NGF诱导PC12细胞神经元样细胞分化

目的:建立PC12细胞的神经元样细胞分化模型,并探讨ERK蛋白在PC12细胞神经元样细胞分化中的可能机制.方法:以10、20、50 g/L的NGF(NGF溶于PBS,培养基中PBS的终浓度不超过2%)培养PC12细胞,应用倒置相差显微镜、显微镜测微尺及流式细胞仪鉴定PC12细胞的分化,以确定NGF使用剂量.运用免疫印迹检测不同浓度、不同作用时间时ERK蛋白在PC12细胞中的表达,并进行统计学分析.结果:随NGF剂量的升高,PC12细胞的体积、最长突起长度和突起数目均会增大或增多。统计学分析证明50 g/L的NFG作用48 h足以诱导PC12细胞的交感神经样改变。尽管ERK总蛋白水平在NFG作用前后无明显改变,但在NFG作用5 min后磷酸化的ERK蛋白水平即显著升高,达到峰值,并持续约1 h.50 g/L的NFG作用于PC12细胞48 h可使细胞发生明显的G1期阻滞.结论:PC12细胞可在NGF作用下出现交感神经样改变,并且细胞的分化程度依赖于NGF的使用剂量和作用时间.在NGF诱导的PC12细胞神经元样分化中ERK蛋白的磷酸化对NGF呈现剂量和时间依赖性,提示ERK蛋白在分化的早期发挥重要作用.     

酒精对PC12细胞凋亡的诱导作用

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及其与线粒体凋亡途径的关系.结果显示,采用50、100、200、400和800mmol/L浓度的酒精处理去血清培养的PC12细胞24h后,细胞存活率分别是单纯去血清培养细胞存活率的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%,呈浓度依赖性,与对照组比较差异显著(P0.05).Hoechst 33342/PI染色法观察到典型凋亡现象,如核型固缩、染色质凝集等.DNA琼脂糖凝胶电泳可见100~400mmol/L浓度酒精处理组呈现凋亡细胞典型梯状DNA.酒精能使PC12细胞线粒体膜电位下降并呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞凋亡过程中,凋亡关键蛋白Caspase-3、Caspase-9表达量升高.上述结果表明,酒精能够诱导PC12细胞凋亡,诱导作用随浓度升高而增强且酒精诱导PC12细胞凋亡与线粒体凋亡途径有关.     

谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的研究

采用MTT方法观察一定浓度的谷氨酸对PC12细胞活性的影响，结合凝胶电泳和荧光显微镜观察细胞有无DNA断裂和凋亡形态学改变。结果发现谷氨酸确有兴奋毒作用，细胞死亡机制主要为凋亡。     

Rho激酶抑制剂诱导PC12和PC12Adh细胞突起生长的差异比较

 PC12细胞是研究神经分化最常用的细胞之一.在rho激酶(ROCK)抑制剂的作用下,PC12细胞能够长出神经样突起.最近,美国菌种保存中心(ATCC)同时提供PC12细胞和PC12 Adh细胞.研究的主要目的是观察ROCK抑制剂诱导这2种细胞长突起是否存在差异.PC12细胞和PC12Adh细胞按照ATCC方法进行培养,用神经生长因子(NGF,1000ng/mL)或ROCK抑制剂(33μmol/L Y27632,33μmol/L法舒地尔)处理细胞1~4d.结果发现NGF能够诱导这2种细胞生长突起,而ROCK抑制剂只诱导PC12Adh细胞长突起,对PC12细胞不明显.因此,ROCK抑制剂诱导这2种细胞突起生长存在明显差异,PC12Adh细胞更适合用于ROCK抑制剂的神经诱导分化实验.     

酒精对PC12细胞凋亡及中性神经鞘磷脂酶表达及活性的影响

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及凋亡过程中中性神经鞘磷脂酶(neutral sphingomyelinase,N-S Mase)活性及mRNA表达量的改变.结果显示,当酒精浓度达50 mmol/L以上时,作用24 h后,去血清培养的PC12细胞表现出较强的细胞增殖抑制作用(P0.05)并呈浓度依赖性.Hoechst 33258荧光染色结果显示处理组凋亡细胞增多,表现染色质凝集、细胞核变小、核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化.琼脂糖凝胶电泳显示酒精处理组有不同程度的DNA断裂,呈凋亡细胞典型的梯状DNA.RT-PCR结果显示,不同浓度酒精作用PC12细胞2 h后N-S Mase表达升高.荧光分光光度法检测N-SMase的活性,显示酒精作用PC12细胞2h后酶活性升高,与去血清对照组相比差异显著(P0.05).上述结果表明,酒精可导致PC12细胞凋亡并伴有N-SMase mRNA表达量增高,酶活性增强,说明酒精诱导PC12细胞凋亡与鞘磷脂循环有关.     

白介素12诱导T细胞凋亡的作用

目的：探讨白介素12（IL-12）对T细胞凋亡的作用。方法：用dUTP缺口末端标记（TUNEL）和Annexin V的方法测定IL-12诱导后T细胞凋亡率。结果：IL-12诱导人的白血病T细胞株TIB-152和人的淋巴瘤T细胞株HTB-176的凋亡。以50ng/mL的质量浓度作用效果最佳,作用时间在3和6d内达到最高峰。结论：IL-12能诱导T细胞的凋亡,其诱导作用从细胞早期质膜的改变开始,并与IL-12的浓度和T细胞成熟状态及作用时间有关。     

琐琐葡萄多糖对PC12细胞损伤的神经保护作用

 体外培养PC12细胞,采用20μmol/L β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)作用24h诱导细胞损伤,建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型,研究琐琐葡萄多糖(VTP)对PC12细胞损伤的神经保护作用。设立对照组、模型组和VTP保护组(20,40,80μg/mL),CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,化学比色法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果显示,20,40,80μg/mL VTP可提高PC12细胞存活率,减少LDH渗漏,增加SOD活力,减少MDA含量,降低细胞凋亡率,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。由此推论,VTP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡和氧化损伤具有明显的保护作用。     

姜黄素对ActD/TNF-α协同诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察放线菌素D (ActD)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠肾上腺嗜铬细胞(PC12细胞)的协同损伤作用,探讨中药单体姜黄素对这种损伤的保护作用及机制.方法:采用MTr法确定实验药物的最佳浓度;LDH法检测PC12细胞的损伤;倒置显微镜观察细胞形态变化;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性.结果:ActD/TNF-t可致PC12细胞的生存力下降(P＜0.05);细胞培养液中LDH的活性升高(P＜0.05);PC12数量减少,体积缩小,突起变短;可致PC12细胞内caspase-3的活化增强(P＜0.05).浓度为5μmol/L姜黄素可阻止ActD/TNF-α所致的细胞的生存力下降(P＜0.05);抑制ActD/TNF-α引起的细胞培养液中LDH的活性升高(P＜0.05);拮抗ActD/TNF-α引起的细胞数量减少,体积变小,突起减少变短;抑制ActD/TNF-α引起的PC12细胞内caspase-3的活化(P＜0.05).结论:姜黄素可以拮抗ActD/TNF-α协同作用引起的PC12细胞损伤,其机制可能与抑制caspase-3的活化有关.     

调节细胞自噬对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的影响

以鱼藤酮处理的PC12细胞为帕金森病体外模型,分别使用雷帕霉素作为自噬途径的促进剂,巴佛洛霉素A1和3-甲基腺嘌呤作为抑制剂,检测调节细胞自噬对细胞凋亡的影响,发现巴佛洛霉素A1极大提高了细胞凋亡率,3-甲基腺嘌呤则可以减轻鱼藤酮诱导的细胞凋亡,而雷帕霉素虽然促进受损细胞凋亡,但降低了受损细胞早期的死亡率.构建pEGFP-LC3 稳定转染的PC12细胞,流式细胞检测结果显示,抑制或促进细胞自噬,细胞内自噬相关蛋白LC3均有明显增加.     

ASPP家族对p53诱导细胞凋亡发挥调节作用的研究进展

ASPP(apoptosis stimulating protein of p53)即p53凋亡刺激蛋白家族,是科学家们近年来发现的新的蛋白家族.该家族包含有三个成员:ASPP1,ASPP2和iASPP.它们均可以与p53相结合,从而正向或负向地调节p53诱导细胞凋亡的作用,成为肿瘤治疗的新靶点.     

Conversion of p35 to p25 deregulates Cdk5 activity and promotes neurodegeneration

Cyclin-dependent kinase 5 (Cdk5) is required for proper development of the mammalian central nervous system. To be activated, Cdk5 has to associate with its regulatory subunit, p35. We have found that p25, a truncated form of p35, accumulates in neurons in the brains of patients with Alzheimer's disease. This accumulation correlates with an increase in Cdk5 kinase activity. Unlike p35, p25 is not readily degraded, and binding of p25 to Cdk5 constitutively activates Cdk5, changes its cellular location and alters its substrate specificity. In vivo the p25/Cdk5 complex hyperphosphorylates tau, which reduces tau's ability to associate with microtubules. Moreover, expression of the p25/Cdk5 complex in cultured primary neurons induces cytoskeletal disruption, morphological degeneration and apoptosis. These findings indicate that cleavage of p35, followed by accumulation of p25, may be involved in the pathogenesis of cytoskeletal abnormalities and neuronal death in neurodegenerative diseases.     

Differentiation of PC12 phaeochromocytoma cells induced by v-src oncogene

PC12 rat phaeochromocytoma cells are a model system that can be used to study both neuronal differentiation and the mechanism of action of nerve growth factor (NGF). PC12 cells respond to NGF protein by shifting from a chromaffin-cell-like phenotype to a neurite-bearing sympathetic neurone-like phenotype. Here we present data on the effect of infection of PC12 cells with retroviruses carrying the src oncogene of Rous sarcoma virus. Previous studies have demonstrated that the expression of src severely affects the synthesis and accumulation of differentiated cell products in a variety of cell types. We show that in the PC12 cell system, expression of v-src appears to have an inductive effect on differentiation that resembles the action of a 'physiological' growth factor.     

Inhibition of growth factor-induced differentiation of PC12 cells by microinjection of antibody to ras p21

The protein products (p21) of the ras cellular proto-oncogenes are thought to transduce membrane signals necessary for the induction of cell division. However, there is uncertainty as to the precise role of ras p21 in mediating ligand-membrane receptor signals leading to cell differentiation. Treatment of rat phaeochromocytoma cells (PC12) with nerve growth factor (NGF) results in the induction of a number of phenotypic characteristics of sympathetic neurones, including cessation of cell division and outgrowth of neuronal processes (neurites). Here we report that microinjection of antibody to ras p21 into PC12 cells inhibited neurite formation and resulted in temporary regression of partially extended neurites, an effect which was observed up to 36 h after initiation of NGF treatment. Neurite formation induced by cyclic AMP was unaffected by injection of anti-p21 antibody. These results indicate that p21 is involved in the initiation phase of NGF-induced neurite formation in PC12 cells and has a role in hormone-mediated cellular responses distinct from cell proliferation.     

p5cs转化水稻细胞系的研究

用基因枪法将豆科植物mothbean（Vigna aconitifolia L．）中的△1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（△1-pyrroline-5-carboxylate synthctase，PSCS）基因转化水稻。经PCR扩增和Southernblot分析，证实p5cs基因已整合到水稻细胞基因组中。用250mM NaCl胁迫处理后，发现转基因细胞的脯氨酸含量提高。同时转基因细胞的耐盐性比野生型增强。     

异鼠李素诱导人肺癌细胞株YTLM-90凋亡及机理研究

本研究利用MTT法、免疫组化法、FCM、免疫印迹等方法探讨了异鼠李素对人肺癌细胞株YTLMC-90的诱导凋亡作用及其机理.发现异鼠李素作用后,细胞活力降低;PCNA蛋白表达量减少;处理组的YTLMC-90细胞被阻止在G2/M 期, 细胞凋亡率升高; Bcl-2, Mcl-1基因表达下调,p53、Bax及Caspase-3基因表达上调.推论异鼠李素可能通过影响相关癌基因表达,从而诱导YTLMC-90细胞凋亡.     

流式细胞仪法检测4HPR诱导Hela细胞凋亡的百分率

目的：实验结果表明4HPR抑制Hela细胞生长的机理之一是诱导该细胞凋亡。本文用流式细胞仪检测不同浓度的4HPR作用不同时间Hela细胞凋亡的百分比及细胞周期变化。方法：体外细胞培养及流式细胞仪检测法。结果：2μg／m的4HPR作用24、48、72h后,Hela细胞的凋亡百分比分别为4.1％、6．6％、26％;4μg／ml的4HPR分别为5．1％、8．3％、28％、8μg／ml的4HPR分别为5．9％、6．2％、34％。细胞周期分布图中,G1细胞明显减少。结论：上述结果提示Hela细胞凋亡的百分比与4HPR的作用时间、作用浓度呈正相关。     

NGF诱导PC12细胞转化为神经样细胞微管相关蛋白2(MAP2)的表达

目的探讨神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化为神经元样细胞时MAP2的表达变化情况.方法细胞培养6 d后应用共聚焦显微镜观察MAP2表达情况;Western Blot法检测诱导不同时间点MAP2的表达情况.结果免疫组化结果显示:MAP2表达呈阳性;免疫印迹结果显示:MAP2蛋白表达在不同时间点呈动态变化,即随诱导时间延长呈递增趋势.结论 NGF成功诱导PC12细胞分化为神经样细胞,为缺血性脑卒中的体外细胞研究提供细胞参考.