍柱纯化、 透析袋分级透析复性、 Western Blot鉴定, 结果表明获得了纯化的6His-p53融合蛋白.
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轮状病毒VP7基因的克隆及核苷酸序列分析

用反转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术，从轮状病毒感染的细胞中扩增了916bp的VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM-T上，转化至受体菌DH5a中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定，证明重组质粒pT-V7中含有轮状病毒的VP7基因片段。经核苷酸序列分析，表明正确克服了轮状病毒主要保护性抗VP7基因中抗原表位区。     

一种高速缓冲存储器的可综合伪随机功能验证方法

针对微处理器的高速缓冲存储器（Cache）,提出了一种可综合的伪随机功能验证方法,对其在实际芯片中的性能进行测试,并与常见的基于软件模拟的随机功能验证方法进行了对比.结果表明,与基于软件模拟的伪随机功能验证方法相比,所提出的可综合伪随机验证方法的处理速度快约3个数量级,并且能够发现更多的功能错误.     

大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescripy SK中，测序表明：该基因有612bp，与文献报道相比，有10个核苷酸不同，相应的翻译氨基酸有6个相异，将该基因重组到ColE1为复制子，T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b( )中，构建表达质粒pETCaiE，重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子，Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE；重组到载体pWSK129中，构建以pSC101为复制子，T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE。上述表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经1mmol/L异丙基硫代－β－D－半乳糖苷（IPTG）诱导后，均可表达，SDS－PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku，表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE30%,pACYC-CaiE8%,pSC-CaiE5%。     

菜豆DnaJ-like基因组DNA片段的克隆及其表达分析

以PvSR6 cDNA编码一种菜豆DnaJ-like蛋白，并利用PCR的方法克隆出基因组部分序列。核苷酸列分析表明PvSR6基因在这段编码区无内含子；Southern blot分析表明菜豆基因组中存在多个PvSR6基因拷贝；Northern blot分析结果表明PvSR6是组成型表达蛋白，重金属Hg,Cd,和As，过量的Cu和Zn及受伤，高温，病毒侵袭和水杨酸等均能强烈地诱导其基因在叶片中的表达，表明DnaJ-like蛋白与植物的抗逆性有关。     

血管内皮抑素的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

血管内皮抑素不仅能特异性地抑制血管内皮生长，而且对血管形成和肿瘤生长也具有强烈的抑制作用。利用PCR法从人胎肝cDNA文库中克隆了人血管内皮抑素的编码序列，构建了重组质粒pRSendo，并在E.coli中表达，SDS－PAGE表明其表达产物为包涵体，此外，还对血管内皮抑素做了初步的纯化。     

粟酒裂殖酵母麦芽糖酶基因的克隆及在大肠杆菌内的表达

利用PCR的方法,以粟酒裂殖酵母菌的染色体DNA为模板,扩增得到粟酒裂殖酵母的结构基因,其开放阅读框1740 bp的序列,可以编码579氨基酸,分子量为67.7 kD.利用NCBI对它的蛋白序列进行比对,发现这个蛋白序列与Aspergillus oryza、Candida albicans、Hansenula polymorpha、Saccharomyces cerevisiae、Saccharomyces pastorianus的麦芽糖酶相比分别具有40.6%、41.6%、37.9%、34.7%、34.5%的相似性.而与粟酒裂殖酵母的α-葡萄糖苷酶具有99.8%的相似性,由此可以得出克隆得到的结构基因应该是粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶结构基因.将克隆的粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶基因克隆到pQE30表达载体中在大肠杆菌中进行诱导表达,然后测定其麦芽糖酶的活力,其酶的比活力是野生菌株的21倍,诱导条件下麦芽糖酶的比活力是非诱导条件下的10倍.