水稻Hsp70基因第一个内含子中snoRNA基因簇的保守性及分布特点

对水稻、野生稻和茭白Ｈｓｐ７０基因第一个内含子进行ＰＣＲ分析及部分序列测定，分析结果表明植物Ｈｓｐ７０基因内含子编码多个ｓｎｏＲＮＡ的基因组织具有一定的保守性和分布范围，揭示了植物内含子编码的ｓｎｏＲＮＡ在进化过程中具有比脊椎动物和酵母更加丰富的多样性和移动性．     

C1 SnoRNA，水稻中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和ｃＤＮＡ序列分析等方法，在水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）中发现了一种新的核仁小分子ＲＮＡ：Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ．该ＲＮＡ具有ｂｏｘＣ，ｂｏｘＤ和末端碱基配对区等典型的核仁小分子ＲＮＡ结构特征；并有１４个核苷酸与水稻１８ｓｒＲＮＡ中一段保守序列互补．推测Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ可能在１８ｓｒＲＮＡ甲基化过程中起重要作用．编码Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ的基因位于水稻Ｈｓｐ７０基因的第一个内含子中．这是在水稻中发现的第一个由基因内含子编码的ＳｎｏＲＮＡ．     

哺乳动物核仁蛋白基因编码多个内含子snoRNA

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是真核生物核糖体合成中一类重要的调控分子,广泛地存在于酵母和哺乳动物中．ｓｎｏＲＮＡ基因组织具有高度的多样性．在哺乳动物中,除Ｕ３、Ｕ８、Ｕ１３和７－２／ＭＲＰＲＮＡ是独立转录之外,其它ｓｎｏＲＮＡ都是由宿主基因（ｈｏｓｔｇｅｎｅ）内含子编码的［１］．目前已发现多种类型的宿主基因如核糖体蛋白基因,热激蛋白基因（ｈｓｃ７０）,细胞周期调控蛋白基因（ＲＣＣ１）以及一些转录和翻译起始因子基因等．本文报道通过对人、小白鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）和大鼠（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒ…     

核仁小分子RNA基因的起源初探

通过分析、比较含ＢｏｘＣ／Ｄ和含ＢｏｘＨ／ＡＣＡ这两类ｓｎｏＲＮＡ的一些代表与几种剪接体ｓｎＲＮＡ的序列和二级结构特征，研究它们的进化关系，并探讨ｓｎｏＲＮＡ是起源于内含子还是后来才插入到内含子中这一与ｓｎｏＲＮＡ的起源密切相关的问题．结合对剪接体ｓｎＲＮＡ起源的有关研究，提出两类ｓｎｏＲＮＡ最初是起源于原始Ⅱ类内含子中的不同部分的观点．     

酵母snR72￣78snoRNA基因簇的研究

通过ＰＣＲ分析发现ｋｌｕｙｕｅｒｏｍｙｃｅｓ ｄｅｌｐｈｅｎｓｉｓ中存在与酿酒酵母相似的ｓｎＲ７２～７８ｓｏｎＲＮＡ基因簇。对该基因簇进行序列测定并与酿酒酵母比较分析,发现基因簇中各个ｓｎｏＲＮＡ编码区具有一定的保守性,但是基因间隔区却有完全不同的序列,这表明ＲＮａｓｅⅢ对ｓｎｏＲＮＡ前体加工的识别信号存在于各ｓｎｏＲＮＡ基因间隔的高级区的高级结构中。进一步对另外４种酵母进行ＰＣＲ分析,结果表明ｓ     

酿酒酵母中一种新的反义snoRNA分子的鉴定

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是一类在真核生物核糖体生物合成过程中起重要作用的小分子ＲＮＡ．通过计算机直接分析国际分子生物学数据库及ＲＮＡ杂交分析、ｃＤＮＡ序列测定等方法,在酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中发现和鉴定了１个新的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ．该ｓｎｏＲＮＡ长１０９个核苷酸,由位于酿酒酵母第１３号染色体上的１个独立基因编码．Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ含有ｂｏｘＣ（ＵＧＡＵＧＡ）、ｂｏｘＤ（ＣＵＧＡ）等保守的结构元素,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,即分子中有１段１１个核苷酸的片段与２５ＳｒＲＮＡ中１段保守核心序列互补,该ｓｎｏＲＮＡ片段连同其下游的ｂｏｘＤ共同指导与其互补的ｒＲＮＡ序列第２１９５位胞苷酸的２’－氧－核糖的甲基化．     

粟酒裂殖酵母Z15 snoRNA的鉴定及结构与功能分析

运用计算机及实验的方法,在粟酒裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）中发现和鉴定了一个新的,结构特殊的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ１５。该ｓｎｏＲＮＡ由一个独立转录的基因编码,位于酵母２号染色体上,Ｚ１５长达９２个核苷酸,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它除了具有典型的ｂｏｘＣ／Ｄ结构元素和末端配对区外,还含有分别与酿酒酵母Ｚ１５和Ｚ２相同的两个反义序列,反映了粟酒裂残酵母Ｚ１５ｓｎｏＲＮＡ基     

酵母snoRNA基因簇启动子的比较分析

报道对酿酒酵母ｓｎｏＲＮＡ基因簇启动子序列的研究结果．通过计算机分析,发现酿酒酵母中Ｚ２Ｚ８和ＳｎＲ１９０Ｕ１４ｓｎｏＲＮＡ基因簇有相似的启动子结构．这两个ｓｎｏＲＮＡ基因簇都是由一个上游的启动子负责整个基因簇的转录,产生多个顺反子ｓｎｏＲＮＡ的前体,然后再加工成熟为各个独立的ｓｎｏＲＮＡ．在启动子保守序列ＴＡＴＡｂｏｘ的上游还发现２个ＲＡＰ１序列,表明ｓｎｏＲＮＡ基因簇的表达可以通过ＲＡＰ１元素与核糖体蛋白基因的表达协同调控．这是在ｓｎｏＲＮＡ基因的启动子中首次发现ＲＡＰ１调控元素．对ｓｎｏＲＮＡ基因簇的进化特点也进行了讨论．     

拟南芥U59 snoRNA基因簇的结构与功能研究

在拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）中发现和鉴定了具有以义序列的ｓｎｏＲＮＡ组成的一个基因簇，该基因族由两个相同的ｓｎｏＲＮＡ基因组成。位于ｂｏｘＤ′上游的反义序列与人Ｕ５９ｓｎｏＲＮＡ的反义序列相同。因此命名为拟南芥Ｕ％９ａ和Ｕ５９ｂ。位于ｂｏｘＤ上游的反义序列在所有哺乳动物和酵母ｓｎｏＲＮＡ基因的反义序列中未找到同源拷贝，经低浓度的ｄＮＴＰ逆转录检验证实此反义序列并不指导拟南芥     

Z7 snoRNA：酿酒酵母中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和分子杂交等方法，在酿酒酵母中发现了一种新的核仁小分子ＲＮＡ：Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ。该ｓｎｏＲＮＡ具有ｂｏｘ Ｃ和ｂｏｘ Ｄ等结构元素，并有１４个核苷酸与１８Ｓ ｒＲＮＡ中的一段保守序列互补，属于典型的以核酸序列指导大分子ｒＲＮＡ甲基化的ｓｎｏＲＮＡ类型。Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ指导酿酒酵母１Ｓ ｒＲＮＡ中第５７８位的尿嘧啶核苷酸的核糖甲基化。Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ长８８个核     

一种从基因数据库中识别反义snoRNA基因的新方法

报道一种从国际分子生物学数据库中识别反义ｓｎｏＲＮＡ基因的计算机新方法．介绍新方法的生物学原理及在反义ＳｎｏＲＮＡ新基因发现中的应用．     

乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游．重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达．用纯化后的重组质粒直接注射到ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体．ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合     

大肠杆菌二硫键异构酶DsbA和脯氨酸异构酶PPIaseA双顺反子表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌二硫键异构酶ＤｓｂＡ的编码基因ｄｓｂＡ和大肠杆菌捕氨酸异构酶ＰＰＩａｓｅＡ的编码基因ｒｏｔ,并将ＤｓｂＡ和ｒｏｔ以顺反子形式克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＫＫ２３３－２中。在ＩＰＴＧ的诱导下,ＤｓｂＡ和ＰＰＩａｓｅＡ获得了表达。     

乙型肝为病毒（HBV）DNA免疫的初步研究

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增了编码ＨＢＶｓＡｇ的基因序列,将其插入到ｐｃＤＮＡ３载体中,位于人巨细胞病毒（ＣＭＶ）早期启动子下游,重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ｓＡｇ转染细胞后检测到ＨＢｓＡｇ表达,用纯化后的重组质粒直接注射用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗ＨＢｓＡｇ特异性抗体,ＰＣＲ扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源ＨＢＶＤＮＡ整合。     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

水稻基因组中U2snRNA基因的结构分析

对水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因的结构分析结果表明单子植物水稻的Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因以多基因家族的形式存在,且Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因中存在连锁现象。３个新的水稻Ｕ２ｓｎＲＮＡ基因和已报道的ＦＤＲＧＵ２－３一样,编码区上游除含有植物ＵｓｎＲＮＡ基因共有的ＵＳＥ和ＴＡＴＡ元件外,还含有单子叶植物ＵｓｎＲＮＡ所特有的ＭＳＰ元件,且具有保守的四茎环二级结构,基因成员间的同源性最低为８５．１＾     

HIV-1和HBV复合型DNA免疫的初步研究

近年的研究表明,在啮齿类和非人灵长类免疫带有编码病毒和细菌抗原基因的质粒ＤＮＡ可以激发体液和细胞免疫应答．在本实验中,将ＨＢＶ的Ｓ基因和ＨＩＶ－１的ｇｐ１６０基因以融合形式插入到载体ｐｃＤＮＡ３中,其能表达ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０的融合蛋白,并将此质粒ＤＮＡ分别直接注射到Ｂａｌｂ／ｃ小鼠和Ｓｗｉｓ小鼠．三次免疫后,用ＥＬＩＳＡ的方法初步检测ＨＢｓＡｇ和ｇｐ１６０抗原特异的抗体免疫应答均为阳性．结果说明,带有ＨＢＶ和ＨＩＶ－１融合基因的质粒ＤＮＡ直接免疫小鼠后,均激发了小鼠产生相应的免疫应答反应,这个结果为研究和生产多价疫苗提供了新的思路     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

大肠杆菌二硫键异构酶DsbA和脯氨酸异构酶PPIaseA双顺反子表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌二硫键异构酶ＤｓｂＡ的编码基因ｄｓｂＡ和大肠杆菌脯氨酸异构酶ＰＰＩａｓｅＡ的编码基因ｒｏｔ,并将ＤｓｂＡ和ｒｏｔ以双顺反子形式克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＫＫ２３３－２中。在ＩＰＴＧ的诱导下,ＤｓｂＡ和ＰＰＩａｓｅＡ获得了表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：ＤｓｂＡ、ＰＰＩａｓｅＡ的表达水平分别为占菌体裂解上清液总蛋白质的４．３２％和４．０６％。     

小麦叶绿体psbA基因的克隆及表达

用ＰＣＲ直接从小麦叶绿体基因组扩增到完整的ｐｓｂＡ基因，并构建了ｐｓｂＡ基因的克隆ｐＴＤ１Ⅱ。为研究ｐｓｂＡ基因在Ｅ·ｃｏｌｉ中的表达，将完整的ｐｓｂＡ基因正向插入高表达载体ｐＫＫ２２３－３中构建表达克隆ｐＫＴＤ１。含有重组表达质粒的转化细胞经ＩＰＴＧ诱导后提取总蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，小麦叶绿体ｐｓｂＡ基因能在Ｅ·ｃｏｌｉ中表达３２ｋＤ的Ｄ１蛋白，表达的Ｄ１蛋白占细菌总蛋白的３％以上。