盐酸法舒地尔抑制小鼠EAE作用及机制研究

目的探讨盐酸法舒地尔（Fasudil hydrochloride）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的抑制作用和可能的机制.方法按平均体重将C57BL/6雌性小鼠分为EAE组、盐酸法舒地尔治疗组和佐剂组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽（MOG35-55）诱导EAE模型,佐剂组以等量生理盐水代替.治疗组于免疫后6d开始按50mg（/kg·d）腹腔注射盐酸法舒地尔,EAE组和佐剂组用等量的生理盐水作为对照.比较各组小鼠的各种表现,并进行症状评分.免疫后18～20d取各组小鼠,制备脾脏淋巴细胞悬液,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测并比较各组淋巴细胞培养上清液中细胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的水平.结果盐酸法舒地尔能够显著改善EAE的症状,减轻中枢神经系统（CNS）炎性浸润及髓鞘脱失等病理变化,并且可抑制脾脏淋巴细胞分泌INF-γ、IL-17（P〈0.05）,促进IL-10的分泌（P〈0.05）.结论盐酸法舒地尔可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其对脾淋巴细胞中INF-γ、IL-17表达的下调和IL-10表达的上调作用有关.     

雌二醇对EAE大鼠ICAM-1和INF-γ表达的影响

目的探讨雌二醇对去卵巢后EAE大鼠的免疫抑制作用及其机制.方法制备去卵巢后10 d的EAE大鼠模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂组.E2治疗组在免疫后（post-inoculation,p.i.）0～5 d每日肌注E2（250μg/kg）一次.在p.i.6,8,10,12,14,16 d处死动物,用免疫组化技术检测脑和脊髓不同部位ICAM-1,IFN-γ的表达,并对EAE组ICAM-1和IFN-γ进行相关分析.结果与EAE组相比较,在p.i.6～12 d,E2治疗组血清E2浓度升高,临床症状评分降低,体重减轻减少,发病率较低,上述差异均有统计学意义;在p.i.10～16 d,E2治疗组ICAM-1与IFN-γ的表达降低,且具有统计学意义.EAE组ICAM-1与IFN-γ表达呈显著正相关性.结论E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2下调ICAM-1,IFN-γ的表达进而促使Th细胞发生转分化有关。     

雌二醇对大鼠EAE血-脑脊液屏障及TGF-β表达的作用

目的：探讨雌二醇（E2）对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）血脑屏障及转化生长因子-β（TGF-β）表达的作用。方法制作摘卵巢后10d的大鼠EAE模型,随机分成E2组、EAE组、佐剂对照组。E2组自免疫后（p.i.）0～8d每日肌注E2一次。测定各组于不同时间的症状评分、E2浓度、脑脊液与血清白蛋白含量的比值（QA）,依据QA评估血-脑脊液屏障（BCB）的破坏。在p.i.8～17d取脑和脊髓做髓鞘染色;应用免疫组化的方法测量各组TGF-β的表达。结果p.i.8～14dE2组血清E2浓度较EAE组升高;症状评分E2组低于EAE组;发病率E2组低于EAE组;P.i.8～17dE2组QA峰值低且出现时间较EAE组推迟;P.i.8～17dE2组TGF-β表达较EAE组增高。结论E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2保护BCB的结构和功能,以及增加TGF-β的表达有关。     

Rock抑制剂-Fasudil对EAE外周免疫的调节作用

目的探讨Rock抑制剂Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病起始环节的外周免疫调节机制。方法将雌性C57BL/6小鼠分为CFA组、EAE组和Fasudil组。Fasudil组动物免疫后第7 d腹腔给予Fasudi(l50mg/kg.d),连续给药14 d。免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体质量变化。在免疫后28 d处死动物,取脊髓进行HE染色和髓鞘染色,制备脾脏单个核淋巴细胞(MNC),测定细胞增殖和细胞因子IL-4,IL-10,IL-1β,IFN-γ的含量,流式细胞术观察CD4,CD25调节性T细胞的比例,部分脾脏组织和MNC涂片行免疫组化荧光染色观察Rock的表达。结果Fasudil在EAE外周免疫组织和细胞通过下调Rock的表达,抑制Rock的激活,明显改善EAE的临床症状评分(P<0.05);减轻EAE外周炎性细胞向中枢的浸润,缓解神经髓鞘的脱失;经Fasudil干预可以下调EAE外周特异性MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖能力,下调炎性细胞因子IFN-γ和IL-1β水平,升高保护性细胞因子IL-10水平,促进CD4,CD25调节性T细胞比例增加。结论 Rho/Rock信号通路的激活在EAE的发病中起着重要作用,应用Rock抑制剂--Fasudil抑制EAE免疫病理过程中外周免疫细胞激活这一起始重要环节,减少炎性细胞的中枢浸润,缓解EAE的临床症状。     

硫辛酸对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血脑屏障影响的研究

目的探讨硫辛酸（LA）对实验性自身免疫性脑脊髓炎血脑屏障的免疫调节作用．方法制备EAE动物模型，随机分为EAE组、LA治疗组和佐剂组．LA治疗组免疫后（post-inoculation，p．i．）0-5d每日肌注LA（100mg／kg）一次．观察各组在不同时间点血清和脑脊液中白蛋白含量比值（CSF to serum albumin quotient，QA），通过QA评定BBB的损害．观察各组症状评分、体重变化、发病率等临床指标．结果EAE组QA在p．i．8d达峰值（0．31±0．07），LA治疗组QA在P．i．14d达峰值（0．20±0．04），LA治疗组QA值幅度低且峰值出现时间延迟，与EAE组比较有统计学差异（P〈0．01）；LA治疗组临床症状评分（0．60±1．12）较EAE组（2．07±1．33）降低（P〈0．01）；LA治疗组体重减轻（7．07±3．75）较EAE组（15．06±4．20）减少（P〈0．01）；LA治疗组发病率（20％）较EAE组（73％）降低（P〈0．01）．结论继早期BBB损伤高峰之后，EAE临床症状开始出现并逐渐加重；LA通过保护BBB或促进BBB功能恢复缓解EAE．     

氨基葡萄糖治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎研究进展

氨基葡萄糖是葡萄糖的一种天然衍生物,是糖蛋白和蛋白聚糖的主要成分,可通过多种生理途径在细胞内合成.近年研究显示,氨基葡萄糖可作为免疫抑制剂和免疫调节剂在治疗多发性硬化（MS）及其动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）方面有一定的疗效.氨基葡萄糖可引起Th表型由Th1向Th2细胞转化,显著表现为TNF-α,IFN-γ,IL-17,IL-1分泌减少,IL-5和IL-10分泌增多.氨基葡萄糖通过不同给药方式,如口服、腹腔注射、静脉注射等对EAE都有一定治疗作用,具有低或无毒性、服用安全等优点.     

黄芪、党参对小鼠抗应激作用的比较研究

采用常压缺氧实验、低温游泳实验和热板法的实验方法,分别比较黄芪水煎剂、水提液和党参水煎剂、水提液对小鼠耐缺氧时间、低温游泳时间及痛阈的影响.结果表明,黄芪和党参的水煎剂均能增强小鼠抗应激反应的能力;黄芪提高小鼠抗应激反应的作用优于党参.其中在抗热刺激和耐缺氧实验中黄芪作用明显优于党参,而在低温游泳实验中黄芪和党参的作用无明显差别.     

黄芪甲苷下调托样受体4抑制心肌梗死心肌组织损伤的作用

分析黄芪甲苷调控托样受体4（Toll-like receptor 4 (TLR4), ）抑制心肌梗死心肌组织损伤的作用并探讨其作用机制。将Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组、二甲基亚砜（DMSO）组、模型（Model）组和黄芪甲苷治疗（AS-IV）组,每组均为10只。Model组采用经典的左冠状动脉结扎术复制心肌梗死模型,Sham组手术处理但没有进行结扎处理。AS-IV组将AS-IV溶于1%的DMSO中,20 mg·(kg·d)-1腹腔注射。Sham组和Model组给予等量的生理盐水,DMSO组给予等量含1%DMSO的生理盐水。给药方式均为腹腔注射,每日1次,连续14 d。采用HE染色法分析心肌组织病理变化,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡程度。逆转录PCR（RT-PCR）检测心肌细胞TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法和免疫组化法检测心肌心肌细胞TLR4蛋白的表达。结果表明：AS-IV治疗可显著减轻心梗大鼠心肌组织的坏死程度,降低炎症细胞的数量,减少疤痕组织的增生,显著减轻心肌细胞的凋亡,下调心肌组织中TLR4 mRNA和蛋白的表达。可见AS-IV通过下调心梗大鼠心肌组织中TLR4样受体的表达而对抗心梗后心肌组织的损伤。     

苦参注射液治疗乙型肝炎性肝硬化疗效及其作用机制研究

目的观察苦参注射液对慢性乙型肝炎性肝硬化的临床效果及其作用机制.方法将58例慢性乙型肝炎性肝硬化患者随机分为观察组和对照组,在一般支持治疗的基础上,观察组加用苦参注射液,治疗8周后,比较两组肝功能、肝纤维化指标.结果观察组肝功能改善显著,肝纤维化减轻,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05).结论在正常治疗基础上加用苦参注射液,有助于肝炎性肝硬化患者的肝功能恢复,有较好的临床效果.其作用机制可能是通过影响外周单核细胞IL-10表达、调节机体促炎抗炎平衡而实现的.     

细胞周期调控蛋白Cdkn2a对于CD8~+T细胞中IL-10表达调控机制的初步研究

IL-10是一种典型的抑制性炎症因子,在机体免疫反应中发挥着重要的作用,探明该因子的表达调控机制对于阐释免疫应答在炎症反应、肿瘤发生发展等过程中的作用机制均具有重要意义.在前期工作的基础上,利用IL-10转基因报告小鼠10BiT,对细胞周期调控蛋白Cdkn2a在IL-10分泌型CD8+T细胞中调控IL-10表达的机制进行了初步探讨.结果显示,Cdkn2a对于CD8+T细胞中IL-10的表达调控与细胞分裂无关,而是可能作用于IL-4信号通路的下游来发挥作用.该工作为深入探讨Cdkn2a对IL-10的表达调控机制奠定了初步的基础.     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的 为更好地研究多发性硬化症(MS)的发病机理、开发具有良好效果的MS治疗药物,建立起能高度模拟人类多发性硬化症发生发展的小鼠模型则显得尤为必要且具有极高的应用价值。本文使用已广泛应用的标准化C57BL/6小鼠作为实验对象,成功地构建了实验性变态反应性脑脊髓炎模型(EAE)。此模型为研究人类多发性硬化症的发病机理及开发相关临床治疗药物提供了良好的小鼠模型。方法 C57BL/6雄性小鼠20只,分为2组。EAE组10只,皮下注射混匀的弗氏不完全佐剂与MOG53-58及结核分枝杆菌的悬浊液,同时分别在day0和day2腹腔注射百日咳毒素0.2μg/只;正常对照组10只,仅注射生理盐水。采用HE染色方法观察小鼠组织学变化;免疫组织化学方法进一步研究小鼠病理变化。结果 从抗原免疫后第10天开始EAE组小鼠陆续发生EAE临床症状且发病率达到100%,而正常对照组小鼠未发生任何EAE临床症状。组织病理学结果分析显示,EAE组小鼠脊髓及脑组织中出现大量炎性细胞浸润且脱髓鞘严重。结论 本实验成功构建的EAE小鼠模型病程稳定且发病率高,可用于MS机制研究及MS防治药物的筛选。     

茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞分泌作用的影响

本文研究利用小鼠巨噬细胞建立体外实验模型,对茶叶糖蛋白(TGP)的免疫活性进行研究。采用倒置显微镜观察细胞形态变化。Griess法和ELISA法检测不同剂量茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)和细胞因子TNF-α、IL-1β分泌量的影响。结果表明:50μg/mL茶叶糖蛋白可显著促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子TNF-α、IL-1β(p<0.01),说明茶叶糖蛋白可通过促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子,起到活化RAW264.7细胞和调节机体免疫的功效。     

茯苓和黄芪最佳精制工艺的研究

采用均匀设计,运用紫外-可见分光光度法,采用壳聚糖精制.以样品出膏率及测定多糖、黄芪甲苷含量为指标.最佳精制工艺为每100 mL药液加入1%的壳聚糖溶液25 mL.     

西替利嗪结合黄芪注射液治疗慢性荨麻疹46例疗效观察

目的：观察黄芪注射液结合西替利嗪治疗慢性荨麻疹的疗效．方法：将46例患者随机分为两组,每组23例．对照组采用西替利嗪片治疗,1次10mg,1日1次,口服,10天为1个疗程．治疗组在西替利嗪片治疗的基础上加用中药黄芪注射液20ml加入0．9％生理盐水250ml静脉点滴,每日一次．结果：治疗组中有效22例,有效率95％,对照组有效17例,有效率73％,两组疗效比较P〈0．05．结论：黄芪注射液结合西替利嗪治疗慢性荨麻疹有确切疗效．