蜡样芽孢杆菌LJ01的鉴定及亚硝酸盐还原酶性质

从豆瓣酱中筛选出一株能高效降解亚硝酸盐的菌株LJ01,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.通过测定LJ01细胞中不同组分的酶活,研究了亚硝酸盐还原酶的初步定位.LJ01经100 mg/L的Na NO2诱导后,用溶菌酶破壁,粗酶液先经阴离子DEAE Sepharose Fast Flow层析柱分离,测定不同蛋白组分a、b、c降解亚硝酸盐的活力,利用0.1 mol/L无机电子供体丁二酸和亚硫酸钠等鉴定出组分c为亚硝酸盐还原酶,再经葡聚糖凝胶G-150层析柱分离,获得较纯的亚硝酸盐还原酶,每升发酵液可得到0.54 mg活性酶蛋白,酶蛋白活力达到4004.89 U/mg,得率为2.37%,纯化后其NiR的比活力提高了17.57倍.经SDSPAGE电泳后确定LJ01中亚硝酸盐还原酶的单体分子质量约为30 ku.     

微生物谷氨酰胺转胺酶对大豆分离蛋白凝胶性的影响

利用Streptoverticillium sp.CJ3033菌株发酵得到发酵液,经过滤、离心、冷冻浓缩、乙醇沉淀和冷冻干燥后,制得的谷氨酰胺转胺酶粗酶作用于大豆分离蛋白,利用物性分析仪研究了MTG对大豆分离蛋白形成凝胶的特性及持水性的作用.通过二次回归正交组合设计的方法研究了MTG的添加浓度、作用时间、处理温度对SPI凝胶形成及保水性的影响,结果显示:MTGase对大豆分离蛋白有显著改善作用,在51℃、反应1.5 h、酶浓度9.82 U/g时,SPI的凝胶强度最大,达74.95 g/mm2;在49℃、反应1.3 h、酶浓度7.78 U/g时,SPI的持水率为96.47%.     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶分离纯化研究

对产白地表茅孢杆菌(B.licheniformis)的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE阴离子交换层析,凝胶层析4步纯化.以酶比活力为指标,对碱性蛋白酶分离纯化条件进行了优化.结果发现:提纯酶的比活力达62098U/mg,纯化倍数为23.7,活性回收率为15.7%.     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

盐地碱蓬超氧化物歧化酶的提取及抗氧化活性的研究

以盐地碱蓬为原料提取超氧化物歧化酶(SOD),采用邻苯三酚自氧化法对其酶活进行测定。实验结果表明:10g盐地碱蓬中提取的SOD,经硫酸铵分级沉淀、氯仿/乙醇沉淀、丙酮沉淀及热处理后,酶活分别为427.035U/mg、648.6736U/mg和1181.856U/mg。     

rDNA介导的菊粉酶基因整合载体构建及在K.marxianus中应用

为提高Kluyveromyces marxianus(K.marxianus)发酵菊芋粉生产乙醇过程中的菊粉酶活性,以酿酒酵母rDNA为整合位点,构建菊粉酶基因的整合表达载体pFA6a-rDNA-pgk-inu.经Sph I线性化后,采用电击法转化K.marxianus,使表达载体整合到K.marxianus的染色体上.经PCR鉴定的阳性转化子能够分泌菊粉酶且能在无筛选压力下稳定遗传50代.重组菌K/r-2分泌的菊粉酶活力为140U/mL,比出发菌株提高了80%.以粗菊芋粉生料为底物进行了补料发酵,重组菌株的发酵终点乙醇浓度为76.5g/L,比出发菌株提高了5g/L,达到理论转化率的96%.这些研究工作为非粮作物菊芋生产燃料乙醇奠定了基础.     

鸭血红细胞SOD的初步分离纯化与部分性质

经氯仿-乙醇分级分离,丙酮沉淀的方法,从鸭血红细胞中得到粗Cu,Zn-SOD。结果表明丙酮沉淀比活力为664.48 U.mg-1,提纯倍数为20.29,SOD活性在30~70℃时变化不明显,但超过后急剧下降,50℃下热稳定性较低,在pH值为3~8之间基本保持稳定。     

鲍鱼内脏β-葡萄糖苷酶中试规模制备研究

采用胶体磨匀浆、高速管式离心、陶瓷复合膜过滤、超滤、DEAE-琼脂糖离子交换层析和CM-琼脂糖离子交换层析的中试制备工艺,从鲍鱼内脏中分离纯化得到β-葡萄糖苷酶.研究发现:胶体磨匀浆所得匀浆液总酶活为12 174.21 U,比活力为0.158 U·mg~(-1);高速管式离心两次后得到粗酶液,酶比活力为0.247 U·mg~(-1);陶瓷复合膜过滤后所得清液的酶比活力为0.133 U·mg~(-1);超滤浓缩脱盐后所得浓缩液的酶比活力为0.249U·mg~(-1);DEAE-琼脂糖阴离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为7.5,CM-琼脂糖阳离子交换层析洗脱缓冲液的最佳pH值为6.0;DEAE-琼脂糖阴离子交换层析后收集酶活性组分的酶比活力为0.492 U·mg~(-1),CM-琼脂糖阳离子交换层析收集酶活性组分的酶比活力为1.709 U·mg~(-1),纯化倍数为10.78,收率为5.0%.     

中华芦荟多酚氧化酶的分离纯化

采用丙酮粉沉淀抽滤法从中华芦荟中提取多酚氧化酶.提取的粗酶液经30%~80%硫酸铵分级沉淀,透析除盐,DEAE-Sephadex A-50阴离子交换柱层析,后经PEG 6000浓缩,得到纯化的多酚氧化酶,其纯化倍数为13.28.纯化后的酶液经SDS-PAGE电泳分析,采用考马斯亮蓝R-250染色显示为单一蛋白带,分子量约为54.1 KD.     

青霉素酰化酶研究——Ⅰ.抑制作用,纯化和性质

丙酮、乙醇和苯丙氨酸是大肠杆菌青霉素酰化酶的竞争性抑制剂,分别抑制模拟底物3-苯乙酰胺基6-硝基苯甲酸水解的活力。青霉素酰化酶粗酶液经硫酸铵盐析,pH5沉淀,SE-Sephadex C50层析,苯丙氨酸-Sepharose 4B疏水层析和DEAE-Sephadex A25层析可得纯酶,聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳呈现一条带,比活为27.5u/mg蛋白。纯化总活力回收率为28.1%。青霉素酰化酶分子量约为90000,有两个亚基,分子量分别为70000和20000,其最适温度为40℃,最适pH为8.0,催化青霉素G水解的米氏常数为2.94mmol/L。