碱性淀粉酶产生菌的诱变选育

本文以现行工业生产α－淀粉酶菌株－枯草芽孢杆菌ＢＦ７６５８为出了菌株，通过复合诱变，反复筛选获得一株能在高碱性条件下生产碱性淀粉酶的菌株Ｍ—１０４     

环孢菌素产生菌的诱变选育

中国弯颈霉Tolypocladium sinense Li与雪白弯颈霉Tolypocladium nivcum(Rostrup)Bissct的孢子悬浮液经γ-射线Co~(60)辐射诱变后,产环孢菌素的得率及抑菌活性均明显提高.用黑曲霉Aspergillus niger和弯孢霉Curvularia lunata作为致敏菌。检测提取物中环孢菌素的抗菌活性,提取物抑制了致敏菌的菌丝生长和孢子形成.环孢菌素产生菌深层发酵培养基是蛋白胨—葡萄糖培养基,发酵周期12天.尔后发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取,减压浓缩,每升发酵液获环孢菌素粗制品35—87mg.     

利福霉素产生菌高产菌株的选育

利福霉素产生菌经离子注入诱变处理,利用利福霉素浓度梯度平板和高浓度葡萄糖平板,筛选到的高产菌株再反复进行离子注入诱变、筛选和纯化,最终得到6株菌株,产量较同期对照A606分别高出的比例如下A606-3-1, 58.7%; A606-3-2, 51.0%; A606-3-3, 43.4%; A606-3-4, 41.7%; A606-3-5, 39.3%; A606-3-6, 39.3%.     

菊粉酶产生菌的选育及发酵条件

野生型黑曲霉ＡＪ１４０５经紫外线、硫酸二乙酯和亚硝基胍等多代诱变处理，获得一株产菊粉酶（ＩｎｕｌｉｎａｓｅＥ．Ｃ．３．２．１．７）能力较高的变异菌株ＡＪ１９５８．连续传代１０次，ＡＪ１９５８突变株无衰退，是稳定的变异菌株．其产生的菊粉酶只被菊粉（Ｉｎｕｌｉｎ），而不被蔗糖、淀粉、纤维素、葡萄糖或果糖诱导．在１０００ｍＬ０．０７ｇ／ｍＬ菊芋提取液中添加豆饼粉５ｇ，麸皮５ｇ，２５０ｍＬ三角瓶中装５０ｍＬ培养液，于３０℃，１２０ｒ／ｍｉｎ旋转式摇床振荡培养３ｄ，酶活力可达６４μｍｏｌ·ｍｉｎ（－１）．Ｋ＋，Ｆｅ（２＋），Ｍｇ（２＋）对酶形成有促进作用．     

L—乳酸产生菌的诱变选育

米根霉 R87经紫外线和氯化锂复合诱变处理,获得一株高产、稳产 L-乳酸的变异株R87-91.其在10%初糖和发醇72小时,产酸达8.18%.     

核酸酶P1产生菌的诱变选育

以核酸酶Ｐ１产生菌桔青霉ＡＳ．３．２７８８为出发菌株，经过诱变处理，获得了产核酸酶Ｐ１的变异株Ｈ１０１５。该菌株在葡萄糖培养基上直接发酵７２ｈ，核酸酶Ｐ１的酶活力达到３４５ｕ／ｍｌ，比出发菌株酶活力提高了２０多倍。     

D-核糖产生菌的选育及发酵

以枯草芽孢杆菌Ｄ－２为出发菌株,经紫外诱变,得到一株莽草酸缺陷型突变株Ｄ－２０２,摇瓶发酵Ｄ－核糖产量可达到５２．６ｇ／Ｌ。该菌遗传稳定性良好。通过发酵条件的优化,最高产量可达６５ｇ／Ｌ。经２ｔ发酵罐中试,发酵单位达到５０ｇ／Ｌ。     

花生四烯酸产生菌的选育

通过对深黄被孢霉AS3．2793和MUI0310进行紫外线和氯化锂复合诱变、以及硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变，涂布在诱变培养基上，对分离出的突变株进行摇瓶发酵初筛，从中得到一支产花生四烯酸的菌株。该菌株在摇瓶产脂培养基中发酵8天：生物量达16．57g／l，油脂含量达49．10％，油脂得率达8．14g／l，油脂中花生四烯酸的含量为0．9％．     

浓醪酒精发酵酵母菌的选育

以本研究室保藏酵母菌Y316作为出发菌株,经紫外线诱变处理原生质体,再生菌通过初筛,复筛,选育出酒精高产菌株Y316-23,在料水比1∶1.8,发酵60h的条件下,成熟醪酒精的体积分数可达13.5%以上.     

利福霉素产生菌高产菌株的选育

利福霉素产生菌经离子注入诱变处理,利用利福霉素浓度梯度平板和高浓度葡萄糖平板,筛选到的高产菌株再反复进行离子注入诱变、筛选和纯化,最终得到6株菌株,产量较同期对照A606分别高出的比例如下：A606-3-1,58.7%;A606-3-2,51.0%;A6060-3-3,43.4%;A606-3-4,41.7%;A606-3-5,39.3%;A606-3-6,39.3%。     

高能电子诱变选育雷帕霉素产生菌

利用高能电子束对雷帕霉素产生菌进行诱变处理。照射时间分别选用10s、20s、30s,在诱变株中筛选高产突变株。最终获得一株高产菌株NP09-62#,其效价比出发菌株提高了33.3%,且遗传性能稳定。     

鸟苷产生菌解淀粉芽孢杆菌的选育

出发菌GR001通过形态观察、生理生化实验、16S rDNA同源性序列分析及部分特异性基因序列分析鉴定为解淀粉芽孢杆菌.以GR001为出发菌,通过化学诱变选育出一株遗传标记为腺嘌呤营养缺陷、6–巯基嘌呤抗性以及蛋氨酸亚砜抗性(Ade-+MSOr+6-MPr)的突变株GR600.以GR600为受体菌,采用原生质体转化法获得转化子GR607(Ade-+MSOr+6-MPr+kmr),鸟苷产量高达20.82,g/L.     

洗涤剂用碱性纤维素酶产生菌的菌种选育

以实验室提供的一株嗜碱性芽孢杆菌Ｖ１－１－３为出发菌株，经过甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）的二次诱变处理及青霉素、链霉素、万古霉素和头孢霉素等抗性平板的筛选，得到一株耐青霉素的高产变异新菌株，产纤维素酶的能力大大提高，酶活（发酵液）从１５．２０ｕ／ｍＬ提高到２９．３６ｕ／ｍＬ。     

L-亮氨酸产生菌的选育及其发酵条件优化

以黄色短杆菌TQ9806(Met^- Ile^L 2-TA^r α—AB^r β—HL^r SG^r Rif^r300μg／mL)为出发菌株，经硫酸二乙酯、紫外线分另4与氯化锂复合诱变，选育出一株利福平抗性为800μg／mL的L-亮氨酸产生菌TK0303，通过对其摇瓶发酵条件的研究和优化，产量由出发菌株TQ9806的22．7g／L提高至目的突变株TK0303的28．3g／L。     

玉米秸杆型多效酶制剂产生菌的选育

从不同地域土样中筛选可发酵生产木聚糖酶、β－葡聚糖酶和纤维素酶的菌株,以使该菌株产生可将玉米秸秆中的非淀粉类抗营养物质转化为可被单胃禽畜利用的简单物质的多酶制剂,利用这些酶制剂歙玉米秸杆成为非常好的饲料粮替代物,以缓解近年来对玉米饲料需求的压力。     

井冈霉素产生菌的诱变选育及发酵条件优化

本研究以一株能产生井冈霉素的吸水链霉菌井冈变种(Strepto myces hyroscupicusvar.Jingganggensis yen)J1为研究对象,通过紫外线(Uv)及硫酸二乙酯(DES)两次诱变,经平皿初筛,摇瓶复筛,获得茵株j1-U-D,效价达25874×10-6g/mL,比出发菌株提高29%.菌株经过5次传代,代间效价差异不明显,遗传性能较稳定.通过单因素实验和正交实验分析研究了摇瓶产井冈霉素的最适发酵培养基,该茵的最适发酵培养基为(%):淀粉12%、酵母粉4%、KH2Po4o.05%、NaCl 0.15%.最适发酵条件为:发酵起始pH值7.2,接种量8%,发酵温度37℃,发酵时间96 h.茵株最终效价达30610×10-6/mL,比出发茵株提高53%.     

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育

以2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9为出发菌株,采用紫外线诱变与添加噬菌体进行筛选相结合的方法,获得了两株抗性菌株Au4-2和Af3.在种子培养基中含有噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养24 h,抗性菌株Au4-2与Af3的菌体生长光密度值OD650×20分别为0.74,0.55.镜检显示菌体量多,呈短杆状;而对照菌株Ac9的菌体光密度值则为0.14,镜检显示菌体量少,呈球状.在发酵培养基中添加噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养72 h,抗性菌株Au4-2与Af3 产酸分别可达15.45 g/100 mL,14.55 g/100 mL;而对照菌株则几乎没有产酸.     

高产2-苯乙醇酿酒酵母的选育

从8株酿酒酵母中初筛到一株2-苯乙醇产量达1.48g.L-1的菌株FD0419.以此为出发菌株,分别进行硫酸二乙酯化学诱变和原生质体紫外诱变,获得3株耐受性提高但2-苯乙醇产量下降的菌株,再与出发菌株进行原生质体融合.最终,筛得菌株R-UV3,其2-苯乙醇产量达2.51g.L-1,比出发菌株提高69.6%.     

氮离子注入选育耐酸性α-淀粉酶产生菌诱变效应的研究

利用低能(30keV)氮离子注入中温中性α-淀粉酶产生菌枯草芽孢杆菌BF7658,研究对其产耐酸性α-淀粉酶的诱变效应.结果表明,BF7658菌株存活率曲线是典型的"马鞍型"剂量-效应曲线,在"马鞍型"区域对应注入剂量50×1014～100×1014 ions/cm2下具有较高的突变率.通过诱变筛选到一株最适作用pH为5.0,较出发菌株的最适作用pH偏低一个单位的突变株,编号TUST743.该突变株产酸性α-淀粉酶的酶活为343U/mL.该酶在pH4.5和4.0条件下的相对酶活为61%和38%,说明此突变株所产酸性α-淀粉酶对低pH有较好的耐受性.经连续传代实验,表明该菌株遗传性质稳定.