免疫球蛋白IgY的产生及其应用

采用鸡作为免疫宿主可以产生许多有用的多克隆抗体,但至今免疫球蛋白IgY(Immunoglobulin of egg yolk)的产生仍然很少被选用。本文着重介绍一种快速而有效的方法作为亲和层析纯化产生免疫球蛋白IgY的参考。现以α-亚单位低氧诱导因子-1(hypoxia-in-ducible factor-1,HIF-1)为例,IgY抗体曾经成功地用于各种方法和     

嗜硫性色谱分离鸭蛋抗体

采用嗜硫性色谱从鸭蛋蛋黄中提取抗体 .将澄清的蛋黄水溶性部分脱脂后 ,利用嗜硫色谱 (T -gel)分离鸭蛋蛋黄中的抗体 (IgY) ,得到的两种鸭蛋抗体 ,经SDS -PAGE检测 ,分子量分别为 2 0 0kD和 12 0kD .整个分离过程的IgY回收率极高 .     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白的制备分离

该文研究了幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称HP)疫苗对母鸡诱导产生特异性抗体(Immunoglobulinofyolk,简称IgY)以及IgY的制备和检定方法.采用融冻法和超声波法对HP破碎,破碎后的细胞用福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂制成疫苗对生蛋母鸡进行免疫,通过ELISA间接法检测鸡蛋的免疫应答,IgY用盐析、超滤和葡聚糖凝胶(SephadexG 200)层析等方法纯化,未纯化和纯化的IgY进行SDS PAGE电泳分析.IgY与HP的凝集反应均为阳性,表明IgY为HP的特异性抗体,用ELISA测定效价达1.6×103,比未免疫的蛋黄IgY高约160倍,根据SDS PAGE图谱分析抗HP的特异性IgY分子量在180kD左右.     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

卵源性多价抗蝮蛇毒IgY的制备及检测

采用短尾蝮(Gloydius brevicaudus)、乌苏里蝮(Gloydius ussuriensis)、岩栖蝮(Gloydius saxatilis)、原矛头蝮(Protobothrops mucrosquamatus)和菜花原矛头蝮(Protobothrops jerdonii)5种蛇毒的混合物制备类毒素,免疫20~22周龄莱航母鸡并收集鸡卵,用冻融法、水稀释法和PEG法提取卵黄多价抗蝮蛇毒IgY,并用酶联免疫法和蛋白印迹法对所得IgY效价进行检测.结果表明:母鸡在免疫期间产下的鸡卵中,均存在可有效中和上述5种蛇毒的卵黄抗体IgY,且诱导量随免疫强度的提高而增加;不同方法所得有效抗体的含量存在一定差异,且同一提取法所得抗体对不同蛇毒的交叉中和能力也不同,这可能与动物对5种蛇毒的免疫应答存在差异有关.     

抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体口服给药保护剂的研究

【目的】比较硫糖铝和5种糖类对抗尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒卵黄抗体(IgY)的保护作用,为开发抗尖吻蝮蛇毒IgY口服制剂提供依据。【方法】通过免疫白来航鸡(Gallus domesticus),从所产鸡蛋中制备抗尖吻蝮蛇毒IgY。在不同pH值(2.0,3.0)条件下,于IgY中加入相同剂量的保护剂,用ELISA法测定IgY活性;在pH值为2.0且加入条件下,加入等于或高于胃内正常质量浓度的胃蛋白酶,后加入不同剂量的硫糖铝,再用ELISA法测定IgY抗体活性;用不同剂量的保护剂与IgY混合后灌胃小鼠(Mus musculus),在不同时间点(1.5,2.5,3.5h)取血,采用ELISA和Western法测定血清中的IgY活性。【结果】在pH值为2.0和3.0条件下,硫糖铝对IgY抗体活性的保护效果均为最佳;在pH值为2.0且加入不小于胃内正常的胃蛋白酶质量浓度的条件下,体积分数在30%以上的硫糖铝均可提高IgY活性;IgY灌胃后的小鼠血清中,体积分数为50%的硫糖铝可有效保护IgY活性。【结论】加入硫糖铝作保护剂后能有效提高IgY对胃酸和胃蛋白酶的抵御作用。     

鸡蛋黄免疫球蛋白IgY的特性与用途

1969年Leslic与Clem指出鸟类、爬行类和两栖类动物的蛋黄中仅含有免疫球蛋白IgG一种成分。因为只有免疫球蛋白IgG分子能通过卵黄囊转输至蛋黄中,因此用抗原免疫的母鸡所生的鸡蛋黄中含有丰富的免疫球蛋白IgG。由于鸡蛋黄的英文名称为“Yolk”,特取它的第一个字母“Y”为代表,将鸡蛋黄中的免疫球蛋白IgG称为IgY(Immunoglobulin-Yolk)。     

抗尖吻蝮蛇毒卵黄抗体口服给药保护剂的研究

【目的】比较硫糖铝和5种糖类对抗尖吻蝮蛇(Deinagkistrodon acutus)毒卵黄抗体(IgY)的保护作用,为开发抗尖吻蝮蛇毒IgY口服制剂提供依据。【方法】通过免疫白来航鸡(Gallus domesticus),从所产鸡蛋中制备抗尖吻蝮蛇毒IgY。在不同pH 值(2.0,3.0)条件下,于IgY中加入相同剂量的保护剂,用ELISA 法测定IgY 活性;在pH 值为2.0且加入条件下,加入等于或高于胃内正常质量浓度的胃蛋白酶,后加入不同剂量的硫糖铝,再用ELISA法测定IgY 抗体活性;用不同剂量的保护剂与IgY混合后灌胃小鼠(Mus musculus),在不同时间点(1.5,2.5,3.5h)取血,采用ELISA和Western法测定血清中的IgY活性。【结果】在pH 值为2.0和3.0条件下,硫糖铝对IgY抗体活性的保护效果均为最佳;在pH 值为2.0且加入不小于胃内正常的胃蛋白酶质量浓度的条件下,体积分数在30%以上的硫糖铝均可提高IgY 活性;IgY 灌胃后的小鼠血清中,体积分数为50%的硫糖铝可有效保护IgY 活性。【结论】加入硫糖铝作保护剂后能有效提高IgY 对胃酸和胃蛋白酶的抵御作用。
     

鸡传染性法氏囊病卵黄抗体制备--免疫、效价检测和沉降分离

采用 3种不同的方案对蛋鸡进行强化免疫 ,获得抗鸡传染性法氏囊病的高免卵黄抗体原液 .用缓冲液沉降分离提取水溶性抗体成份IgY ,再采用琼脂扩散试验 (AGP)检测卵黄原液、上清液和沉渣的效价 .试验测得卵黄效价最高达 12 8,经缓冲液一次沉降约 5h后得到的上清液效价接近于卵黄效价 ,沉渣效价≤ 4.该工艺比其它高免卵黄抗体提取工艺简单得多 ,具有投资少、操作简便、便于工业规模生产等特点     

鸡卵黄抗体技术在5种草莓病毒快速检测中的应用

利用生物信息学技术对草莓轻型黄边病毒(SMYEV)、草莓斑驳病毒(SMV)及草莓皱缩病毒(SCV)等5种病毒抗原表位进行预测,将预测的抗原肽段及串联表位肽段的DNA片段在大肠埃希氏菌(Escherichia) BL21(DE3)进行原核表达,并将纯化后的抗原表位肽免疫京红一号产蛋鸡.从免疫蛋鸡卵黄中分离卵黄抗体(IgY),并对其进行抗体活性、效价及灵敏度的分析.结果表明,预测到的优势抗原表位肽段分别位于5种草莓病毒外壳蛋白氨基酸序列的27-38、49-82、288-314、62-75、218-238位. 5种优势抗原表位肽及其串联抗原表位肽(5S)均能在Escherichia BL21(DE3)中成功表达. 5S免疫蛋鸡产生的IgY对于5种草莓病毒均具有较强的免疫活性,抗体滴度为1∶1 600,检测灵敏度为10ng.本研究制备的串联抗原表位重组蛋白能诱导蛋鸡产生具有较强免疫活性的IgY抗体,可用于SMYEV、SMV及SCV等5种草莓病毒的同时检测.     

卵黄抗体的研究进展

自从 1983年 ,Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来 ,人们对卵黄抗体 (IgY)的研究越来越多 ,认识也越来越深入 ,应用也日益广泛起来。卵黄抗体价格便宜、制备方便 ,具有其它抗体不可比拟的特点 ,是当今生物科学研究的一个热点。1　IgY与IgG的区别历史上 ,曾经有人认为在禽类血清中发现的低分子量 (MW )免疫球蛋白是IgG。但是研究分析发现禽类血清中的抗体不具有类似于IgG的 5 0kDa重链 (γ) [1] 。所以说禽类血清中的抗体不是IgG。现在认为IgY是禽类血清和卵黄中的主要抗体。IgG的重链 (γ)为 5 0kD ,由四个区域组成 :一个可变区 …     

长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备

长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具.     

新型嗜硫膜亲和纯化鸡传染性法式囊卵黄抗体研究

以普通定性滤纸为基质 ,经碱处理 ,二乙烯砜活化和巯基乙醇偶联后 ,制备成嗜硫膜 (thiophilic -mem brane ,TM) ,考察了其对鸡传染性法式囊 (IBD)卵黄抗体 (IgY)的特异性亲和吸附作用 .卵黄经醋酸钠 -醋酸缓冲液 10倍稀释于 4℃自然沉降脱脂后 ,所得上清液 (WSF)经嗜硫膜亲和吸附分离 ,可一步纯化得到SDS-PAGE电泳纯的卵黄抗体 .IgY在嗜硫膜上的吸附速度随着流速的增加而增大 ,吸附量则随着流速的增加而减少 .     

高免蛋黄抗体中和雏鸭肝炎病毒(DHV)的效价测定

用鸭胚测定半数致死量并进行中和试验，测定了用雏鸭肝炎病毒(Ⅰ型)免疫蛋鸭收获的鸭蛋所制成的蛋黄抗体的滴度．结果表明，雏鸭肝炎病毒(Ⅰ型)的半数致死量为3．50，该毒株的高免蛋黄抗体以1：532稀释可保护50％的鸭胚免于死亡；病毒对照组全部死亡；空白对照组全部存活．该雏鸭病毒性肝炎高免蛋黄抗体滴度较高，可用于预防和治疗雏鸭病毒性肝炎。     

鸡卵黄免疫球蛋白的嗜硫性色谱一步分离纯化

采用重力沉降法对卵黄液进行脱脂预处理 ,利用嗜硫性色谱 ,实现鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的一步分离纯化 ,蛋白质的回收率高达 91% .鸡卵黄免疫球蛋白IgY经SDS -PAGE检测为电泳纯 ,活性回收率达 70 %以上     

拟穴青蟹GnRH-R的免疫识别

促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)对生殖具有重要的调控作用.迄今无脊椎动物GnRH及GnRH-R的研究尚少.本研究采用兔抗人GnRH-R、兔抗果蝇GnRH-R和兔抗海鞘GnRH-R的抗体,应用免疫印迹和免疫共沉淀技术对拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)GnRH-R进行了免疫识别,所得结果如下:1)经免疫印迹检测,拟穴青蟹脑、胸神经团、视神经节和精巢中共有的免疫阳性条带分子质量为45~55 ku.脑和胸神经团中另有一条36 ku条带;在精巢中,兔抗人GnRH-R和兔抗果蝇GnRH-R抗体只有一条28 ku条带,而兔抗海鞘GnRH-R抗体显示有28,36和30 ku的条带.2)利用免疫共沉淀技术,分离出与GnRH-R抗体相结合的两种物质,分子质量分别为38.1和54.0 ku,分别与哺乳动物和非哺乳动物GnRH-R的分子质量接近.该发现提示拟穴青蟹体内存在GnRH-R,为深入了解甲壳动物生殖调控机理提供了理论依据.     

人A组轮状病毒结构蛋白VP7原核表达及其卵黄抗体效价的研究

为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7。将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21(DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达。通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋。用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY。进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性。结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1:100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒。     

免疫鸡群新城疫强毒感染排毒与

利用新城疫(ND)强毒感染快速检测试剂盒跟踪监测4个免疫鸡群中的个体ND强毒感染情况,并平行测定HI抗体水平,通过对个体HI抗体的消长与强毒感染及感染后带毒、排毒之间关系的分析,探讨鸡群ND免疫失败的原因和免疫鸡群发生强毒感染流行的机制. 结果表明:具有较高HI抗体水平(≥6)的鸡仍能感染强毒,个体感染强毒后一般排毒1～3周,少数鸡有间歇排毒现象;强毒一旦侵入鸡群,很可能长期传染. ND免疫失败主要是饲养管理不善和免疫程序不科学;免疫鸡群发生ND的原因主要是自然界中广泛存在ND强毒.     

一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄中IgY

报道了一步洗脱离子交换色谱法分离纯化蛋黄水溶性组分 (WSF)中IgY的新方法 .通过将含IgY的WSF用pH7.0磷酸盐缓冲液 (PBS)调整至盐浓度为 0 .0 75mol L ,上样到DEAEToyoprarl6 50M阴离子交换色谱柱 ,用 0 .15mol LpH7.0PBS洗脱、收集 ,再经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一组分 .分离方法简单、分离纯化效果好 ,总蛋白回收率达 93%以上     

鸡传染性支气管炎病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

[目的]建立一种快速、灵敏的胶体金免疫层析法(Colloidal-gold immunochromatography assay),用以检测禽类早期感染鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)和监测IBV疫苗接种免疫水平.[方法]将重组IBV核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白包被在在试纸条检测线,羊抗兔IgG包被在试纸条控制线,用胶体金-兔抗鸡IgG偶联物作为示踪剂,检测血清中IBV抗体.[结果]制备所得的胶体金免疫层析试纸条与IBV抗体阳性血清反应呈阳性,与鸡新城疫病毒抗体阳性血清、鸡传染性法氏囊病毒抗体阳性血清、鸡毒霉形体抗体阳性血清和SPF标准鸡血清未发生交叉反应;当IBV抗体阳性血清以1:35比例稀释后,依然可以用该试纸条检出;该试纸条在60 d的保存期内重复性良好;以从不同养殖场采集到的鸡血清样本作为测试对象,比较该试纸条和进口 ELISA试剂盒的检测结果,两者符合率为97.44％.[结论]成功制备了检测耗时短、检测限低、特异性强、稳定性好的IBV抗体检测胶体金免疫层析试纸条,为鸡传染性支气管炎的早期诊断以及免疫监测提供了简便高效的技术方法.