PCR扩增ZFY及ZFX基因对奶牛的性别鉴定

根据人及鼠 ZFY 及 ZFX 基因设计一对引物(ZF_1;ZF_2),利用 PCR 方法对牛的ZFY 及 ZFX 基因进行扩增.将扩增片段用 RStI 酶切,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后判定牛的性别.公牛 ZFY 基因的 PCR 扩增片段有一个 RStI 酶切位点,ZFX 基因没有 PSTI 酶切位点.所以公牛的 PCR 片段经酶切后出现三个片段(468bp;356bp;112bp).而母牛的 PCR 扩增片段酶切后仍只有一个片段(468bp).据此就可区别雌雄性别.     

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物,反应缓冲液中Ｍｇ＾２＋浓度,循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响。并对１８个胚胎进行了性别鉴定,移植３８枚性别鉴定后的胚胎,成功产下２头与预测性别一致的牛犊,胚胎性别可鉴率为９４．１％,预测性别符合率为１００％。     

PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨

采用ＲＴ－ＰＣＲ法,以一组人抗体重链和轻链简并引物,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Ｆｄ和κ轻链基因．结果提示：用Ｔｒｉｚｏｌ试剂提取细胞总ＲＮＡ,以Ｏｌｉｇ（ｄＴ）引导合成ｃＤＮＡ第一链,再经ＰＣＲ扩增的方法,是值得优先采用的方法．细胞总ＲＮＡ的提取不必追求高纯度,少量外周血即足以满足构建抗体库所需,简并引物可获得良好的扩增效果,为构建噬菌体抗体库奠定了基础     

PCR 技术用于 DNA 多态性分析 apoB—3′HVR 和 D17S30位点的体外扩增

本文用PCR技术扩增了北京地区73名无关个体的apoB—3'HVR和其中50名的D17S30位点.经琼脂糖凝胶电泳检测,在人群中表现出一定程度的多态性;同一样品分别扩增apoB—3'HVR和D17S30,其扩增带有明显的差别;而同一样品分次扩增后,其扩增带完全一致,表明扩增产物的可重复性.与DNA 指纹技术相比,这种方法虽然鉴别能力较低,但操作简便,灵敏度高,适于微量生物样品检验.我们将该技术应用于两例亲子鉴定案,其中一例排除了嫌疑父亲,另一例则不能排除.     

应用PCR技术对家禽病毒性肿瘤病进行鉴别诊断的研究进展

概述聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术应用于家禽马立克氏病、禽白血病和网状内皮增生症鉴别诊断的研究进展,主要内容包括病毒的基因组结构特征,各病毒的特异性基因或序列及其ＰＣＲ引物的位置和序列,以及ＰＣＲ技术对肿瘤病特异鉴别诊断的应用。将ＰＣＲ技术与其它传统的技术进行比较,ＰＣＲ技术具有敏感性高、特异性好、快速、简便的特点,是目前鉴别诊断家禽病毒性肿瘤病最有效的、最快捷的方法之一。     

在食品检验中应用聚合酶链反应技术(PCR)

聚合酶链反应(PCR)技术,现已在医学工程、疾病诊断、遗传工程、考古学及法医学等领域得到广泛应用,由于该技术具有灵敏、特异、产量高、速操作简便和容易自动化等突出优点,因此,也被应用于食品检验.本文就PCR技术的原理及在食品卫生检验中的应用作一综述.     

扩增性别基因片段的鹭类性别鉴定方法的研究

以鹳形目5种鹭科鸟类和1种鹮科鸟类的组织为实验材料,采用PCR方法扩增其性别基因相关片段,探讨鹭科鸟类性别的分子鉴定方法.通过测定3对已知性别的白鹭(Egretta garzetta)、岩鹭(Egretta sacra)和黄嘴白鹭(Egretta eulophotes)以及12只未知性别的夜鹭(Nycticorax nycticorax)、池鹭(Ardeola bacchus)、白鹭、牛背鹭(Bubulcus ibis) 黑脸琵鹭(Platalea minor)的性别基因CHD或EE0.6上的基因相关片段并进行比较.结果表明,通过扩增EE0.6或CHD基因片段的性别鉴定分子方法都能够适用于鹭科鸟类的性别鉴定,由此能够解决鹭科鸟类雌雄外形同色而难以从外貌上区分其性别的问题.     

荧光引物扩增AMG基因鉴定古代人骨遗骸的性别

建立一种用荧光标记引物扩增AMG基因的性染色体同源片段方法, 对古代人骨遗骸进行性别鉴定. 用其测定5个古代遗骸的性别, 其结果与形态学结果一致.     

利用SRY基因鉴定绵羊成纤维细胞性别的研究

SRY是哺乳动物性别决定的重要基因，利用绵羊SRY基因序列设计PCR引物，对绵羊胚胎来源的成纤维细胞提取总DNA进行PCR扩增，鉴定6个不同胚胎来源的成纤维细胞的性别．结果表明，3个有扩增带为雄性，3个无扩增带为雌性，为核移植选取雄性或雌性转基因成纤维细胞提供一项可行的方法．同时提取牛、山羊、小鼠的总DNA，利用绵羊SRY基因引物进行扩增，对SRY基因在哺乳动物中的保守性进行研究．结果表明，绵羊SRY基因保守区外的一对引物对雄性山羊、绵羊、牛及小鼠均能扩增出特异的DNA片段，说明SRY基因序列有很强的保守性．     

痰和咽拭子PCR及血清学联合检测肺炎衣原体急性呼吸道感染

了解成人呼吸道感染患者急性肺炎衣原体感染的发病情况。呼吸道感染患者１１０例,同时采集痰和咽拭子标本,应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测肺炎衣原体ＤＮＡ及采静脉血检测肺炎衣原体抗体。本组患者１７例（１６％）有肺炎衣原体近期感染的急性抗体,１２例（１１％）痰和（或）咽拭子肺炎衣原体ＰＣＲ检测阳性,联合应用两种方法的阳性率为２３％（２５／１１０例）。肺炎衣原体急性感染以哮喘急性发作、肺炎、ＣＯＰＤ急性加重和急性支气管炎患者多见（分别为５７％、３５％、２６％和２５％）,其临床表现无特征性。本组成人呼吸道感染患者肺炎衣原体急性感染的发病率较高,提示肺炎衣原体是呼吸道感染的重要致病原。     

聚合酶链反应法扩增免疫球蛋白变区基因

用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的变区基因.     

聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究

目的　探讨聚合酶链反应技术 (PCR)在检测石蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法　利用PCR技术 ,对 55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA DNA进行了检测。结果　 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA DNA ,这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌 (S .aureus)感染相一致。结论　PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA DNA片段 ,为鼠S .aureus感染的回顾性分析提供了有效手段     

亲核取代竞争反应的高效液相色谱测定法

用高效液相色谱法测定Cl~-和B_1~-在亲核取代竞争反应中所生成的相应卤代物混合物各组分摩尔含量,以确证其亲核性强弱.本法操作简便,快速,重现性好,准确度高.     

亲核试剂亲核取代竞争的薄层色谱扫描测定法

用薄层色谱扫描法测定Cl~-和Br~-在亲核取代竞争反应中所生成的相应卤代物混合物各组分摩尔含量,以确定其亲核性强弱.此法操作简便,快速,重现性好,准确度高,可一次同时测定多个样品.     

用反相液相色谱法测定氯代叔丁烷水解反应速度常数及活化能

用反相液相色谱(RPLC)法测定氯代叔丁烷水解反应混合物中的生成物和反应物各组分含量,可计算反应速度常数和活化能.本法操作简便、快速,重现性好.