丹龙胶囊抗血栓形成的实验研究

目的研究丹龙胶囊抗血栓形成的作用。方法手术结扎大鼠下腔静脉使大鼠下腔静脉内形成血栓,称量血栓湿重和干重;用血栓生成仪观察记录电刺激5min内颈总动脉平均阻塞率(%);用血小板聚集凝血因子分析仪测定受试药对二磷酸二腺苷(ADP)诱导血小板聚集的抑制作用。结果丹龙胶囊能够减少下腔静脉血栓形成;降低颈总动脉平均阻塞率;抑制由二磷酸二腺苷引起的家兔血小板聚集。结论研究结果证明丹龙胶囊具有抑制血栓形成的作用。     

罗汉果黄酮的活血化瘀药理作用研究

为了观察罗汉果黄酮的活血化瘀药理作用,采用水提和树脂吸附方法提取罗汉果黄酮,采用尾静脉注射胶原蛋白和肾上腺素造成小鼠体内血栓,测定药物对小鼠脑血栓的保护率;用腺苷-5-二磷酸钠盐（ADP）诱导大鼠血小板聚集,计算药物对血小板聚集的抑制率; 腹腔注射75%蛋黄乳液造成实验性高血脂症,测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白含量; 采用毛细玻璃管法测定小鼠凝血时间,并进行了的急性毒性试验.结果表明,罗汉果黄酮对血栓形成有一定的保护作用;能抑制ADP诱导大鼠血小板聚集;明显降低高胆固醇血症小鼠的TC和TG含量,提高HDL-C的水平;以及延长小鼠的凝血时间.说明罗汉果黄酮具有一定的抗血栓形成、抗血小板聚集、降血脂、抗凝血等活血化瘀药理作用.急性毒性试验结果表明,罗汉果黄酮对小鼠的最大给药量为60.85g/kg.     

三七叶甙对兔血小板聚集功能的影响

 应用Born氏比浊法分别测定三七叶甙(Panax notoginseng folium saponins)对花生四烯酸(arachidonic acid,AA)、血小板活化因子(platelet activating factor,PAF)和腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)诱导的兔血小板聚集功能的影响.实验结果表明:三七叶甙在体外显著抑制ADP诱导的血小板聚集,其半数抑制浓度(medium inhibitory concentration,IC₅₀)为89.4mg/L;三七叶甙静脉注射也能明显降低ADP诱导的兔血小板聚集率,且呈剂量-效应关系.提示三七叶甙体内外均明显抑制ADP诱导的兔血小板聚集,而对AA和PAF诱导的兔血小板聚集无明显影响.     

硫化氢拮抗同型半胱氨酸刺激血小板聚集作用

为观察硫化氢(H2S)对同型半胱氨酸(HCY)刺激血小板聚集的影响及机制,在HCY刺激腺苷二磷酸(ADP)诱导的血小板聚集模型上加入不同浓度H2S干预,采用Born's法测定血小板聚集率,Greiss法测定血小板孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量.结果表明:H2S呈浓度依赖的抑制HCY刺激ADP诱导的血小板聚集,显著增加血小板NO释放.Person相关分析,H2S拮抗HCY促血小板聚集作用与NO生成呈负相关(r2=-0.438 7,P＜0.01).由此可见,H2S可拮抗HCY对血小板的效应,其机制可能与改善血小板NO释放有关.     

斑马鱼血栓模型在中药活性成分筛选中的适用性

为了考察斑马鱼血栓生成模型在中药成分活性筛选中的适应性,利用体外血小板聚集实验和体内斑马鱼血栓形成实验,分别检测中药单体对血小板聚集和血栓形成的影响。筛选模型选择3~5 d的野生型AB系斑马鱼以及转基因TG系（integrin αIIb: EGFP）血小板标记绿色荧光斑马鱼,利用三氯化铁诱导血栓形成,以凝血时间为指标,用20种中药单体成分处理斑马鱼,考察对斑马鱼血栓形成的影响。同时,采集大鼠全血制备富血小板血浆和贫血小板血浆,利用血小板聚集仪测定血小板聚集率,检测中药单体成分活性。结果显示：有7种中药单体成分具有抑制斑马鱼血栓形成活性,首次发现桃叶珊瑚苷具有明显的抑制斑马鱼血栓形成作用;体外血小板聚集实验结果显示有12种中药材成分具有抑制血小板聚集的作用,其中100 μg/mL 红景天苷的血小板聚集抑制率88.22%;利用斑马鱼血栓模型检测出的7种中药单体与体外血小板聚集实验结果一致。斑马鱼血栓生成模型对中药抗血栓活性筛选具有良好的适应性。     

FDP改善运动疲劳红细胞能量代谢

探索1,6-二磷酸果糖（FDP）在分子水平对蹦床运动员疲劳后红细胞（RBC）能量代谢的影响规律,为运动性疲劳的恢复提供实验研究依据。FDP800mmol／L和0mmol／L分别孵育疲劳后红细胞,分别用细胞化学方法、比色法、高效液相色谱法检测细胞色素氧化酶活力,2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）水平,三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、一磷酸腺苷（AMP）含量并计算能荷。FDP处理后红细胞ATP、能荷、细胞色素氧化酶活力和2,3-DPG水平显著增加,ADP和AMP含量显著下降。FDP能够通过增加细胞色素氧化酶活力,提高2,3-DPG水平来改善疲劳红细胞能量供应,缓解运动性疲劳。     

红花黄色素抗凝血作用及对血小板聚集影响的研究

目的研究红花黄色素抗凝血作用及对血小板聚集的影响。方法大鼠心脏采血,取血浆检测凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(TT),活化部分凝血活酶时间(APTT),血浆纤维蛋白原(Fib)含量;家兔颈动脉采血,取富血小板血浆(PRP)及穷血小板血浆(PPP),描记聚集曲线,计算聚集百分率,最大聚集百分率及药物的聚集抑制百分率。结果红花黄色素明显延长大鼠血浆凝血酶时间、凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间,明显降低大鼠血浆纤维蛋白原含量,显著抑制由二磷酸腺苷引起的家兔血小板聚集。结论红花黄色素具有抗凝血作用。     

血络复欣颗粒对大鼠凝血功能及血小板聚集功能的影响

目的研究血络复欣颗粒抗凝血作用及对血小板聚集功能的影响。方法大鼠经腹主动脉采血,分离血浆并检测凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)含量;吸取富血小板血浆(PRP)及穷血小板血浆(PPP),以ADP为诱导剂,血小板聚集凝血因子分析仪,检测2 min、4 min、6 min血小板聚集百分率,计算出最大聚集百分率以及聚集抑制百分率。结果血络复欣能够显著延长大鼠血浆的PT、TT、APTT,并显著降低Fib的含量,且显著降低以ADP诱导的大鼠血小板聚集率。结论血络复欣具有显著的抗凝血以及抑制以ADP诱导的血小板聚集的作用。     

重组人血小板生成素和重组人白介素-11对正常猕猴全血凝血功能和血小板的影响

为重组人血小板生成素 (rhTPO)和重组人白介素 11(rhIL 11)用于治疗血小板生成低下疾病的临床应用提供实验依据 ,观察给rhTPO和thIL 11后猕猴血小板数和二磷酸腺苷或凝血酶诱导的血小板聚集功能及全血凝固活性的改变。结果 :①连续给 2 μg/(kg·d)rhTPO 8d和 2 0d ,rhTPO组血小板数已明显增多 ,但其最大聚集率与对照值和给药差别并不显著 ;相同时间rhTPO组血栓弹力图 (TEG)r、k和r +k值均有不同程度的缩短。ma 值明显增大 ,提示全血凝固活性增强。② 12 0 μg/(kg·d)和 10 80 μg/(kg·d)rhIL 11连续注射 4 9d ,两剂量组血小板数均明显高于赋型剂对照组 ;凝血酶诱导两组血小板最大聚集率变化不显著 ,ADP诱导时 12 0 μg/(kg·d)组最大聚集率变化亦不明显 ,而 10 80 μg/(kg·d)组最大聚集率则明显低于对照和 12 0 μg/(kg·d)组。停药后 2 3d ,10 80 μg/(kg·d)组血小板数和其聚集功能仍未恢复正常。说明rhTPO和rhIL 11对血小板数量和功能方面的影响基本相似 ,而对血浆其它凝血因素的影响可能不完全相同     

鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响

摘以400mg／kg2次腹腔注射硫代乙酰胺（TAA）建立大鼠急性肝损伤模型,并在注射TAA前1h以80mg／kg2次腹腔注射鲨鱼肝蛋白粗提物进行预防,研究了鲨鱼肝蛋白粗提物对大鼠肝线粒体抗氧化功能的影响。注射TAA后,大鼠肝脏线粒体腺苷二磷酸（ADP）诱导的氧消耗、呼吸控制率（RCR）、磷／氧比（P／O）、氧化磷酸化率均低于对照组,而预防组线粒体ADP诱导的氧消耗、呼吸控制率、P／O和氧化磷酸化效率均高于模型组;TAA降低了线粒体中谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶的水平,而鲨鱼肝蛋白粗提物则使线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶的水平明显升高,说明鲨鱼肝蛋白粗提物能部分修复线粒体受损的呼吸功能,增强线粒体抗氧化能力。     

污染因子Cu2+对鲫鱼血细胞的影响

在光镜水平上研究了鲫鱼外周血细胞的形态结构。结果发现在鲫鱼外周血中可看到红细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和血栓细胞,未发现嗜酸性细胞和嗜碱性粒细胞,描述了上述各种血细胞在光镜下的形态和显微结构。污染后鱼体中淋巴细胞的显著增加,单核细胞增多,伴随着血栓细胞和嗜中性细胞的显著减少是鱼体短期(96h)接触Cu~(2+)后变化的一个指示。这个研究结果同时也被白细胞数量的变化特征所证实,即白细胞在通常的温度污染条件下增多,以抵抗可能由Cu~(2+)所引起的机体感染,从而来保护机体。     

异烟肼对斑马鱼胚胎发育量-毒关系的研究

研究了一线抗结核药物异烟肼对斑马鱼发育的量-毒关系。用不同浓度的异烟肼分别处理发育至2 hpf(hour post fertilization)的斑马鱼胚胎,观察胚胎和幼鱼的死亡率、孵化率、畸形率、体长及形态学变化。急性毒性实验结果表明异烟肼对斑马鱼有明显的发育毒性,能导致斑马鱼发育迟缓和畸变。与对照组相比,低剂量（小于6 mmol/L）异烟肼对斑马鱼无发育毒性,高剂量（≥32 mmol/L）异烟肼显著抑制胚胎的孵化率,并有明显的胚胎致死效应和致畸效应。斑马鱼死亡率和畸形率均随给药剂量的增加和给药时间的延长而升高。本实验条件下,异烟肼的最大无毒性效应浓度为2 mmol/L。     

利用斑马鱼模型研究芦荟大黄素对宫颈癌细胞SiHa的抑制作用

通过细胞增殖实验（MTT）研究不同浓度芦荟大黄素（Aloe emodin,AE）对人宫颈癌细胞SiHa生长的抑制作用,并将SiHa细胞注入48 hpf的斑马鱼胚胎卵黄囊,建立斑马鱼移植瘤模型,然后用不同浓度AE进行处理,考察肿瘤细胞在斑马鱼体内的增殖和迁移情况。结果显示,AE对SiHa细胞的生长抑制率随浓度和作用时间的增加而呈明显上升趋势,表现出一定的浓度 时间 效应依赖关系;体内实验表明AE对斑马鱼移植瘤的增殖和转移具有抑制作用。本研究表明,AE具有开发成抗宫颈癌药物的潜能,同时斑马鱼移植瘤模型也可以成为宫颈癌研究和药物评价的重要模型。     

低聚果糖和低聚异麦芽糖促进斑马鱼肠道蠕动作用的研究

探讨基于斑马鱼模型的低聚果糖及低聚异麦芽糖对肠道蠕动的促进作用。选用发育正常的5 d的斑马鱼幼鱼,各实验组分别加入不同浓度的低聚果糖和低聚异麦芽糖溶液,培养24 h后,在显微镜下观察其对斑马鱼肠道蠕动次数的影响。实验结果表明,125~500 mg/mL的低聚果糖和低聚异麦芽糖均对斑马鱼肠道蠕动有促进作用,蠕动次数与浓度成正相关性。相同浓度条件下,低聚果糖较低聚异麦芽糖促进斑马鱼肠道蠕动的作用更明显。采用斑马鱼动物模型可实现促进肠蠕动药物的早期、快速筛选。     

利用斑马鱼模型评价Vc和异Vc-Na抑制黑色素的生物活性

利用斑马鱼模型,通过表型观察、色素面积计算、酪氨酸酶活性测定三方面参数来评价Vc和异Vc-Na的抑制黑色素活性。首先利用已知的具有抑制黑色素活性的天然化合物熊果苷来验证该方法的可行性,获得预期结果后,再开展Vc和异Vc-Na的实验。实验结果表明,Vc水溶液在非致死的浓度范围内(0.01~5 mmol/L),对斑马鱼黑色素的形成未见明显影响,较高浓度的异Vc-Na水溶液能够显著抑制斑马鱼黑色素的形成(p≤0.05),而高浓度的异Vc-Na水溶液(≥0.3 mol/L)容易导致斑马鱼的形态学畸形。     

心血管疾病患者超高倍多媒体显微镜的活血分析

取患者手指末梢 1滴血制成活血片 ,用超高倍多媒体显微镜 ,直接观察细胞的流变性、红细胞聚集、血小板聚集 .结果表明 :2 5例冠心病患者的红细胞聚集有极显著性差异 (P <0 .0 1) ,血小板聚集有极显著性差异 (P <0 .0 1) ;2 3例高血压病患者的红细胞聚集有显著性差异 (P <0 .0 5) ,血小板聚集有极显著性差异 (P <0 .0 0 1) ;2 2例冠心病并发高血压患者的红细胞聚集有极显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,血小板聚集有显著性差异 (P <0 .0 5) .心血管疾病患者超高倍多媒体显微镜活血分析 ,对早期发现潜在性心血管疾病、早期预防、指导治疗和判断预后均具有重要的临床意义 .     

Deficiency of glutaredoxin 5 reveals Fe-S clusters are required for vertebrate haem synthesis

Iron is required to produce haem and iron-sulphur (Fe-S) clusters, processes thought to occur independently. Here we show that the hypochromic anaemia in shiraz (sir) zebrafish mutants is caused by deficiency of glutaredoxin 5 (grx5), a gene required in yeast for Fe-S cluster assembly. We found that grx5 was expressed in erythroid cells of zebrafish and mice. Zebrafish grx5 rescued the assembly of grx5 yeast Fe-S, showing that the biochemical function of grx5 is evolutionarily conserved. In contrast to yeast, vertebrates use iron regulatory protein 1 (IRP1) to sense intracellular iron and regulate mRNA stability or the translation of iron metabolism genes. We found that loss of Fe-S cluster assembly in sir animals activated IRP1 and blocked haem biosynthesis catalysed by aminolaevulinate synthase 2 (ALAS2). Overexpression of ALAS2 RNA without the 5' iron response element that binds IRP1 rescued sir embryos, whereas overexpression of ALAS2 including the iron response element did not. Further, antisense knockdown of IRP1 restored sir embryo haemoglobin synthesis. These findings uncover a connection between haem biosynthesis and Fe-S clusters, indicating that haemoglobin production in the differentiating red cell is regulated through Fe-S cluster assembly.     

苍耳子提取物对斑马鱼的发育及运动行为的毒性研究

为研究苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响,取受精后12/24 h斑马鱼胚胎,将胚胎分别置于不同浓度苍耳子提取物溶液中,在作用不同时间后,显微镜下统计孵化率、死亡率和心率;取受精后120 h斑马鱼胚胎,用不同浓度苍耳子提取物处理60 min后,利用行为学分析系统统计各组斑马鱼在0~10、10~20、20~30 min内行为轨迹,基于游行距离与游行时间得到游行速度,并统计转圈值。结果表明,苍耳子提取物对受精后12 h斑马鱼胚胎的发育有毒性,使斑马鱼胚胎的孵化率降低,在提取物浓度大于15μg/mL时,孵化率低于40%;0.93μg/mL苍耳子提取物可提高24 h斑马鱼胚胎的心率(P≤0.01),当提取物浓度大于7.5μg/mL时,心率显著性降低(P≤0.01);在行为学分析中发现,当苍耳子提取物浓度大于3μg/mL时,游行速度与转圈均值明显增加。研究认为,苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育有毒性作用,能够兴奋斑马鱼胚胎心率并增加其游行速度。     

T-box gene tbx5 is essential for formation of the pectoral limb bud

The T-box genes Tbx4 and Tbx5 have been shown to have key functions in the specification of the identity of the vertebrate forelimb (Tbx5) and hindlimb (Tbx4). Here we show that in zebrafish, Tbx5 has an additional early function that precedes the formation of the limb bud itself. Functional knockdown of zebrafish tbx5 through the use of an antisense oligonucleotide resulted in a failure to initiate fin bud formation, leading to the complete loss of pectoral fins. The function of the tbx5 gene in the development of zebrafish forelimbs seems to involve the directed migration of individual lateral-plate mesodermal cells into the future limb-bud-producing region. The primary defect seen in the tbx5-knockdown phenotype is similar to the primary defects described in known T-box-gene mutants such as the spadetail mutant of zebrafish and the Brachyury mutant of the mouse, which both similarly exhibit an altered migration of mesodermal cells. A common function for many of the T-box genes might therefore be in mediating the proper migration and/or changes in adhesive properties of early embryonic cells.