新氨基标记试剂的合成、表征及荧光性质

以荧光素为荧光团,N-羟基琥珀酰亚胺为活性基团,合成了一种新的氨基荧光标记试剂6-氧-(N-琥珀酰亚胺乙酸脂)-9-(2′-乙氧羰基)荧光素(SAAF),对其结构进行表征,并研究和测定了SAAF的荧光性质以及在不同介质中的荧光量子产率.结果表明SAAF的荧光强度受pH值影响较小,光稳定性好.与已有的商品化试剂相比,具有优势和特色.     

羧基保护基团琥珀酰亚胺烷基酯(Ⅰ)

Nefkens曾用酞酰亚胺甲酯作α-氨基酸的羧基保护基团。琥珀酰亚胺基结构与酞酰亚胺基类似,为了寻找新的羧基保护基团,我们考虑了用琥珀酰亚胺甲基和琥珀酰亚胺乙基作α-氨基酸的羧基保护基团的可能性。为简便计,文中把琥珀酰亚胺基记作Su。 在DCC存在下,N-羟甲基琥珀酰亚胺、N-(β-羟乙基)琥珀酰亚胺与N-保护的α-氨基酸缩合成酯。我们测定了各酯基在(1)4.2 mol/L HCl/二氧六环;(2)55％三氟乙酸(TFA)/二氯甲     

一种FRET多肽的酶-化学法合成

选择FITC和罗丹明类荧光分子Alexa Fluor~514作为荧光对,通过酶-化学方法合成了一种潜在的FRET多肽.首先,在OGT催化下,将N-叠氮乙酰葡糖胺(GlcNAz)通过O-糖苷键连接到FITC标记的底物八肽(YAVVPVSK)的丝氨酸羟基上;然后,将炔基标记的Alexa Fluor~514通过点击化学反应连接到GlcNAz上,得到目标化合物,并通过质谱进行了表征.     

一种FRET多肽的酶-化学法合成

选择FITC和罗丹明类荧光分子Alexa Fluor~514作为荧光对,通过酶-化学方法合成了一种潜在的FRET多肽.首先,在OGT催化下,将N-叠氮乙酰葡糖胺(GlcNAz)通过O-糖苷键连接到FITC标记的底物八肽(YAVVPVSK)的丝氨酸羟基上;然后,将炔基标记的Alexa Fluor~514通过点击化学反应连接到GlcNAz上,得到目标化合物,并通过质谱进行了表征.     

大肠埃希菌ELISA检测条件的优化

目的对ELISA检测大肠埃希菌方法条件进行优化研究.方法以大肠埃希菌为对象,通过Box-Behnken设计星点响应面实验进行优化实验.结果优化后ELISA检测条件:抗原包被浓度为6.25μg/m L,抗原包被最佳时间为7 h,抗体稀释度最佳为1∶625 0,大肠埃希菌ELISA检测OD值为2.12.结论经实验得证,通过星点响应面实验方法进行大肠埃希菌ELISA检测条件优化,结果合理有效,优化效果良好.     

荧光化学传感器和化学计量型传感器用于离子识别的研究进展(英文)

荧光检测相对于放射性核素检测是一种高灵敏度、低成本、操作方便的化学检测技术,可以用于检测多种化学物质。介绍了荧光化学传感器和化学计量型荧光探针的基本原理。阐明了通过"点击"化学(Cu(I)催化下炔基与叠氮形成稳定的1,2,3-3氮唑化合物)合成荧光化学传感器和化学计量型荧光探针的应用,主要从3个方面展开,包括阴离子识别,阳离子识别以及阴、阳离子对的识别。用于阳离子识别的荧光基团重点介绍了氟化硼二吡咯(BODIPY)、苯并噻二唑和香豆素。     

儿童大肠埃希菌产ESBLs检测及耐药分析

目的分析吉林地区儿童产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药特点,以指导临床用药.方法用双纸片协同试验检测115株大肠埃希菌产ESBLs的情况,并用K-B纸片扩散法对其耐药性进行了检测.结果产ESBLs大肠埃希菌为36株,阳性率为31.3%;产ESBLs大肠埃希菌对多种抗生素的耐药率高于非产ESBLs大肠埃希菌;所有大肠埃希菌均对亚胺培南敏感.结论吉林地区儿童产ESBLs的大肠埃希菌检出率高并呈多重耐药性.临床治疗中应严格掌握抗菌药物应用指征,并动态监测其耐药性变迁,防止ESBLs大肠埃希菌的局部流行.     

从腹泻实验兔分离的一株大肠埃希菌的生物学特性研究

目的 研究从腹泻实验兔分离到的大肠埃希菌的生物学特性。方法 对一株从因腹泻而死亡的SPF级实验兔体内分离的致病性大肠埃希菌的遗传谱系、抗生素敏感性、消毒液敏感性以及细菌携带的耐药基因和毒力基因进行较为全面的研究。结果 该大肠埃希菌属于B1型遗传谱系，携带毒力基因eaeA,属于肠致病性大肠埃希菌。对常用的5种消毒液敏感，对于青霉素、氨苄西林、头孢氨苄、头孢拉定、四环素、多西环素、米诺霉素、红霉素、麦迪霉素、万古霉素、复方新诺明等11种抗生素耐药，携带aadA1,gyrA,sul1和tetA等4个抗生素耐药基因。结论 从因腹泻而死亡的SPF级实验兔体内分离的致病性大肠埃希菌为一株B1型遗传谱系的肠致病性大肠埃希菌，具有多重耐药性，对常用的消毒剂均敏感。     

基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器

提出了一种基于酶生物催化沉积放大的日本血吸虫压电免疫传感器.采用混合自组装单层膜技术在石英晶振金电极表面制备巯基丙酸(MPA)和巯基乙醇(ME)混合功能基底膜,通过偶联剂盐酸1 - 乙基 - 3 - (3 - 二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)及N - 羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化混合膜上富含的羧基基团用于日本血吸虫抗原(SjAg)的高效共价固定.通过夹心式免疫反应,将辣根过氧化酶(HRP)标记的羊抗兔二抗固定到晶体表面,利用HRP催化H2O2 氧化底物4 - 氯 - 1 - 萘酚在晶振表面形成不溶性沉积物,使免疫检测信号得以显著放大.在优化的实验条件下,该传感器可灵敏检测感染兔血清样中日本血吸虫抗体(SjAb)浓度(稀释比)的线性范围是1∶10 000～1∶100,可望用于日本血吸虫病的早期临床诊断.     

地肤子提取液抑菌作用的微量量热法研究

应用微量量热法测定了大肠埃希菌在不同浓度的地肤子提取液中生长的热功率-时间曲线,应用非限制性条件下微生物生长的模型进行数学处理,得出生长速率常数,并拟合出非线性方程,确定了大肠埃希菌在地肤子提取液中的最佳生长浓度和临界生长浓度.     

MUG单管定量检测法对大肠埃希氏菌的检测

采用MUG单管定量检测法对实验室制备的菌悬液、天然海水、水产品进行定量检测,并与大肠埃希氏菌多管发酵法的检测结果进行比对分析.结果表明：MUG单管定量检测法与大肠埃希氏菌多管发酵法对菌悬液、天然海水、水产品的检测结果没有统计学差异;MUG单管定量检测法检测数据的精确性高于大肠埃希氏菌多管发酵法,而且更为快速、经济.因此,该法适用于海水和水产品中大肠埃希氏菌的定量检测.     

抗体在自组装单分子膜上的共价键固定化及其传感性能研究

在单晶金片电极上制备了巯基十一酸[SH(CH2)10COOH]自组装单分子膜,利用1-乙基3-(3-二甲氨基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(NHS),将抗体(纯化羊抗小鼠IgG)以共价键形式固定在金电极上,分别测定了裸金电极、自组装单分子膜电极、抗体膜电极的电位响应,最后根据抗原、抗体反应前后电极电位的变化,对游离抗原进行检测,电极检测下限可达0．5／μg／L,检测范围为0．5～12μg／L．     

琥珀酰亚胺类固定化酶载体的合成与胺解研究

选用丙烯酸(AA)、N′-羟基琥珀酰亚胺(NHM)为单体,以N′,N′-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)为交联剂,以乙醇水溶液为制孔剂条件下进行反相悬浮聚合,得到珠状共聚物载体,该载体是一种新的酶载体形式,在国内外的相关文献中均未见报道.用红外光谱对其结构进行了表征.对载体与有机胺的胺解反应进行了研究,发现共聚物载体分子链上的丙烯酸-N′-羟基琥珀酰亚胺酯基易于在温和条件下与胺基发生胺解反应,从而为该类载体应用于含游离胺基的生物活性物质分子的固定化提供了依据.     

点击化学用于生物分子标记的研究进展（英文）

自1999年Barry Sharpless提出点击化学的概念以来,其得到极大的关注和发展。主要介绍了点击化学的定义和分类,其中Cu(I)催化下炔基与叠氮可形成稳定的1,2,3-3氮唑化合物,这类反应的应用最为广泛。它在标记生物大分子方面的应用主要从4个方面展开,包括标记多肽和蛋白,DNA和RNA,细胞中的酯质和病毒表面。     

银杏叶提取物体外抑菌作用研究

目的研究银杏叶提取物(Extract of Ginkgo biloba Leaves,EGb)对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌作用.方法通过测定抑菌环直径和最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)检测EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的体外抑菌效果.结果 EGb对金黄色葡萄球菌的抑菌环直径为16.5 mm,MIC值为12.5 mg/mL;EGb对大肠埃希菌的抑菌环直径为14.5 mm,MIC值为25 mg/mL.结论 EGb对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌都有抑菌作用,EGb作为天然抗菌剂与防腐剂具有广阔的开发利用前景.     

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及耐药性分析

按美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)2005年制定的标准方法,筛选产超广普β-内酰胺酶(Extended-Spectrum β-Lactamases,ESBLs)的大肠埃希菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia),并采用微量肉汤稀释法,对宁夏地区以上2种细菌产ESBLs的耐药情况进行了检测.发现63株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌中,45株为产ESBLs菌,总阳性率为43.27%,其中,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌阳性率分别为53.97%(34株)和26.83%(11株).45株产ESBLs菌对美罗培南的敏感率为100%.对头孢他啶的敏感率为76.47%,而对其他抗菌药物敏感率较低.实验证明,宁夏地区产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性严重,应限制广谱β-内酰胺类抗生素,特别是第3代头孢菌素的使用.从目前耐药性监测来看,美罗培南可作为治疗产ESBLs菌严重感染的有效药物.     

结核杆菌19ku脂蛋白的表达与纯化

目的:通过基因工程技术获得重组结核分枝杆茵19 ku蛋白。方法:应用PCR技术扩增卡介苗的19 ku蛋白DNA序列;以质粒pET28a为表达栽体,构建19 ku重组质粒,然后转化大肠埃希菌BL21(DE3);在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,分别对不同诱导时间的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),凝胶经考马斯亮蓝染色检测蛋白。通过镍柱纯化后获得目的蛋白。结果:重组质粒pET28a-p19测序表明与报道的序列相同。它在大肠埃希菌BL21(DE3)细胞内以可溶性形式表达。不同IPTG诱导时间实验表明重组结核分枝杆茵l9 ku蛋白诱导4 h在大肠埃希菌中的表达量最高。结论:pET28a-p19大肠埃希菌工程株可高表达结核分枝杆菌重组19 ku蛋白。     

肠癌患者肠道菌群分析及携带β-葡萄糖醛酸酶基因特征

目的探讨肠道菌群紊乱及β-葡萄糖醛酸酶(β-Glucuronidase,GUS)与结直肠恶性肿瘤的相关性.方法收集肠癌、肠癌前病变患者及其同期健康人员粪便样本,进行细菌培养并计数.水煮法提取大肠埃希菌DNA后行PCR扩增,采用分子克隆技术构建重组质粒,进行DNA测序比对.结果细菌培养结果显示:大肠埃希菌、酵母菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌在肠癌、肠癌前病变患者及健康对照3组间比较差异具有统计学意义(P 0.05).测序结果显示:肠癌前病变患者大肠埃希菌uidA基因序列第1497位置G突变成A.结论肠癌前病变患者肠道菌群失调在癌变早期已发生改变,大肠埃希菌uidA基因存在突变,肠癌的发生风险增加.     

一个新型双核Schiff base镉配合物的合成、结构表征及体外抗临床分离多重耐药菌的作用研究

以N,N'-二(邻羟亚苄基)-1,2邻苯二胺为配体合成一个新型双核Schiff base镉配合物1.通过红外、单晶衍射对其进行了结构表征.应用Kerby-Bauer纸片扩散法分别测试其对临床分离的不同多药耐药的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、真菌的抗菌活性.通过微量稀释法测定合成配合物的最低抑菌浓度[minimum inhibitory concentration(MIC)]、最低杀细菌浓度[minimum bactericidal concentration(MBC)].抑菌试验结果表明,配合物1对临床分离金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌都有明显的抑菌效果,且对金黄色葡萄球菌的抑菌作用较大肠埃希菌强.配合物1对临床分离金黄色葡萄球菌的MIC值为15.625~62.5μg/m L,MBC值为31.25~125μg/m L;配合物1对对临床分离大肠埃希菌的MIC值为31.25~62.5μg/m L,MBC值为62.5~125μg/m L.     

应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究

应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题.