衣藻肌动蛋白-绿色荧光蛋白的融合基因在烟草悬浮细胞中的表达及融合蛋白的体外聚合

将衣灌（Chlamydomonas reinhardtii)肌动蛋白（actin）基因(cDNA)与绿色荧光蛋白（green fluorescence protein,GFP)基因融合后,分别构建到原核和植物表达载体中,并在BL21plus细菌和烟草悬浮细胞（BY-2）中进行表达。通过荧光显微镜观测到重组后的融合蛋白在菌体和烟草悬浮细胞中得到正确表达。肌动蛋白-绿色荧光蛋白 的融合蛋白主要分布在烟草悬浮细胞细胞膜周围,参与膜骨架的组成,另外还大量分布于细胞核周围和细胞板的位置,同时也在细胞内形成丝状结构,参与F-actin的组成。将肌动蛋白-绿色荧光蛋白融合基因的原核表达产物经过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和疏水柱层析后,得以纯化,并在纯化产物中加入肌动蛋白聚合缓冲液,纯化的肌动蛋白能聚合成为丝状结构即F-actin,这表明低等藻类的肌动蛋白具有同高等植物和动物相似的性质和功能。     

玉米花粉中凝溶胶蛋白的免疫化学鉴定

肌动蛋白广泛存在于各种真核细胞中,参与细胞内多种运动过程。在正常生理条件下,肌动蛋白以两种形式存在:单体（G-actin）及聚合体（F-actin）,两者在细胞内通过聚合解聚作用维持动态平衡。F-肌动蛋白为双股螺旋丝,它能进一步形成更有序的微丝束或网状结构,以维持细胞正常生命活动所需的空间结构和胞内物质的定向运动。细胞能在特定的时间、空间调节肌动蛋白的聚合解聚过程,能与肌动蛋白结合并调节其聚合解聚作用的一类蛋白统称为肌动蛋白结合蛋白（Actin-binding proteins,简称ABPs）,目前生物界已发现了几十种ABP。凝溶胶蛋白（Gelsolin）是研究较为清楚的一种ABP,最早Yin和Stossel于1979年从兔肺巨噬细胞提取液中分离得到,以后证明它普遍存在于低等的真核生物到高等哺乳动物中,依其来源可分     

花粉中的肌动蛋白和肌球蛋白及其在花粉管伸长中的作用

植物花粉萌发后,花粉管中的细胞质流动是很活跃的。这种细胞质流动与其中的肌动蛋白和肌球蛋白有密切的关系。 花粉中存在肌动蛋白,Condeelis曾经用电子显微技术证明用孤挺花(Amaryllis belladonna)的花粉原生质体和花粉管中存在F-肌动蛋白。 我们从许多种植物的花粉中提取得到肌动蛋白和肌球蛋白,用细胞松弛素等证明花粉管中的肌动蛋白与肌球蛋白是细胞质流动的动力,并且证明花粉管的伸长受Ca~(2+)的调节。     

从花粉肌动蛋白到作物雄性不育

肌动蛋白在动植物细胞的生命活动中担负着重要任务. 花粉细胞中含有丰富的肌动蛋白,其结构及性质与动物肌动蛋白极其相似. 植物肌动蛋白基因的碱基序列及氨基酸序列与动物的序列亦极为相似. 植物细胞质雄性不育系植株的花粉比其保持系花粉中的肌动蛋白含量低得多. 在植物发育过程中肌动蛋白基因的表达有明显的器官特异性,在花粉中的表达量比根、茎、叶中高得多. 构建了肌动蛋白反义基因的表达质粒,转移到小麦和番茄原生质体中,以抑制花粉中肌动蛋白基因的表达,从而获得雄性不育植株. 转基因植株花粉中的肌动蛋白明显减少,而雌芯却不受影响. 此项研究为培育作物雄性不育系开辟了新途径.     

小麦叶绿体中细胞分裂素的结合蛋白

在激素作用机理的研究中,激素受体的鉴别和定位是一个重要的研究内容,自从1970年发现高等植物的核糖体存在着细胞分裂素(CTK)的结合蛋白之后,陆续在一些植物的不同细胞组份中发现了这种结合蛋白。但是,CTK是否能与植物细胞的某一细胞器结合还未见报道,黄卓辉与魏家绵曾报道过6-苄氨基嘌呤(6BA)能使离体叶绿体的光合磷酸化活性增强。这使我们对CTK是否能与叶绿体结合,从而调节光合作用或代谢过程产生兴     

豌豆肌动蛋白异型体(PEAc1)与绿色荧光蛋白融合基因的原核表达与特性分析

肌动蛋白普遍存在于真核生物细胞中, 并在细胞生命活动中发挥重要作用. 在细胞中, 肌动蛋白多以异型体(isoform)形式存在. 植物肌动蛋白异型体的大量获得和理化特性分析一直是一个难题. 对豌豆肌动蛋白异型体PEAc1与组氨酸标签(His-tag)、绿色荧光蛋白(GFP)进行了基因融合和原核表达. 通过脲变性、梯度脲透析复性、镍柱亲和层析的方法从包涵体中纯化出大量、高纯度的PEAc1-GFP融合蛋白(> 2 mg/L培养物). 理化特性分析表明, 它同鸡骨骼肌肌动蛋白一样, 单体PEAc1-GFP能与DNaseⅠ结合并显著抑制后者酶活性; 单体PEAc1-GFP能聚合成带有绿色荧光的丝状结构; 聚合的PEAc1- GFP能被微丝的特异标记物鬼笔环肽(phalloidin)标记; PEAc1-GFP与鸡骨骼肌肌动蛋白的聚合曲线趋势基本一致, 聚合临界浓度为0.24 μmol/L; 聚合的PEAc1-GFP能激活肌球蛋白Mg-ATPase活性, 其激活比率随浓度的增加而增加, 在1 mg/mL浓度下, 能激活4倍以上. 上述结果表明, 带有组氨酸标签和GFP标记的PEAc1表现出和天然肌动蛋白相似的理化特性; 基因融合、原核表达、变性、复性及亲和纯化是获得大量高纯度植物肌动蛋白异型体的有效方法.     

植物肌动蛋白荧光类似物体外与体内的聚合

利用碘乙酰胺俄勒冈绿对植物花粉肌动蛋白进行荧光标记,从１０ｍｇ肌动蛋白可得到３ｍｇ肌动蛋白荧光类似物,标记率为７２％,纯度为９９％．体外实验结果表明,肌动蛋白荧光类似物在Ｍｇ~２＋和Ｋ~＋存在条件下可聚合成丝状肌动蛋白;将肌动蛋白荧光类似物通过细胞显微注射方法引入活体植物细胞内,可观察到有绿色荧光微丝分布在细胞质中,说明所得脱动蛋白荧光类似物具有与细胞内源肌动蛋白相似的功能．     

从花粉肌动蛋白到作物雄性不育

肌动蛋白在动植物细胞的生命活动中担负着重要任务。花粉细胞中含有丰富的肌动蛋白,其结构及性质与动物肌动蛋白极其相似,植物肌动蛋白基因的碱基序列及氨基酸序列与动物的序列亦极为相似。植物细胞质雄性不育系植株的花粉比其保持系花粉中的股动蛋白含量低得多。     

亲和层析法纯化小麦幼嫩胚乳肌动蛋白及其特性的初步研究

正在发育的小麦幼嫩籽粒中,珠心和胚乳组织内均呈现有活跃的原生质细胞间运动现象。我们发现胞间运动可被细胞松弛素B(Cytochalasin B)可逆性抑制,显示出肌动蛋白参与此类运动的可能性。因此确定肌动蛋白在这些呈现原生质胞间运动组织内的存在与探讨其     

叶片光合细胞在人工培养下的生长和分裂

高等植物叶片的绿色细胞,具有植物界特有的叶绿体,是利用太阳能进行光合作用的重要功能细胞。我们在小麦、水稻、玉米等作物叶片细胞研究中,了解到这种细胞在结构上的多样性与复杂性,是研究叶绿体的结构与功能的重要材料,而绿色光合细胞和叶绿体的离体培养则是研究叶绿体结构与功     

细胞核内肌动蛋白及其功能研究进展

肌动蛋白是细胞内含量丰富的蛋白质. 近年来, 肌动蛋白已被证实普遍存在于各类细胞的细胞核中. 肌动蛋白、肌动蛋白结合蛋白和肌动蛋白相关蛋白等蛋白共同参与了细胞核内肌动蛋白形式和功能的调节, 包括肌动蛋白单体与聚合形式的转换、染色质结构调整、基因转录调控、mRNA加工和运输等许多重要生理功能. 综述了细胞核内肌动蛋白及其功能的研究进展.     

细胞松弛素B对分离绿豆线粒体膨胀、收缩及氧化磷酸化的影响

细胞松弛素B(Cytochalasin B,以下简称CB)是一种F-肌动蛋白的解聚剂。因此许多与肌动蛋白相关的植物细胞运动,诸如细胞质流动,花粉管萌发与伸长、根毛生长以及叶绿体运动都受到CB的抑制。 Timsthy报道,用CB处理线粒体,确实阻断了它们的移迁,因此提出微丝在线粒体运动中起一种重要作用。 实际上,许多细胞行为是需能的,而且有收缩现象。Spudich等检测了CB对分离鼠肝线     

枸杞细胞系的建立及单细胞培养再生植株

建立稳定的细胞系,分离培养单细胞,并能够再生植株,是很有用的实验体系。它可以用来筛选细胞突变体,同时也是进行遗传操作的前提。细胞系还是分离原生质体的好材料,在细胞杂交、摄取细胞器及转导、转化、基因转移等项研究中都是不可缺少的。含有有用的生物药、生物碱的细胞系,可以直接用来做细胞级工业化生产。自七十年代初Carlson等人把分子生物学的实验技术应用到高等植物,用微生物学的方法分析和改良高等植物以来,这个领域     

百合花粉萌发过程中的肌动蛋白和肌球蛋白的研究

对百合花粉萌发过程中的肌动蛋白和肌球蛋白进行了研究。结果表明;百合花粉中肌动蛋白的分子量为４３ｋｕ,能与抗兔肌α－肌动蛋白的抗体发生免疫交叉反应;成熟花粉及花分萌发过程中均未检测到编码肌动蛋白的ｍＲＮＡ;萌发芬粉中存在一分子量为４６０ｋｕ的肌球蛋白,具Ｃａ＾２＋－ＡＴＰａｓｅ活性,能与抗兔肌肌球蛋白的抗体发生免疫交叉反应;     

玉米线粒体中的肌动蛋白

细胞中的线粒体经常进行可逆的膨胀与收缩,Lehninger曾指出线粒体收缩与肌肉收缩有相似之处.Ohnishi曾在鼠肝线粒体中分离到一种类似骨骼肌中的肌动蛋白的蛋白质,但迄今为止,尚未确切证明线粒体中收缩蛋白的存在。     

稀脉浮萍中环腺苷-磷酸(cAMP)含量变化与开花及衰老的关系

自从cAMP最初在动物中被分离、鉴定和确定其生理作用以来,对生物体内环核苷酸的研究日益引起人们的重视;并从分子水平上阐明了cAMP作为动物激素的第二信使在细胞内引起一系列生理变化的作用机理。高等植物中环核苷酸的含量比动物组织低得多。过去由于受到测定方法的限制,曾在较长时期对其在植物中是否存在有所争论;且多用外加     

转化现象,高等植物果真无缘吗?

众所周知,高等植物的转化研究,从海斯的矮牵牛试验以来,一直存在着激烈的争论。甚至受到非议。这主要是因为异源DNA的输入、复制、翻译和表达的机理及在提取DNA时可能有的细菌污染等重大技术问题,目前还拿不出严密的实验证据给予澄清,以致人们不仅对实验本身表示怀疑,而且对在高等植物中究竟存在不存在转化过程也持否定态度。在这里,我们结合生物工程的应用前景,发表一些看法,求教于诸位专家。     

外源基因在绿豆、赤豆叶肉原生质体中的表达

目前,高等植物遗传工程的飞速发展已经使将外源基因直接引入植物细胞或原生质体中成为可能。豆科植物因为其特有的固氮功能,一直是国内外植物生理学家热衷研究的对象。近些年来,许多科研工作者都在致力于建立一些有效的转化系统(如用PEG法、电击、     

高等植物开花时间决定的基因调控研究

开花是植物从营养生长向生殖生长的转变过程,在这一过程中植物顶端分生组织从钠部的代谢途径到外部表型都会发生一系列程序化的变化的变化。与开花相关基因的表达是实现这一转变的基础,环境因子（春化作用和光周期）以及细胞自身的生长状况对这些基因的表达起着调控作用。近年来在高等植物成花决定过程的基础调控研究方面取得了很成就,简要综述该领域国内外的最新进展。     

粘菌肌动蛋白的体外聚合及HMM标记

肌动蛋白是所有真核生物细胞骨架蛋白的重要成分之一,它在细胞中通过聚合,组装成微丝骨架,对于维持细胞的形状、细胞的运动如胞质流动,细胞器运动,甚至细胞的分裂等重要生命活动起着重要作用.多头绒泡菌(physaRum polycephalum,简称粘菌)是一种低等真核生物,它具有许多典型的细胞运动特征如胞质的穿梭运动,原生质团的迁移、吞食运动,原生质团的分裂等.其中胞