新型免疫疫苗——DNA疫苗

DNA疫苗是近几年发展起来的一种新型疫苗 .将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体,然后用物理方法将重组质粒导入体内细胞,抗原编码基因即在细胞内合成抗原蛋白,诱发机体产生保护性免疫反应 .DNA疫苗是独特而有效的接种方法,实验证明它可以用来抵抗病毒感染和医治肿瘤等,有广泛的应用前景 .     

DNA疫苗及其在卵黄抗体制备中的应用

DNA疫苗技术由于其独特的作用和优势,现已成为最有发展潜力的新兴免疫技术之一。将DNA疫苗技术和卵黄抗体技术联合起来,可获得效价更高、亲和性更好和成本更低的卵黄抗体。就DNA疫苗和卵黄抗体的各自特点以及DNA疫苗技术在卵黄抗体制备中的应用优势进行综述。     

一种新型基因枪的研究

为研制一种适应各种场合 ,尤其是在野外操作的基因枪 ,满足将目的基因导入动植物细胞 ,使之稳定表达并遗传 ,实现培育或改良新的优良品种。以压缩弹簧为动力 ,运用撞击发射原理 ,对裹着基因的微粒进行加速 ,使之获得足够的动能 ,去射击靶细胞。弹簧预压力不同 ,微弹的动能随之不同 ,可适应不同细胞的要求。利用所设计的装置 ,在常压下将GUS基因导入番茄叶片细胞 ,经检测 ,得到表达 ;将质粒psv- luc2 0转入小鼠的皮肤、腹部肌肉和肝脏内 ,也得到表达。实验表明 ,该构思是可行的 ,实验装置可以在常压下操作 ,能在各种条件下使用     

DNA疫苗的佐剂研究综述

DNA疫苗是新发展起来的一种疫苗。它有许多传统疫苗所没有的特点，但是其免疫原性较弱限制了应用。本文探讨了传统与新型分子免疫佐剂在提高DNA疫苗的免疫效果方面发生的作用，其中主要从细胞因子、趋化因子、CpG序列三个方面来说明。     

肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

DNA疫苗在动物医学中的应用

DNA疫苗是继减毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后的又一新型疫苗,比其它疫苗高效、安全且易于大量生产。本文对DNA疫苗在牛、猪和鸡一些病毒病上的使用效果及其安全问题等方面的研究近况作一综述。     

乙型肝炎表面抗原基因DNA介导的体液免疫初步研究

用ＣＰＲ技术从纯化的乙型肝炎病毒核酸中扩增出ｐｅｒＳ２－Ｓ基因,并将其定向克隆于真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１（＋）中,构建成带有完整的乙肝表面前Ｓ２抗原基因和Ｓ基因的重组质粒。重组质粒经酶切及部分序列分析鉴定后,瞬时转梁小鼠Ｌ细胞,ＥＬＩＳＡ法检测到培养上清液有ＨＢｓＡｇ表达。用纯化的重组质粒静脉、肌肉和皮下注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,首次接种质粒ＤＮＡ３周后,血清抗体开始出现,再次加强２周后,阳性     

抗—DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇和硫酸铵从系统性红斑狼疮患血清中分离出免疫复合物和血浆核酸。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ．     

HIV-1和HBV复合型DNA免疫的初步研究

近年的研究表明,在啮齿类和非人灵长类免疫带有编码病毒和细菌抗原基因的质粒ＤＮＡ可以激发体液和细胞免疫应答．在本实验中,将ＨＢＶ的Ｓ基因和ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０基因以融合形式插入到载体ｐｃＤＮＡ３中,其能表达ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０的融合蛋白,并将此质粒ＤＮＡ分别直接注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠和Ｓｗｉｓ小鼠．三次免疫后,用ＥＬＩＳＡ的方法初步检测ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０抗原特异的抗体免疫应答均为阳性．结果说明,带有ＨＢＶ和ＨＩＶ－１融合基因的质粒ＤＮＡ直接免疫小鼠后,均激发了小鼠产生相应的免疫应答反应,这个结果为研究和生产多价疫苗提供了新的思路     

乙肝病毒核酸疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究

研究利用核酸疫苗诱生乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原 (S)细胞免疫应答的作用 .免疫前于BALB/C小鼠股四头肌注射 75 %盐酸布比卡因 ,三天后同样部位注射包含HBsAg基因片段的重组质粒pcDNAHBs .采用3H -TdR掺入法测定免疫小鼠脾细胞增殖能力 ;XTT法测定其脾细胞分泌IL 2活性 .结果表明注射乙肝核酸疫苗可以使小鼠脾细胞增殖 ,小鼠脾细胞分泌上清中可检测到IL - 2活性     

微小隐孢子虫表面抗原CP23DNA疫苗免疫山羊诱导免疫应答及保护性研究

观察微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum)子孢子表面抗原CP 23 DNA疫苗免疫山羊诱导其产生免疫应答和保护性作用。将重组质粒pCR3.1-23经鼻粘免疫怀孕山羊，用ELISA测定IgG和IgA抗体滴度，用C.parvum卵囊经口对其后代攻虫感染。抗CP23抗体存在于免疫山羊的血浆和初乳中，且抗体滴度随免疫时间延长而增高。C.parvum卵囊经口感染后代，试验组山羊后代与对照组相比，卵囊排出数量减少，排出时间缩短，微小隐孢子虫表面蛋白CP 23 DNA疫苗能诱导山羊产生特异性免疫应答并对其后代有一定免疫保护作用。     

人角质细胞生长因子基因转化水稻的初探

角质细胞生长因子（Keratinocyte growth factor，KGF）在组织的损伤修复中起着重要的作用．在植物里面表达高活性的KGF具有成本低、易开发的优点．本实验将人角质细胞生长因子基因经农杆菌介导转入水稻中，获得110株再生植株．对再生植株进行GUS检测发现有44．7％植株呈阳性，PCR检测的结果也显示有52．6％的植株为阳性植株．     

gD2 DNA疫苗诱导细胞免疫应答

用生殖器疱疹gD2 DNA疫苗pcDNA3-gD转染哺乳动物细胞COS-7,鉴定gD表达．再用其免疫BALB／c小鼠,测定脾细胞增殖、CTL细胞杀伤活性,以及CD4^ 和CD8^ 细胞群．结果表明：pcDNA3-gD能够在哺乳动物细胞COS-7中表达gD抗原,其免疫小鼠脾细胞增殖活性增加,CTL活性达37．69％,明显高于pcDNA3组和生理盐水组;CD4^ 占T细胞数量的33．38％,数量较pcDNA3组和生理盐水组显著增加．     

转乙肝表面抗原基因植物疫苗研究的进展

介绍了转基因疫苗生产的原理及方法，综述了转乙肝表面抗原基因植物疫苗的研究进展，探讨了转基因植物研究中所存在的问题及其转基因植物疫苗的优点及前景。     

人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定

构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原（Proinsulin）的DNA疫苗,并在体外对其表达产物进行鉴定。从人胰腺cDNA库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA,克隆入载体PGEM－T中,再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建重组载体pcDNA3.1( )／Proinsulin,测序后在真核细胞COS－7中进行体外短暂表达,Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果克隆的人Proinsulin基因,测序表明其cDNA序列与Genbank公布的序列基本相同,仅在第63位氨基酸（C肽区）有一CAG（Glu)→CGG（Arg）的突变,Western免疫印迹法证实DNA疫苗在COS－7细胞中有效地获得了表达。结果说明运用基因克隆方法构建的Proinsulin DNA疫苗,在真核细胞内能有效地表达Proinsulin重组抗原。该疫苗的构建成功,为1型糖尿病的免疫干预提供了实验基础。     

DNA甲基化与基因调控

ＤＮＡ甲基化或去甲基化,改变了ＤＮＡ分子构象,导致某些重要基团的隐蔽或暴露,削弱或增强了ＤＮＡ与蛋白质因子的结合能力,从而改变了基因表达．     

重组大肠杆菌发酵生产核酸疫苗的初步研究

初步摸索大肠杆菌DH 5α生产核酸疫苗的发酵条件。通过均匀试验设计确定,当胰蛋白胨与酵母粉的质量比为1∶1.2,并且磷酸盐的加量较大时菌体的质粒产量较高。在菌体生长刚进入对数生长期时采用指数式流加葡萄糖与采用恒速流加葡萄糖,菌体得率相同,而产物收率前者高于后者。在菌体生长进入平稳期时将温度由37°C升高到42°C,在菌体密度没有改变的情况下,质粒产量得到提高,达到75 m g/L。     

靶序列三链DNA对质粒pBR322的Ampr基因表达的抑制

利用ＣａＣｌ２法成功地将寡核苷酸导入大肠杆菌ＪＭ１０９细胞。质粒ｐＢＲ３２２转化结果表明,寡革酸片段５’－ＡＧＣＧＧＧＡＡＴＡＡＧＧＧＡＡ－３’在转化前（或后）与靶序列结合均能抑制β－内酰胺酶基因的表达,细菌生长受到抑制。体外聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该片段能与靶序列形成三链结构。这些结果表明多聚嘌呤寡核苷酸是通过与靶序列形成三链ＤＮＡ来抑制β－内酰胺酶基因的表达。     

肝片吸虫抗原基因转基因苜蓿再生的研究

用直接转化法，将构建有肝片吸虫保护性抗原基因FH3的植物表达载体pBI121-FH3,导入感受态的根瘤农杆菌EHA105；以重组的根瘤农杆菌为介导，用叶盘法转化苜蓿外植体，筛选得到抗Kan转化外植体；抗性外植体通过诱导丛生芽和诱导生根，再生出完整植株，提出植株总DNA进行Southern blot，结果表明，FH3基因已经整合入苜蓿基因组中。