苏云金芽孢杆菌发酵技术研究进展

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis简称Bt）是目前产销量最大的生物农药，其发酵过程是工业生产的关键步骤，本文对培养基成份，pH值、氧气、温度、发酵时间等发酵条件进行了综述，参考文献28篇。     

双菌株发酵生产苏云金杆菌生物杀虫剂的研究

本文研究了苏云金杆菌双菌发酵生产生物杀虫剂的菌种和配方。大田实验表明，双菌株生物杀 虫剂对棉铃虫的杀虫率高达９２％。     

苏云金杆菌NU-1之6种培养基发酵的对比

目的提高苏云金杆菌NU-1制剂的毒力。方法通过苏云金杆菌NU-1在6种培养基中发酵,研究其菌体生长、pH值变化、芽孢形成、伴孢晶体率、发酵周期等。并对其晶体蛋白进行了提纯和测定。结果5号培养基产量最高,30℃发酵40h时菌数可达80.4×108个/mL,伴孢晶体率大于90%,晶体蛋白浓度达6.312mg/mL。结论用5号培养基作的制剂毒力最强。     

味精废水培养苏云金杆菌的培养基最优化研究

对以味精废水作为主要原料摇瓶苏云金杆菌的培养基的最优化进行了研究。应用均匀设计的实验方法优化出摇瓶培养苏云杆菌的最佳培养基为：废液加１％ＣａＣＯ３静置３ｈ，取上清液，其中静余葡萄糖０．７ｇ／１００ｍＬ，残余淀粉０．０５ｇ／１００ｍＬ，另需补加玉米浆１．２ｍＬ／１００ｍＬ，淀粉２．５ｇ／１００ｍＬ。     

苏云金杆菌中国品系Bt ken—Ag 10t罐发酵研究

苏云金杆菌Btken-Ag在10t发酵罐中,以豆饼粉和玉米淀粉为底物发酵30h,发酵液毒力效价平均达2096IU／μL。粉剂产品回收率为84．5％,其性能指标分别达到：毒力效价为17000IU／mg,活孢子数在3×1010个／g以上,细度为95％通过300目标准筛,悬浮率在85％以上,含水量在5％以内,润湿性在15s以下。     

苏云金芽孢杆菌HD—1发酵工艺研究

在直径100 mm,体积4.7 L的环隙气升式内环流反应器内,考察了不同通气量及培养基含固量对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)HD-1发酵水平的影响.实验表明,在该反应器中,Bt-HD-1发酵的最佳通气量为1.75 L/min,最佳培养基含固量为3.5%.此外,通过研究通气量和培养基含固量对终止DO及终止pH的影响发现,在环隙气升式内环流反应器中,Bt-HD-1发酵的正常指标为,终止pH＞7.0,终止DO＞60%.     

苏云金杆菌固体发酵工艺研究

苏云金杆菌(Bacillus Thuringiensis简称B.t)是农业生产中最广泛应用的微生物杀虫农药.为了在降低生产成本、减少废水排放的同时,提高生产菌发酵水平和毒力效价,对本实验室选育的菌株B.t NH-1的固体发酵工艺条件的优化进行了进一步研究,确定了适合于B.tNH-1生长、产生芽孢的最佳条件.研究结果固体发酵水平基本稳定在2.37×1010个/g,粉剂烘干后,测其毒力效价,可以稳定在17000 IU/mg以上,,超过国内文献报道固体发酵的最高水平.     

二次回归旋转组合设计在苏云金杆菌发酵培养基优选中的应用

采用二次回归旋转组合设计方法,对苏云金杆菌WB7菌株的培养基配方进行了摇瓶优化筛选。建立了产孢量与五种原料的数学模型,分析了各试验因子的单因素效应和互作效应。试验所得的最佳培养基组合为:玉米淀粉3.3%,黄豆饼粉4%,酵母粉0.725%,蛋白胨0.4%,鱼粉1.05%。     

苏云金杆菌噬菌体的形态及感染特性

从苏云金杆菌厂发酵裂解液中分离得到一株苏云金杆菌噬菌体ＫＰ－１．电镜观察表明，该噬菌体结构较为复杂，头部呈多面体，衣壳里六角形，在见并具有收缩性尾鞘，尾部末端呈扁平膨大基片．其寄生范围与其它“ＢＴ”噬菌体不同，具有非常广泛的寄主，专一性不明显，同时对噬菌体ＫＰ－１感染敏感菌株１８７的特性作了具体分析．     

苏云金芽孢杆菌LLB19发酵培养基的优化

通过单因子实验对苏云金芽孢杆菌LLB19菌株发酵培养基碳氮源配方进行优化,确定以玉米淀粉、玉米粉为发酵培养基的碳源;以黄豆饼粉、酵母粉作为发酵培养基的氮源.采用Plackett-Burman设计,SAS软件分析该菌株的发酵培养基配方,确定了玉米淀粉、黄豆饼粉、酵母粉为影响LLB19菌株芽孢含量的3种重要因子.运用爬坡路径法对这3种因子进行实验,获得这3种重要因子的最适质量浓度范围.通过响应面分析法,得出3种重要影响因子的交互作用及最佳条件.确定LLB19菌株产芽孢最佳发酵培养基为:玉米淀粉20.0 g/L,黄豆饼粉26.7 g/L,酵母粉5.5 g/L,K2HPO4 0.3 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L,CaCO3 0.4 g/L,ZnSO4 0.2 g/L.最佳发酵培养基芽孢数为4.250×107/mL,与初始培养基芽孢数3.410×107/mL相比提高了24.6%.     

用PCR法检测苏云金杆菌的溶原性噬菌体

根据苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)溶原性噬菌体G IL01(GenBank Accession Number:AJ536703)的同源序列设计一对引物,用35株B.t标准菌株和生产菌株MZ1(血清型H3 a3b)的过夜培养物作模板,结果有16株菌株包括MZ1能扩增出大小约为750 bp的预期产物,推测这16株菌为溶原菌。MZ1菌株的过夜培养液与指示菌ZK1(血清型H25)混匀并在双层琼脂上培养12 h后出现了滴度为2×107pfu的噬菌斑,从而证明生产菌株MZ1确为溶原菌;又以G IL01同源性较高的其它四个基因设计引物,分别以MZ1的培养物及其溶原性噬菌体基因组为模板进行PCR扩增,结果两者得到几乎一致的带型,进一步证明了生产菌株MZ1为溶原菌,说明利用PCR法检测鉴定苏云金杆菌的溶原性是可行的。比较指示菌方法、直接电镜法和DNA鉴定法,PCR法快速简便,对B.t生产上快速检测其溶原性噬菌体有实用意义。     

苏芸金杆菌代谢特性研究

采用12L玻璃发酵罐,测定了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis, B. t)发酵过程中的菌体浓度、总糖、还原糖、氨基氮、溶磷、溶氧、铵离子、核酸、ATP、pH、蛋白酶及粘度等参数。获得了B.t生长过程的代谢曲线,从中分析了各参数变化间的相互关系。这对于控制B.t发酵过程及提高发酵水平具有一定指导意义。     

苏云金芽孢杆菌在固态和液态基质中的生长差别研究

在同等条件下,采用同一培养基的固态和液态两种环境,对苏云金芽孢杆菌中国标准品(BtCS3ab-1991)的发酵质量进行了比较研究.结果表明:固态发酵培养的Bt芽孢平均长度0.028mm,液态发酵平均为0.017mm,含菌量在28h分别为0.88×1010个/l和0.54×1010个/l.发酵过程中菌体浓度在生长曲线上表现为固态发酵高于液态,缩短发酵时间2h,且接种量对固态发酵的影响也较小.而在虫害研究方面,取食含固态药液菜叶的小菜蛾羽化率较液体降低10%,死亡率差异显著.     

Bt培养基配比及伴孢晶体纯化条件的优化

苏云金芽孢杆菌[Bt(HD-1)]发酵中培养基的配方影响发酵水平,还决定发酵产物杀虫毒力的效果.本实验在基础参数试验基础上,采用均匀设计法对Bt发酵中培养基组分、杀虫晶体蛋白纯化条件进行优化,并直接采用发酵中伴孢晶体量作为最终评价指标.结果表明:Bt培养基成分对发酵的主要影响因素依次为:MgSO4、蛋白胨、可溶性淀粉,最佳用量为(g/L):1.3、2.6、4.5;晶体蛋白双液相纯化的主要影响因素依次为:K2HPO4/KH2PO4质量比、PEG浓度、沉淀量、离心速度,最佳条件为:3:1、110 g/L、1 g、1 440 r/min,其中离心速度若选500 r/min,可能对晶体纯度提高更有利,但低速对回收率有负影响.     

对烟草粉螟高毒力Bt菌的伴孢晶体研究

采用液体双向分离法提纯对烟草粉螟高毒力苏云金杆菌B t33,B t53,B tHB伴孢晶体,其纯度分别达99.93%,99.9%,99.8%.扫描电镜和透射电镜观察发现,不同菌株的晶体形状和数量组成各不相同.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAFE)发现3个菌株的电泳图谱不同,烟草粉螟二龄幼虫室内生物毒力测定,9天后B t33,B t53菌株100,300倍防治效果超过80%,B tHB菌株100,300,600倍对烟草粉螟二龄幼虫防治效果超过80%.     

枯草芽孢杆菌发酵生产腐植酸条件研究

以枯草芽孢杆菌为生产菌株,在蔗渣发酵培养基的基础上,采用一次回归正交试验,对腐植酸发酵过程中接种量、通气量(搅拌次数)、温度及时间4个因素对腐植酸产量的影响情况进行分析.试验结果表明,发酵时间的影响最为显著;所得到的回归方程有效且可信度高,回归方程为:y=4.6844+0.03251+0.0208A-0.041 9θ+0.202 5D,其中发酵时间、接种量和通气量与腐植酸产量呈正相关、与温度呈负相关.     

一株苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的分离与鉴定

利用醋酸盐对苏云金芽孢杆菌芽孢萌发的选择性抑制特性，采用选择性培养基从土壤中分离苏云金芽孢杆菌，对分离菌株的个体形态，生理生化特点进行了分类研究，确定该菌株即为苏云金杆菌，采用改进的培养基培养伴胞晶体，证明该培养基可在48h内产生大量的伴胞晶体。     

应用Bt控制鞘翅目害虫的研究现状

本文主要针对苏云金杆菌对鞘翅目害虫的研究历史过程和应用方面进展进行阐述 ,提出其增效途径和抗性对策。