湖北石首麋鹿粪便DNA的提取及系统发育分析

利用非损伤取样方法,从湖北石首麋鹿的粪便样品中提取得到其线粒体基因组Cyt 6基因的部分序列,并对其进行了系统发育分析.结果表明:现有的麋鹿是遗传多样性高度特化的物种;在分歧时间上,麋鹿属较鹿属更晚从鹿亚科中分化独立出来,与鹿属中的坡鹿有着较近的进化关系.此外.还对有关麋鹿归属的古生物学和分子系统学研究结果出现矛盾的原因进行了初步分析.认为通过对我国多地点不同年代地层中麋鹿化石或亚化石进行古DNA研究,可弥补现有分子系统学研究中由于奠基者效应带来的取样误差,得到更有说服力的分析结果.     

非伤害性取样方法获取的拟穴青蟹DNA质量研究

选取5只采自广西北海的野生拟穴青蟹(Scylla paramamosain),分别采用非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法提取基因组DNA进行COI扩增和ISSR扩增,检测DNA质量。结果表明,非伤害性(血淋巴)和伤害性(肌肉组织)取样方法获得的拟穴青蟹全基因组DNA的OD260/OD280分别为1.75~2.01和1.81~1.94,全基因组DNA纯度均较高,质量不相上下。同时,两种取样方法获取的DNA扩增片段大小均在600bp左右,同一个体扩增带型也是一致的。非伤害性(血淋巴)取样方法提取的基因组DNA,在质量上可以媲美伤害性取样(肌肉组织)提取的DNA,可以用于其它分子生物学实验研究。     

一种快速提取酵母样真菌DNA方法的研究

对一种提取酵母样真菌染色体DNA方法进行实验,试图找到一种快速简便提取酵母样真菌的方法,并对提取结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增等方法的鉴定。结果表明:用此方法提取的酵母样真菌基因组DNA浓度为395.5ng/μL,OD260/OD280比值为1.58~1.66,可满足PCR特异性扩增捡验酵母样真菌的需要。     

一种简易的昆虫基因组DNA提取方法

报道了一种改进的昆虫基因组DNA 的提取方法.结果表明,该方法可在常温条件下,对多种昆虫及人体组织进行酚/氯仿抽提,DNA 得率较高,OD260/280 的值在1.6～1.9 之间.     

山西省沙棘品种AFLP的初步分析

沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量.采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP...     

不同土壤微生物DNA提取方法比较

用4种土壤微生物DNA提取方法提取了3种类型土壤的微生物总DNA,利用分光光度法测定4种DNA的OD260、OD280,并计算和分析DNA提取物的产率和纯度.研究发现：方法4即改良的DNA提取方法,无论是提取DNA的产率,还是提取DNA的纯度,都较其他3种方法高,说明改良的DNA提取方法能够准确有效地提取3种类型土壤的...     

三种罗布麻干燥叶片基因组DNA的提取方法

采用Qiagen的植物基因组DNA提取试剂盒并加以改进,首次从不同季节采收、不同干燥方法保存的三种罗布麻(罗布红麻、大叶白麻和白麻)干燥叶片中提取出基因组DNA.提取的基因组TE溶解液的OD260/OD280 值多在1.7～1.9范围内,电泳呈现单条带,核基因组的ITS片段、叶绿体基因组的trnL内含子和trnL-F非编码区片段的PCR扩增条带清晰并能进行DNA测序,这表明基因组DNA质量较好,可以满足后续分子生物学实验的要求.本研究为罗布麻等中药材的进一步分子生物学研究提供了必要的技术基础.     

基于ISSR标记技术的金钱豹遗传多样性分析

采用ISSR-PCR技术为分子标记,对不同地区金钱豹的分子遗传多态性进行研究.采用非损伤性取样方法采集血样或从死亡的样本中取内脏组织,提取基因组DNA,筛选合适的ISSR引物进行随机扩增,用PopGen、Ntsys等软件进行数据分析,检测其遗传分化程度.Nei's指数计算的遗传一致度和遗传距离以及聚类关系显示,金钱豹9个个体遗传一致度为0.517 5～0.886 0,遗传距离为0.121 1～0.593 1,金钱豹不同个体之间存在一定程度的差异,其中宁武的两兄妹个体关系密切,个体之间的遗传关系同性别和地理位置没有明显的对应关系.     

基于RAPD分析用的佛手DNA的提取

对佛手DNA提取过程从不同方面进行了改良、优化，筛选出较理想的佛手DNA提取方法：每eppen—dorf管鲜样品取量为0．1g～0．25g，700μL提取缓冲液，加提取液前用液氮研磨，Vc(抗坏血酸)添加量为ω(Vc／鲜样)=0．1．该方法分离出DNA的A260／A280大于1．9，符合佛手RAPD(随机扩增多态DNA)分析要求，在佛手遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景。     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

老芒麦总DNA提取方法探讨

以披碱草属老芒麦(Elymus sibiricus)为材料,分别用简易提取法、十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法提取其基因组DNA,利用分光光度计测定其OD260与OD280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度和浓度,并利用0.8%琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置.结果表明,3种方法都可以提取到基因组DNA,但SDS法所提取的DNA质量明显优于简易提取法和CTAB法,且分离的DNA产率高,纯度高,质量好,纯化后电泳检测带型清晰.因此,SDS法是实验室提取老芒麦基因组DNA的较有效而实用的方法.     

毛白杨成熟叶片基因组DNA提取方法的比较研究

比较了4种毛白杨成熟叶片DNA的提取方法,结果表明,SDS法的提取效果优于CTAB法.其中,SDS-II法步骤较少,操作简便,不易造成实验误差,OD260/280值为1.87,提取的DNA片段长度在20kb左右,提取得率为42μg/g,为4种方法中最高.ISSR-PCR实验的效果表明,SDS-II法提取的DNA可以做为ISSR分子标记的模板DNA.     

超高压处理对大肠杆菌DH5α质粒DNA的影响

文章研究了超高压处理对大肠杆菌DH5α菌株质粒pMD-18DNA的影响.大肠杆菌DH5α在不同的压力下于25 ℃处理15 min后,提取其质粒pMD-18DNA,检测质粒在260 nm和280 nm处的吸光度得到其纯度,并进行了琼脂糖凝胶电泳.实验发现:大肠杆菌DH5α质粒pMD-18DNA经100 MPa、200 MPa处理后其A260、A280与未经高压处理样相比吸光度下降;而经300 MPa、400 MPa和500 MPa处理后其吸光度与未经高压处理样相比吸光度上升.通过琼脂糖凝胶电泳分析,大肠杆菌DH5α质粒DNA经高压(300 MPa、400 MPa和500 MPa)后条带增多.实验结果表明超高压处理影响了质粒DNA的结构.     

长爪沙鼠不同组织基因组DNA的提取条件比较

目的建立长爪沙鼠基因组DNA的提取方法并对其脑、肝、肾和肌肉组织中的基因丰度进行比较。方法采用酚-氯仿法对不同消化温度和不同蛋白酶K浓度处理的各种组织提取DNA,比较其OD260/OD280值、DNA和蛋白质含量。结果提取DNA时温度和酶浓度对不同组织的DNA和蛋白质含量的影响不同。肾DNA样品中的蛋白质含量在低酶浓度组明显低于高酶浓度组,低酶浓度组的肾和肝DNA样品中的蛋白质含量均明显低于高酶浓度组。消化温度对提取肌肉组织的DNA含量影响较大,而从肾和肝组织中提取的DNA含量在37℃和50℃消化组之间没有差异。肝组织中的基因丰度最高,而肌肉组织中的基因丰度最低。结论提取DNA时,消化温度和酶浓度对提取不同组织的DNA和蛋白质含量有不同程度的影响。不同组织的基因丰度差异较大。     

角倍蚜总RNA提取方法的比较及优化

采用Trizol法及试剂盒柱提法提取角倍蚜若虫及成虫总RNA,通过紫外分光光度法(OD260/OD280、OD260/OD230)及琼脂糖凝胶电泳检测,对所提取RNA的纯度、浓度及完整性进行了分析.结果表明,采用常规样品量两种方法提取的RNA均降解严重,分析认为角倍蚜富含内源性RNase.通过大幅降低样品量,优化提取步骤,缩短提取时间,有效消除了RNA降解现象.采用Trizol法获得了纯度高、完整性好的RNA样品,电泳显示清晰的28S、18S及5S三条带;试剂盒柱提法获得的RNA呈现较为特殊的带型,没有常规的5S条带,而在750bp～1 000bp之间有一明显条带.     

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.     

昆虫全基因组DNA的保存及提取

以蚂蚁、天牛、蝗虫等昆虫为实验材料,建立了75%酒精常温浸泡密封保存和福尔马林常温浸泡密封保存昆虫样品2~4周后进行全基因组DNA提取的方法。基因组DNA经紫外分光光度法(260 nm、280 nm)、琼脂糖凝胶电泳、PCR检测,结果表明:从两种方法保存的样品中均能提取到纯净完整的基因组DNA,适用于分子生物学实验。     

改良Zigenhagen法提取南方红豆杉总DNA

将Pierre和Haurence建立的Zigenhagen法加以适当改进,用以从富含多糖、酚类化合物和一些次生代谢产物的南方红豆杉叶片中提取总DNA,所获DNA样品的A260/A280比值在1.750-2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示每一样品均具有单一明亮的条带,并能成功地用于trnL-trnF非编码区序列扩增,为基于trnL-trnF非编码区序列数据的南方红豆杉分子系统发育研究打下基础。     

中药材贝母DNA不同提取方法的比较

目的探讨中药材贝母DNA的不同提取方法,为中药贝母的分子生物学鉴定提供参考.方法利用苯酚法、CTAB法、SDS法从中药贝母中提取DNA,通过紫外分光光度和琼脂糖凝胶电泳对所得DNA样品含量及纯度进行检测.结果利用3种不同的方法提取,药材贝母DNA的A260/A280在1.80±0.23左右.结论利用3种不同DNA提取方...     

非伤害性取样在无尾两栖类保护遗传学研究中的应用

为了改变传统的将两栖类动物处死后再从肌肉提取DNA的取样方法,采用非伤害性取样方法分别采集了虎纹蛙的血液和趾提取DNA,并与从其肌肉中提取的DNA进行了比较,结果显示:使用血液和趾提取的DNA产量与肌肉样本的DNA产量相当;随后,分别对3种方法取样的样本进行了线粒体16S rRNA和核DNA的微卫星PCR分析,结果表明:3种取样方法所获得的扩增效果相当,均能满足虎纹蛙的保护遗传学研究.因此认为,用非伤害性取样技术替代传统的肌肉取样的方法在无尾两栖类的保护遗传学研究中是切实可行的.