宁夏枸杞愈伤组织器官发生和体细胞胚发生过程中过氧化物酶和酸性磷酸酶同工酶的研究

利用已建立的宁夏枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）叶愈伤组织器官发生和体细胞胚发生体系,比较研究了两条离体再生途径早期阶段愈伤组织的生长特性、过氧化物酶（ＰＯＤ）和酸性磷酸酶同工酶的活性及酶谱的变化。结果表明：（１）与继代愈伤组织的“Ｓ”形生长曲线不同,器官发生和体细胞胚发生过程的愈伤组织生长延迟期不明显,且第３ｄ后一直处于指数生长期,培养后期器官发生的愈伤组织生长速率快于体细胞胚发生;     

枸杞体细胞胚高频发生体系的建立

实验以枸杞种子为材料,培育成无菌苗后,取叶片和下胚轴进行诱导愈伤组织,在含有2,4-D的MS培养基上继代培养并诱导体细胞胚发生.通过从不同时期的胚性愈伤组织中剥离不同时期的体细胞胚,对它们进行形态学观察和发生频率统计,进而研究不同枸杞品种、2,4-D质量浓度、继代培养次数、不同部位和温度对枸杞体细胞胚发生的影响.结果表明:在含有0.2 mg/L2,4-D的MS培养基上,继代3次的愈伤组织经诱导分化体细胞胚可达496个/g;同时还探讨了枸杞体细胞胚高频发生再生体系建立的关键影响因素,为体细胞胚发生机理的研究和应用提供依据.     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

紫叶酢浆草体细胞胚诱导和发育条件研究

本文通过组织培养方法,探讨生长素和细胞分裂素在紫叶酢浆草体细胞胚诱导和发育过程中的作用。结果表明0.5mg/LNAA是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度,添加一定比例的6-BA可有效促进体细胞胚的发生;在附加激素浓度分别低于0.1mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的MS培养基上,体细胞胚能发育成完整的植株。因此,一定浓度的生长素是诱导紫叶酢浆草胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起增效作用。     

小麦体细胞胚胎发生的细胞组织学研究

以小麦的幼穗为外植体，接种于Ｎ６Ｂ５ＭｓＩ培养基上，３０ｄ后可形成大量愈伤组织．该愈伤组织继代１次后即产生淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织和白色致密状的非胚性愈伤组织．将此两种愈伤组织分别转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基上，２５ｄ后胚性愈伤组织分化形成大量体细胞胚．本实验从外植体接种后的０～２５ｄ及胚性愈伤组织转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基后的０～２６ｄ各分期取样固定，切片观察表明：小麦的幼穗诱导体细胞胚亦为间接发生，且多为外起源．但体细胞胚的发生既有来自于单个胚性细胞的，也有可能来自于多个胚性细胞或分生细胞团，经细胞分裂和分化发育而形成体细胞胚     

植物体细胞胚发生的同步控制：I 枸杞细胞悬浮培养系…

以枸杞幼茎和叶片为外植体，诱导出胚性愈伤组织。经振荡悬浮培养、过筛、分离得到单细胞和细胞聚集体悬浮液。适当降低大量元素浓度有利于细胞生长。生长曲线表明，悬浮培养第５天和第８天的细胞曲线较平缓且生长良好，可用于体细胞胚的同步化控制研究。     

水仙胚性愈伤的获得及农杆菌介导GUS基因的遗传转化

用正交实验设计对前期影响水仙胚性愈伤诱导和分化关联性大的因素进行综合分析,结果显示,培养基类型、激素及处理方式、不同添加物等对水仙外植体胚性愈伤诱导及分化的影响是基于培养基的多因素协同效应。水仙适宜胚性愈伤诱导培养基是:改良MB+NAA(0.2 mg/L)+6BA(2 mg/L)+ABA (2 mg/L)+AgNO3(5 mg/L);适宜的分化培养基是：改良N6+2,4D(0.5 mg/L)+6BA(2.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)+ABA(2 mg/L)。实验中观察到水仙体细胞胚的发生,在胚性愈伤诱导和分化体系优化基础上实现农杆菌介导GUS基因转化,稳定表达抗性愈伤GUS染色显示最佳胚性愈伤诱导培养基能促进水仙外植体感受态的形成,有利于外源基因的接受,PCR检测表明实验中获得3株转GUS基因阳性植株。     

龙眼不同愈伤组织培养方法的探讨及细胞观察

试验中以龙眼"红核子"品种胚性愈伤组织LC2细胞系为材料,研究不同条件对龙眼胚性愈伤组织生长的影响以及龙眼非胚性愈伤组织培养体系的建立,并通过显微镜观察比较龙眼胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织的形态学差异。试验结果表明,高9cm、直径6cm、瓶口内径5cm的玻璃培养瓶在接种量约为30mg/瓶时龙眼胚性愈伤组织生长最好;龙眼非胚性愈伤组织以MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+活性炭0.5 mg/L培养效果最好;细胞观察表明,龙眼胚性愈伤组织较非胚性愈伤组织细胞更规则,有更多的内含物。     

楸树体细胞胚胎发生的研究

以楸树近成熟种子培养无菌苗,以无菌苗子叶和下胚轴为外植体进行体细胞胚胎发生研究,观察了体细胞胚胎的发育过程,分析了不同生长调节物质对楸树体胚发生的影响。结果表明：各培养基均能诱导出愈伤组织;1/2MS+0.01 mg/L NAA+1.00 mg/L 6-BA可调整愈伤至胚性愈伤,是体细胞胚胎诱导频率最高的培养基;带少量愈伤的体胚可在1/2MS0和1/2MS+1.00 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA的培养基上增殖,且增殖系数较大。     

植物体细胞胚发生的同步控制──Ⅰ枸杞细胞悬浮培养系的建立

以枸杞幼茎和叶片为外植体，诱导出胚性愈伤组织。经振荡悬浮培养、过筛、分离得到单细胞和细胞聚集体悬浮液；适当降低大量元素浓度有利于细胞生长。生长曲线表明，悬浮培养第５天和第８天的细胞曲线较平缓且生长良好，可用于体细胞胚的同步化控制研究。     

5种碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响

就5种碳源对柑橘愈伤组织生长及其体细胞胚胎发生能力的影响进行了研究.结果表明:蔗糖和葡萄糖有利于柑橘愈伤组织生长,乳塘和甘油对柑橘愈伤组织的生长影响较小,而可溶性淀粉不利于柑橘愈伤组织的生长.不同碳源对具有体细胞胚胎发生能力的柑橘愈伤组织的影响各异,但对于失去再生能力的柑橘愈伤组织而言,不同碳源对其体细胞胚胎发生不起作用.     

小冠花高效体细胞胚胎发生与植株再生的研究

目的建立小冠花稳定高效体细胞胚胎植株再生体系。方法采用植物离体组织培养技术,通过优化外植体,基本培养基及其激素组合,提高体细胞胚发生和植株再生频率。结果子叶外植体在附加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L NAA,0.5mg/L KT和100mg/L脯氨酸的MSB培养基上35d100%形成体细胞胚,产生体细胞胚数量达625个/g,在MS KT 1.0mg/L IBA 0.1mg/L 脯氨酸300 mg/L培养基上转换成完整植株的平均数为21棵/g。再生植株移栽成活率为80%,其形态特征和生长习性未见变异。外源激素是体细胞胚胎诱导所必需的,2,4-D是其中最关键的一种。结论建立了小冠花高频稳定高效体细胞胚胎发生和植株再生体系。     

普通油茶体胚再生体系研究

为构建农杆菌介导的油茶遗传转化受体系统,选择普通油茶‘长林'4号、53号和166号的幼胚为外植体材料,进行多因素多水平的组织培养试验。结果表明:培养基的pH对愈伤组织诱导率影响不显著,愈伤组织的诱导率受油茶品种影响极显著; ‘长林'53号的幼胚极易实现胚性愈伤组织诱导和完整植株再生,MS培养基是最佳培养基,2,4-D和TDZ为幼胚较敏感的植物激素,对愈伤组织诱导影响最大; 当MS+2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ处理时,‘长林'53号体胚诱导率为98%; MS+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+500 mg/L CH处理时,‘长林'53号体胚诱导率为89.6%。在不同2,4-D、KT、TDZ和添加物水平的L₉(3⁴)正交试验中,除3个处理外,其他处理组合的‘长林'53号体胚诱导率都达到100%。已分化的胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上,可以实现胚状体的萌发、生长及完整植株再生。     

茉莉酸甲酯对杂交鹅掌楸体胚发育的影响

【目的】探讨作为植物生长调节剂的茉莉酸甲酯(MeJA)对杂交鹅掌楸体胚发育的影响,为进一步提高杂交鹅掌楸体胚发生效率奠定基础。【方法】在已建立的杂交鹅掌楸未成熟胚体细胞发生体系的基础上,选用杂交鹅掌楸3种基因型C138、233012、253010为材料,分别添加5种浓度的茉莉酸甲酯,测定杂交鹅掌楸在添加不同浓度茉莉酸甲酯条件下的体胚发生率、成熟率、畸形胚发生率,以及再生植株率。【结果】在体胚诱导培养基中添加不同浓度的MeJA可以显著影响杂交鹅掌楸体胚发生效率,且随着MeJA浓度的增加,体胚发生率和成熟率逐渐升高,畸形胚发生率逐渐降低,而当MeJA浓度超过一定值后,体胚发生率和成熟率呈现下降趋势,畸形胚发生率也逐渐升高。杂交鹅掌楸3种基因型体胚发生率和成熟率从高到低的次序为233012、C138、253010。脱落酸(ABA)能够增强MeJA的上述效应。在体胚苗的生长阶段,浓度逐渐升高的MeJA限制了根的生长,但ABA不能改变该效应。【结论】添加1 μmol/L MeJA和2 mg/L ABA时杂交鹅掌楸体胚诱导效果最佳,此时体胚发生率和体胚成熟率相对较高,体胚畸形率最低。     

裸燕麦永红492栽培种(Avena nuda cv.yong hong 492)的体细胞胚胎发生

以裸燕麦永红492栽培种的三个发育时期的茎尖为外植体,研究发育时期、基本培养基组成(MS,B5,N6)、激素、肌醇、含氮化合物及渗透势对体细胞胚胎发生及小植株分化的影响。发现营养生长锥时期是体细胞胚胎发生最好的实验材料;2,4-D是诱导愈伤组织必不可少的因素,6—BA对体细胞胚胎发生没什么影响;往培养基中加入适量的肌醇和含氮化合物以及适当地降低培养基的渗透势均有利于体细胞胚胎发生及小植株形成。在液体培养中,发现培养基中古有2,4-D比无2,4-D更有利于胚状体发生     

镉对匍匐翦股颖成熟胚愈伤组织诱导及再生的影响

研究了不同浓度的镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织形成、生长和植株再生的影响. 结果表明: 当培养基中镉离子浓度在2.50 mg/L 以下时, 愈伤组织的诱导频率高于对照, 并在浓度为2.50 mg/L 时高达83.3%, 说明低浓度镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织的形成可能具有刺激效应; 随着镉离子浓度的进一步增加,  愈伤组织的诱导频率明显下降, 并在浓度大于50.00 mg/L 时完全抑制了愈伤组织的形成; 在愈伤组织生长初期(0~30 d), 镉离子浓度为12.50 mg/L 时, 愈伤组织生长形态最大, 随着愈伤组织继续生长(30~45 d), 低浓度(2.50 mg/L)的镉离子对愈伤组织生长的刺激效应强于更高浓度. 在植株再生过程中, 当镉离子浓度为1.25 mg/L 时的效果最佳, 再生苗生长最好.