抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——三、应用酶标单抗ELlSA竞争法检测抗T.e.抗体的实验研究

应用酶标单抗(HRP-MCAbⅡG_6)ELISA竞争法对7只感染伊氏锥虫的家兔血清进行了检测,结果表明该法具有特异、敏感、快速等优点.与间接ELISA检测结果相比呈现明显的正相关,两种方法检测相符合,因此本法可作为流行病学调查和血清学诊断的工具.     

流行我国马牛的三个伊氏锥虫株的研究 ——Ⅱ.伊氏锥虫多态现象

首次报导流行我国马牛的伊氏锥虫株存在多态现象,描述了一种称作变异型(vartantform)的新形态.经过小鼠的连续传代和涂片以及单克隆接种小鼠的观察,证明这种变异型个体在流行我国的伊氏锥虫株中是一种正常的形态.     

抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究——一、分泌抗伊氏锥虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了对伊氏锥虫病的免疫诊断提供有价值的单克隆抗体,笔者通过了3次SP2/0骨髓瘤细胞与伊氏锥虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立起7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中ⅡG_6杂交瘤作了进一步的检定分析,用ⅡG_6上清液对T.e.抗原进行ELISA试验,显示出高度的特异性,与血吸虫、弓形虫抗原均未出现交叉反应。ELISA测试ⅡG_6细胞株培养上清效价为1:5.1×10~3,而杂交瘤细胞接种BALB/c小鼠诱生腹水抗体的效价为1:1.6×10~7。该株单克隆抗体免疫球蛋白的类型鉴定属IgG_1亚类。该株细胞已在体外培养下,稳定地分泌特异性抗体至少达6个月之久,同时在液氮冻存近8个月之后仍能保持分泌抗体的能力。     

锥虫Ls—rRNA序列分析与锥虫rDNA探针群

用大分子ＲＮＡ快速测序法测定刚果锥虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａｃｏｎｇｏｌｅｎｓｅ）ＬｓｒＲＮＡ５′端６９４个核苷酸序列．比较分析揭示伊氏锥虫、布氏锥虫和刚果锥虫之间以及它们与其它鞭毛虫和哺乳动物宿主的分子差异；表明ＬｓｒＲＮＡ高变区可以作为一个灵敏的分子指标研究锥虫属内的系统进化关系；并为研制属、种不同专一性的锥虫ｒＤＮＡ探针奠定了基础．人工合成锥虫亚属ｒＤＮＡ探针Ｄ１ｔｅ与ＰＣＲ方法联用，可以检测相当于单个伊氏锥虫的微量ＤＮＡ．     

成果产品简讯

我院微生物研究所,在进行耕牛锥虫病诊断研究的同时,采用DEAE纤维素层析柱分离锥虫的新技术,从人工感染伊氏锥虫动物的血液内,获得了纯净的锥虫(无红细胞、白细胞和血小板).用纯净锥虫浸出液制造的间接血凝诊断抗原,效价很高,以四川生物制品所生产的标准锥虫阳性血清做试验,最高效价可达1:81,920—327,680;自然感染牛血清试验,最高效价可达1:20,480.三批阳性牛的检出率为94.0—96.57%.为解决耕牛现场查病需要,我室现在已少量试产耕牛锥虫病间接血凝诊断抗原(抗原与抗原对照液均为5毫升装),提供各地试用.此外,我们还将纯净锥虫速冻成冻干粉(20、50毫克安瓿装),每毫克冻干粉     

鄱阳湖滨湖水牛锥虫病的研究——一、伊氏锥虫的分离和纯化

我们利用自制的离子交换柱,使用进口的(英国,DE-52)和国产的(上海,DEAE-1)DEAE纤维素,对严重感染伊氏锥虫的小白鼠、大白鼠和小犬的血液进行了成功的分离,获得了无血细胞和无血小板的纯净锥虫.经过DEAE纤维素提纯后的虫数是:小白鼠8—20亿;大白鼠41—310亿;小犬120—650亿.分离和提纯后的锥虫运动活泼,具有感染力.分离主要依赖宿主血细胞、血小板和锥虫之间表面电荷的差异;成功的关键是缓冲液PH的标准状态和离子强度.     

《抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究》通过鉴定

江西省科学院受江西省科委的委托,于1991年12月27日为院属微生物研究所承担的省一级重点科研课题《抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究》召开了成果鉴定会。与会专家们经一天的认真评审,一致认为,该项研究选题准确,实验设计合理,技术指标全面,数据可信,结果正确,达到了国内单克隆抗体应用研究的先进水平。专家们一致同意该项研究通过鉴定。     

免疫酶染色试验检测广州管圆线虫病鼠血清抗体的实验研究

用广州管圆线虫雌虫冰冻切片作免疫酶染色试验（ＩＥＳＴ），检测感染广州管圆线虫大白鼠血清中抗体，结果在感染后３—９周的３９份大白鼠血清中，３７份呈阳性反应，阳性率为９５％，ＧＭＲＴ２８０．６７；３２份正常大白鼠血清，全部为阴性，检测１０份猪蛔虫抗原免疫大白鼠血清；３份曼氏这宫绦虫裂头拗抗原免疫大白鼠血清；７份日本血吸虫感染大白鼠血清，均呈阴性反应。     

应用PAPS免疫微球法快速诊断家畜锥虫病

ＰＡＰＳ锥虫快速诊断试剂，是中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所研制成功的一种新型的载体微球，它与伊氏锥虫抗原交联所制备的锥虫快速诊断液具有特异性强、敏感性高，重复性好、快速、简便的特点。笔者应用锥虫快速诊断液检测１４９头锥虫阳性病牛（见虫），阳性检出率为９８．７％。对２２５头非疫区阴性牛进行检测，阴性符合率为９９．６％。ＰＡＰＳ试验与间接血凝试验的符合率为９６．１％。对２２７７头耕牛血清和血纸两     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒lgM抗体的研究

目的建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法.方法采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAag,HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA测试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAVIgM,抗-HEVIgM两法总符合率依次为97.9%,98.4%,检测灵敏度可达2μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA测试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备.     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

目的探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记鼠抗人IgG单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg,HEAg)、抗体(羊抗鼠lgG)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAV IgG,抗-HEV IgG两法总符合率分别为98.9%,98.9%,检测灵敏度可达1μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

ELISA检测姜片虫病患者抗体的研究

研究了姜片吸虫成虫冷浸抗原检测姜片吸虫病患者血清抗体的敏感性和特异性及其在流行病和临床上的应用价值．超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原．以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性．按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果．普查2189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与改良加藤法的阳性符合率98．21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4．08％;与血吸虫病交叉阳性为9．38％,肺吸虫病交叉阳性为5．36％．姜片吸虫成虫冷浸抗原1：3500工作浓度包被酶标板,检测姜片虫病血清抗体具有敏感性高、特异强和交叉反应率低的特点．     

江西科学1993年总目次

＄1】# gi HH ·理论探讨·广义Noether定理与非完整动力学逆问题…………………………………………梅凤翔(1)一类非线性Schrbdinger方程整体解……………………………………………梅 茗(7) ·研究报告·再论拓扑B。。1e格的连通性…………,…………………………………………··障泵知(13)抗伊氏锥虫单克隆抗体的研究 二、用MCAb直接斑点法检测伊氏锥虫抗原的实验研究…………周静仪 王溪云(21)江西恒湖农场生态农业建设研究 1.郑阳湖圩区农业生态系统能量流动和养分循环分析…………………………………… ··,……秦泰颠 黄金平 陈国…     

传统抗原、重组抗原检测啮齿类动物病毒的ELISA法敏感性和特异性

酶联免疫吸附试验 (ELISA)是一种常用的检测啮齿动物血清病毒抗体的方法。用于检测血清抗体的抗原可是用常规方法制备的全病毒或是在原核或真核系统中表达的重组抗原蛋白。利用杆状病毒表达系统已获得细小病毒、沙粒样病毒和冠状病毒的带有His标记的重组病毒抗原。重组抗原在昆虫细胞中表达裂解后 ,可用色谱法提纯。提纯的抗原用来包被 96孔ELISA板。用细小病毒非结构蛋白 (NS 1) ELISA法检测啮齿动物血清 ,在检测的 345 7份样本中有 88份 (2 5 % )NS 1抗体阳性 ,9份 (0 3% )为非特异性反应。虽然NS 1ELISA检测NS 1抗体具有…     

血清灭活法对消除ELISA假阳性结果的比较研究

目的建立一种简便、易行的方法,对酶联免疫吸附试验的结果进行质量控制。方法依据国标ELISA方法对578份小鼠血清进行11种病毒抗体检测,共检测抗体3677份。对初步检测出的242份抗体阳性血清,经56℃30min水浴灭活处理后进行复检。结果可疑阳性血清经灭活处理后复检,正常抗原孔A值和特异抗原孔A值明显低于初检的正常、特异抗原孔A值,差异显著(P<0.05);初检和复检的特异抗原孔A值与正常抗原孔A值的比值有显著性差异(P<0.05);血清灭活前后阳性率有显著性差异(P<0.01),分别为6.58%和2.86%。阳性对照灭活前后A值无显著差异(P>0.05)。结论血清经灭活处理后,使检测结果的假阳性率显著降低。     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

BV EIA、BV ELISA在检测食蟹猴BV抗体中的比较研究

本中心待出口美国、德国的 5 34份食蟹猴血清用国产BVEIA抗原检测片检测后送美国BioReilance公司进行检测。 5 34份血清中 ,11分为阳性 ,5份为可疑 ,5 18份为阴性。经美国复检 5 14为阴性 ,8份为可疑 ,12份呈阳性。两者的检测符合率达 95 9% ,说明BVEIA检测准确度已达到国际检测水平 ,可为国内猕猴生产单位控制BV检测质量提供有力的技术保证。     

免疫酶技术检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

以抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（肾型ＩＢＶ）Ｔ株的鼠源免血清为一抗，辣根过氧化酶（ＨＲＰ）标记的羊抗鼠ＩｇＧ为二抗，建立了检测石蜡切片中肾型ＩＢＶ抗原的免疫酶组化技术，经过特异性试验和阻断性试验，表明该方法具有高度的敏感性和特异性，应用该法对人工感染肾型ＩＢＶＲＳ株的鸡气管和肾脏石蜡切片中的病毒抗原进行了检测，结果气管从感染后０．５～１１ｄ，肾脏从感染后１～２０ｄ均检测到病毒抗原，阳性染色体主要集中     

吗啡人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用化学法合成吗啡人工抗原,将此抗原免疫新西兰大白兔制备抗吗啡多克隆抗体.利用混合酸酐法将吗啡人工抗原分别与蛋白质载体BSA及OVA偶联,经蛋白质电泳以及紫外扫描检测,证明吗啡人工抗原合成成功.用间酶联免疫检测法检测,证明制备得到了高效价的吗啡多克隆抗体血清,且与吗啡人工抗原具有高特异性反应,可用于吗啡免疫学检测方法的研究.     

用免疫荧光法检测鸡痘病毒感染的研究

对应用免疫荧光法检测鸡痘病毒感染鸡血清进行了研究。在鸡痘病毒感染细胞培养物抗原标本制备、免疫荧光染色条件以及反应特异性等研究探索的基础上，对来自于秦皇岛地区鸡痘高发区１５６０份鸡血清的免疫荧光法检测阳性反应率为１６．５４％，比常规的琼脂扩散法（阳性反应率６．９９％）高出９．５５个百分点