茂兰自然保护区土壤放线菌多样性及生境分布

为探明贵州喀斯特区域土壤放线菌分布特点及其多样性,将贵州茂兰自然保护区划分为不同的生境区域,并采集24份土壤样品;采用平板稀释法分别在高氏1号培养基中分离放线菌;通过形态特征对所分离纯化的放线菌进行初步鉴定;经初步鉴定排重后,选取部分放线菌菌株进行16S rRNA测序鉴定。结果显示:茂兰保护区土样中共分离出126株放线菌菌株,其中链霉菌属菌株占总数的91.3%,为烬灰类群、黄色类群、金色类群等;经初步鉴定排重后,选取23株放线菌进行16S rDNA测序。经鉴定,其中21株属于链霉菌属、1株为诺卡氏菌属、1株为小单孢菌属。初步揭示了贵州茂兰自然保护区喀斯特土壤放线菌多样性和生境分布,为贵州喀斯特土壤放线菌分布和多样性研究提供参考。     

黔东北喀斯特土壤放线菌多样性研究

为探明贵州喀斯特区域土壤放线菌分布特点及其多样性特征,从黔东北区域采取土样61份,采用平板稀释法,利用3种培养基分离放线菌,通过形态特征、分子鉴定及16S rDNA系统发育分析鉴定放线菌,并对部分菌株进行抗菌活性测试。结果从土样中共分离出80株放线菌株,经初步鉴定排重后,选取22株进行分子鉴定,经16S rDNA序列分析,分属于链霉菌属(17株)、诺卡氏菌属(2株)、小单孢菌属(2株)、高温单孢菌属(1株),链霉菌属放线菌占了77%。并有5株放线菌分别对大肠杆菌(3株),金黄色葡萄球菌(3株),青霉菌(2株)具有抑菌性。本研究初步揭示了黔东北喀斯特土壤放线菌多样性和丰富度,为贵州喀斯特土壤放线菌分布和多样性研究奠定了基础。     

贵州黄果树土壤放线菌的分离与纯化研究初报

本研究从贵州黄果树采集土壤样品19份,采用平板稀释法和不同培养基对放线菌进行分离、纯化培养。结果表明:不同培养基对贵州土壤放线菌的分离效果差别较大,从贵州黄果树采集的土样中共分离出的32株典型放线菌菌株,经初步鉴定,分别属于链霉菌属、诺卡氏菌、小单孢菌属、放线菌科和非链霉菌属。     

西双版纳橡胶,胡椒和咖啡根际土壤放线菌区系研究

不论干雨季，橡胶、胡椒和咖啡根际土壤放线菌中，链霉菌的分离频率最高，占总分离频率的４０％以上．其中，三作物根际土壤的链霉菌、链轮丝菌、马杜拉放线菌和孢囊放线菌等属的分离频率干季高于雨季、而小单孢菌、诺卡氏菌、游动放线菌、间孢囊菌和钦氏菌等属的分离频率雨季高于干季     

昆明地区土壤放线菌组成的初步研究

从昆明黑龙潭森林的同一地段在雨季和旱季各采集五份森林土,旱季从大观楼采集湖底土五份。用五种培养基分离了土样中的放线菌。经分类学研究,其放线菌组成如下: 1,旱季森林土:游动放线菌12株,小瓶菌2株,孢囊链霉菌2株,间孢囊菌1株,小耳孢囊菌2株,小单孢菌7株,诺卡氏菌18株,链霉菌1461株。 2,雨季森林土:游动放线菌2株,孢囊链霉菌3株,小耳孢囊菌2株,小单孢菌4株,诺卡氏菌23株,链霉菌1290株。 3,湖底土:游动放线菌5株,小耳孢囊菌1株,小单孢菌4株,双歧放线菌1株,诺卡氏菌14株,链霉菌243株。     

1株耐盐拟诺卡氏菌株的分离及初步鉴定

从青海高盐环境中分离到1株拟诺卡氏菌形放线菌YIM90039，该菌株具有典型的拟诺卡氏菌属的形态学特征．通过对其进行的形态学、生理生化特性、细胞壁化学组分以及16S rDNA序列等方面的分类学研究。菌株YIM90039初步鉴定为拟诺卡氏菌属的一个潜在新种．该菌株在大多数培养基上生长良好，气生菌丝大都呈黄白色，基内菌丝浅橙黄色至深橙黄色．气生菌丝上有长短不一的孢子链，基内菌丝则长，多分枝。常断裂成杆状。     

喀斯特地貌高海拔自然保护区土壤放线菌多样性研究

为了揭示贵州喀斯特地貌高海拔读取土壤放线菌多样性,通过在贵州喀斯特地貌高海拔自然保护区采集土壤,对放线菌进行分离、提纯和培养;并对已获得的放线菌菌株的16Sr DNA、18Sr DNA、ITS以及26S通过引物进型PCR扩增,扩增后行进DNA序列测定以及菌株鉴定。结果表明:该区域土壤中包含了1株为疑似新型放线菌、1株为链孢囊菌属,为较稀有菌属。4株为拟诺卡氏菌属,11株为链霉菌属、为常见菌属。此次研究初步揭示了贵州喀斯特地貌高海拔地区土壤中放线菌多样性。     

沧州高盐环境嗜盐放线菌多样性研究

利用NaCl的质量分数为10%和20%的不同培养基从35份采自河北沧州高盐环境样品中分离得到33株中度嗜盐放线菌和13株耐盐放线菌.多相分类研究表明,嗜盐菌株具有形态、生理、生化和分子分类特征的多样性,在系统发育上试验菌株分别属于拟诺卡氏菌属、链霉菌属和纤维单胞菌科一新属.分析结果表明,沧州地区高盐环境中嗜盐放线菌主要类群是拟诺卡氏菌属和链霉菌属,另有少量纤维单胞菌科放线细菌;也说明高盐环境是分离新物种的重要来源.     

Screening of the antifungal strains of actinomycetes and the study on one of the active strains

以白色念珠菌为指示菌,采用平板琼脂块法进行初筛和发酵液纸片法进行复筛,得到抗真菌活性较强的放线菌8株,对其中一株活性放线菌菌株205-10经16S rDNA方法初步鉴定为阿南德氏链霉菌(Streptomyces anandii),并用不同的温度、pH及紫外线处理发酵液以了解其活性代谢产物的稳定性,用不同有机溶剂进行萃取实验了解其极性.结果表明其活性代谢产物在70℃以下抗真菌活性保持不变,在pH 6～8活性不变,但在紫外灯照射下活性稳定性较不理想,活性物质存在于正丁醇和水中,可知其极性较大.     

2株嗜碱性放线菌的分离鉴定及特性研究

从新疆巴洲和硕县碱性土壤中分离纯化出2株放线菌菌株XJ-1和XJ-4,对其形态特征、生理生化特性、抗生素产生以及16S rRNA基因序列分析等方面进行了多种特性研究.结果表明.2株放线菌在pH7.0的中性条件下不能生长,在pH12.0的强碱性条件下能够生长,最适生长pH为10.0,属于嗜碱性放线菌.2株放线菌菌株能耐受10%的NaCl,最高耐受温度为45℃.菌株XJ-1产生抗生素,能抑制柑橘绿霉菌、水稻轮纹菌、棉花枯萎菌和小麦赤霉菌的生长.16S rRNA基因同源性分析表明XJ-1属于拟诺卡氏菌属的Nocardiopsis dassonvillei,序列相似性达到了99.9%.而XJ-4与Nocardiopsis. sp. AF-333的序列相似性达到了99.3%,有可能是一新种.     

发酵法生产5`—肌苷酸的研究：Ⅰ.高产菌株的选育

报道了从自然界分离产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)进行遗传诱变,获得突变株直接发酵法生产5′—肌苷酸的研究结果.从采集的婴幼儿大便及鸟类粪便中,分离鉴定出6株产氨短杆菌.将其中的No.18和No.20用紫外线,硫酸二乙酯,亚硝基胍以多种不同方式进行诱变处理,用青霉素浓缩缺陷型.通过对2万多个单菌落的逐个检查,筛选鉴定出7株腺嘌呤缺陷型(A-),1株鸟嘌呤缺陷型(G-),12株腺嘌呤鸟嘌呤双重缺陷型(A-G-).摇瓶发酵结果,有3株A-G-产多量5′—肌苷酸,其中No.18—AG—17产量比较稳定,最高产量达12.1mg/mL。     

10种蔬菜内生细菌的分离筛选

以抑制植物主要病害病原菌和内生防病相关酶活性为评价标准,从蔬菜作物体内分离筛选植物内生细菌资源。从苦瓜、丝瓜、空心菜、大豆等10种蔬菜体内分离到101株细菌,发现内生细菌在不同种类的蔬菜中出现的频率不同,其中丝瓜叶上的内生细菌数量最多,洋葱体内分离到的内生细菌数量最少。运用平板对峙法从中筛选出了对黄瓜枯萎病菌、番茄青枯病菌、水稻细条病菌、荔枝霜疫霉病菌等有较强拮抗作用的菌株,获得对以上4种病菌均有拮抗作用的内生细菌有41株,占总株数的40．6％。对101株细菌进行纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶活性测定表明,同时具有3种酶活性的菌株有32株,占总菌数的31．7％。从中选出13株拮抗效果较好的内生细菌。经初步鉴定均属于芽孢杆菌属（Bacillus sp）。进一步对筛选获得的同时对以上4种病原菌均有拮抗作用,且具有纤维素酶、蛋白酶和几丁质酶活性的13号、14号、59号和82号菌株进行16SrDNA序列分析,表明4个菌株均为枯草芽孢杆菌（B．subtilis）或其近缘种。     

Plasmids of the same Inc groups in Enterobacteria before and after the medical use of antibiotics

Conjugative plasmids were common in enterobacteria isolated before the medical use of antibiotics. Plasmid F of Escherichia coli K-12 was one example and we identified others in over 20% of a collection of strains isolated between 1917 and 1954, the Murray collection. In the past 25 years, conjugative plasmids encoding antibiotic resistances have become common in bacteria of the same genera as those of the Murray Collection--Salmonella, Shigella, Klebsiella, Proteus, Escherichia. The present study was made to show whether the 'pre-antibiotic' plasmids belonged to the same groups, as defined by incompatibility tests (Inc groups), as modern R plasmids. Of 84 such plasmids established in E. coli K-12, none with antibiotic resistance determinants, 65 belonged to the same groups as present resistance (R) plasmids. Thus the remarkable way in which medically important bacteria have acquired antibiotic resistance in the past 25 years seems to have been by the insertion of new genes into existing plasmids rather than by the spread of previously rare plasmids.     

Molecular cloning of the whole biosynthetic pathway of a Streptomyces antibiotic and its expression in a heterologous host

The application of molecular cloning to antibiotic-producing microorganisms should lead to enhanced antibiotic productivity and to the biosynthesis of novel antibiotics by in vitro interspecific recombination. To allow such approaches, the genes for antibiotic synthesis must be isolated, analysed and perhaps modified. Certain Streptomyces species produce nearly two-thirds of the known natural antibiotics; the recent development of cloning systems in the genus makes it possible to isolate and analyse Streptomyces genes. However, antibiotics are metabolites which require sets of several enzymes for their synthesis and attempts to isolate the corresponding genes have so far yielded clones carrying either individual genes of the set, or only incomplete gene sets. We describe here the isolation of a large continuous segment of Streptomyces coelicolor DNA which apparently carries the complete genetic information required for synthesis of an antibiotic, actinorhodin , from simple primary metabolites. Not only can the cloned DNA 'complement' all available classes of actinorhodin non-producing mutants of S. coelicolor but, on introduction into a different host, Streptomyces parvulus , it directs the synthesis of the antibiotic. The tendency for the genes for antibiotic synthesis to be clustered together on the chromosomes of Streptomyces species and the availability of plasmid vectors which can carry stable inserts of DNA larger than 30 kilobase pairs (kb) and which can be introduced efficiently into Streptomyces protoplasts, suggest that the experiments described have general significance for this area of biotechnology.     

三株桃小食心虫病原真菌的分离及形态鉴定

从山西襄汾苹果园越冬的桃小食心虫(Carposina sasakii Matsmura)采集获得自然染病的虫体,经分离纯化得到三株病原真菌,编号分别为TSL01、TSL02、TSL03,通过回接试验证明这3株菌株为桃小食心虫的病原菌.根据培养性状和显微形态观察发现:3株菌株在PDA培养基上均为白色,菌株TSL01和TSL03菌落大,可产生黄褐色或淡紫色色素.它们都产生两种类型的分生孢子,大型分生孢子,月牙形或镰刀形,有隔;小型分生孢子,椭圆形,肾形或卵圆形,假头状着生,菌丝透明有隔,轮状生长;菌株TSL02菌落较小,后期产生黄色色素,分生孢子圆柱形至梭形,串生,分生孢子梗呈"Y"形.初步鉴定菌株TSL01与菌株TSL03为镰孢菌属(Fusarium)尖孢镰孢菌(F.oxysporum),菌株TSL02为拟青霉属(Paecilomyces)粉质拟青霉(P.farinosus).这是在桃小食心虫上首次记录该两类病原菌.     

Production of 'hybrid' antibiotics by genetic engineering

The recent development of molecular cloning systems in Streptomyces has made possible the isolation of biosynthetic genes for some of the many antibiotics produced by members of this important genus of bacteria. Such clones can now be used to test the idea that novel antibiotics could arise through the transfer of biosynthetic genes between streptomycetes producing different antibiotics. The likelihood of a 'hybrid' compound being produced must depend on the substrate specificities of the biosynthetic enzymes, about which little is known. In attempts to demonstrate hybrid antibiotic production, we therefore began with strains producing different members of the same chemical class of compounds in order to maximize the chance of success. Here we report the production of novel compounds by gene transfer between strains producing the isochromanequinone antibiotics actinorhodin, granaticin and medermycin. These experiments were made possible by the recent cloning of the whole set of genes for the biosynthetic pathway of actinorhodin from Streptomyces coelicolor A3(2) (ref. 8). We believe that this represents the first report of the production of hybrid antibiotics by genetic engineering.     

牛奶中苏云金芽胞杆菌的分离与鉴定

采用醋酸钠．抗生素分离法对超市牛奶样品进行苏云金芽胞杆菌（Bacillus thurgngiensis,Bt）的分离,获得2株Bt菌株,分别命名为BtBRC—LJ1和BtBRC-LJ2。利用PCR方法对Bt BRC-LJ1和BtB RC-LJ2菌株幼皿和nheC肠毒素基因的分布进行检测。结果显示,这2个菌株均含有这两种肠毒素基因。     

大肠埃希菌ESBLs检测及其耐药性分析

目的探讨本地区大肠埃希菌分离株中超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的阳性率及产酶株对β-内酰胺类抗生素的耐药性。方法采用双纸片协同法检测菌株的ESBLs,并用Kirby-Bauer法检测了415株产ESBLs的大肠埃希菌对16种β-内酰胺类抗生素的耐药性,并对其标本来源和病区分布进行了分析。结果ESBLs总检出率为50．8％,其中ESBLs检出率较高的科室为普外科、脑外科、肾内科、骨科、呼吸内科。所有大肠埃希菌分离株均对Imipenem和Meropenem敏感。产ESBLs株对其他14种β-内酰胺类抗生素的耐药性均高于非产酶株。结论本地区ESBLs检出率较高,分布科室有特殊性,产ESBLs株对抗生素的耐药性高于非产酶株。     

耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性分析

以临床尿路感染患者尿液为研究对象,通过分离培养及16s rDNA进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定;采用Kirby-Bauer纸片法进行药敏实验,并对分离株进行碳青霉烯酶表型筛选;通过PCR检测常见的碳青霉烯酶耐药基因、荚膜血清型和毒力基因分布情况;对分离的肺炎克雷伯菌株进行了生物被膜形成能力及其对小鼠致病力的分析。本研究从采取的86例尿液标本中分离检出11株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌,分离率为12.79%。耐碳青霉烯酶基因PCR检测结果显示,blaNDM、blaVIM、blaIMP和blaKPC基因在分离株中均呈现不同程度的分布。耐药性分析发现11株肺炎克雷伯菌对氨苄西林耐药率为90.91%,对头孢噻肟耐药率为63.64%,对链霉素、庆大霉素、氯霉素和诺氟沙星的耐药率较低。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌荚膜分型结果显示,分离的11株细菌中10株均为强毒力型菌株（90.9%）,其中K57血清型4株（36.4%）,K1血清型1株（9.1%）,K2血清型1株（9.1%）,K5血清型1株（9.1%）,K20血清型3株（27.3%）,提示该批分离株具有较强的致病力。此外,毒力因子分布结果显示,其毒力因子rmpA（54.5%）、Aerobactin F（54.5%）在菌株中分布较为广泛。生物被膜形成能力检测及小鼠致病性试验结果显示,9株分离株均有较强的生物被膜形成能力,菌株致病力可能与荚膜血清型及生物被膜形成能力相关。综上所述,临床分离的致尿路感染病原肺炎克雷伯菌呈现多重耐药特征,强毒力菌株以K57荚膜型为主,K1、K2均有分布,提示对尿路感染病原应加强耐药监测,合理使用抗菌药物,有效防控多重耐药和强毒力菌株的感染与流行。