三氧化二砷对肝癌BEL-7402细胞生长及端粒酶活性的影响

目的：观察不同浓度三氧化二砷作用不同时间对肝癌BEL—7402细胞生长及端粒酶活性的影响并探讨其作用机理。方法：应用不同浓度三氧化二砷作用于肝癌细胞系BEL—7402不同时间后，观察肝癌细胞的存活；用端粒酶检测试剂盒检测端粒酶活性的变化。结果：三氧化二砷可显抑制肝癌细胞系BEL—7402的生长；经三氧化二砷作用后肝癌细胞端粒酶活性下降；抑制作用与时间、剂量有关。结论：三氧化二砷可明显抑制肝癌细胞系BEL—7402的生长，其机理可能是降低细胞端粒酶活性和其他的机制。     

三氧化二砷抑制肝癌细胞端粒酶活性的实验研究

目的：观察三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721端粒酶活性的影响。方法：应用端粒酶多聚酶联反应一酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法，检测三氧化二砷作用后，肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶活性的变化并比较两种细胞端粒酶对三氧化二砷敏感性的差异。结果：0．25～2．00μmol／L三氧化二砷(24～96h)可抑制肝癌细胞系BFL-7402的端粒酶活性，抑制作用与时间、剂量呈依赖性关系；0．25～0．50μmol／L三氧化二砷对SMMC-7721细胞端粒酶活性没有影响(96h以内)，1．00～2．00μmol/L三氧化二砷可抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性(4H8～96h)，有时间、剂量依赖关系。结论：三氧化二砷可以抑制肝癌细胞系BEL-7402和SMMC-7721细胞端粒酶的活性；BEL-7402细胞端粒酶对三氧化二砷的敏感性较SMMC-7721细胞端粒酶高。     

人肝癌HepG2细胞异质性亚系的建立及生物学行为初探

目的：从人肝癌细胞株HepG2母系克隆分离异质性亚系，探讨肝癌异质性机理。方法：应用有限稀释法对培养人肝癌细胞株HepG2进行单细胞克隆分离异质性亚系，并应用细胞计数法、流式细胞仪检测其细胞周期和DNA含量，MTT法检测其对不同抗癌药物敏感性，同时应用裸鼠脾种植肝转移在体实验模型探讨其生物学行为的差异。结果：分离到HepG2—D3及HepG2—F4两个细胞亚系。HepG2—F4亚系细胞呈长梭形，体外增殖能力强，但脾脏内种植后不成瘤，不转移(0／10)；HepG2—D3亚系细胞呈多角形、多突起，脾脏内种植成瘤率高(10／10)，并在肝脏形成广泛转移(10／10)。结论：从人肝癌细胞株HepG2母系成功分离建立了两个异质性细胞亚系，两在形态学、增殖能力及其对不同抗癌药物敏感性、成瘤和转移能力方面均存在差异，该亚系可为进一步研究肝癌异质性尤其是转移的确切机制提供良好的素材。     

小鼠肺腺癌细胞系（LA—759）高,低转移亚系染色体核型比…

对小鼠肺腺癌细胞系（ＬＡ－７９５）高、低转移亚系（ＬＡ－７９５－Ｃ６和ＬＡ－７９５－Ｃ７）体外培养第２０及３０代细胞染色体Ｇ显带核型进行比较，结果高转移细胞染色体众数较低转移亚系细胞具有不稳定的特点，表明转移潜的差异和遗传物质的稳定程度密切相关。     

TIMP-1对肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制

构建含人组织金属蛋白酶抑制TIMP1基因的表达载体，以磷酸钙沉淀法转染人肝癌细胞系^1BEL－7402，研究过表达TIMP1对肝癌细胞生长的影响，本研究首先从正常流产胎儿组织中提取总RNA，通过RT－PCR扩增获得TIMP1基因，并克隆到pcDNA6表达载体中，经酶切鉴定，序列测定结果正确后，转染入肝癌细胞系BEL－7402，采用MTT（四甲偶氮唑盐微量酶反应比色法）、细胞生长曲线等方法，经数据统计分析发现：TIMP1过表达能够抑制肝癌细胞BEL－7402的增殖。     

小鼠肺腺癌细胞系（LA－795）高、低转移亚系染色体核型比较研究

对小鼠肺腺癌细胞系（ＬＡ－７９５）高、低转移亚系（ＬＡ－７９５－Ｃ＿６和ＬＡ－７９５－Ｃ＿７）体外培养第２０及３０代细胞染色体Ｇ显带核型进行比较，结果高转移亚系细胞染色体众数较低转移亚系细胞具有不稳定性的特点，表明转移潜能的差异和遗传物质的稳定程度密切相关．高、低转移亚系出现相同及不同的标志染色体和异常染色体，其中，高转移亚系出现标志染色体８种及ｄｅｌ（８）ｑ￣（ｔｅｒ），ｄｅｌ（１２）ｑ￣（ｔｅｒ），１１Ｐ￣＋，１３Ｐ￣＋，ｔｒｉ（２Ｍ４），ｄｉｃ（２Ｍ５），Ｍ６：７ｑ￣＋？；而低转移潜能亚系出现标志染色体１２种及ｄｅｌ（８）ｑ￣（ｔｅｒ），ｄｅｌ（１２）ｑ￣（ｔｅｒ），ｒ（１５），ｄｉｃ（Ｍ６；２Ｍ７），Ｍ８：７ｑ￣＿？ｔ（２：２），ｔ（２：１５），ｔ（１５：Ｍ１０），ｔ（１５：Ｍ１１），ｔ（５：Ｍ１２）．表明来源于同一母系而转移潜能不同的亚系染色体核型具有本质上的差异，转移潜能与其密切相关．另外，分析低转移亚系出现ｔ（２：２）；ｔ（Ｃ２：１５）ｔ（１５：Ｍ１０）；ｔ（１５：Ｍ１１）；　ｔ（５：Ｍ１２）；ｒ（１５）等现象，推测高、低转移潜能亚系细胞可能存在本身Ｈ－２系统及ＣＤ４４抗元表达的差异，这很可能     

MTA1基因在肝癌细胞系HepG_2及其异质性亚系中表达的差异性

目的:探讨MTA1基因在肝癌细胞系HepG2及其异质性亚系中的表达水平.方法:采用半定量RT-PCR、荧光定量RT-PCR的方法检测3种细胞中MTA1基因的表达差异;Western blotting检测蛋白水平的表达差异;用细胞免疫组织化学方法观察MTA1蛋白的细胞定位.结果:HepG2-H和HepG2细胞株的mRNA和蛋白表达水平均高于HepG2-L细胞株;细胞免疫组化显示3株细胞的MTA1蛋白均定位于细胞核和细胞浆,以细胞核为主.结论:MTA1基因在具有不同转移潜能的肝癌细胞亚系HepG2-H、HepG2-L中的表达具有明显差异.     

Egfl3在肝癌组织及细胞系中的表达水平及意义

目的:研究表皮细胞生长因子3(Egfl3)在肝癌组织及细胞系中的表达及其与肝癌病理临床特性的相关性.方法:采用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测Egfl3基因在20对肝癌及相应癌旁肝组织,5株迁移、侵袭潜能不同的肝癌细胞系(SMMC-7721、BEL-7402、Huh-7、HepG2、Hep3B)和正常肝细胞系HL-7702中的表达水平;采用免疫组化检测Egfl3蛋白在40对肝癌及相应癌旁肝组织石蜡切片中的表达水平并分析其表达与肝癌临床病理特性的相关性.结果:RT-qPCR结果显示,Egfl3基因在20对肝癌组织中的表达水平(0.77±0.15)显著高于相应的癌旁肝组织(0.25±0.10)(t=2.904,P=0.006).Egfl3在5株肝癌细胞系中的表达水平也均明显高于正常肝细胞系HL-7702(P<0.05),且在侵袭迁移潜能中等的肝癌细胞系SMMC-7721中的表达高于侵袭迁移潜能较低的肝癌细胞系Bel-7402和Huh-7,后者又高于侵袭迁移潜能最低的肝癌细胞系HepG2和Hep3B.免疫组化结果显示Egfl3蛋白大多数表达于肝癌细胞或正常肝细胞的胞质内,并在62.5％(25/40)的肝癌组织中的表达显著高于相应的癌旁肝组织,且其表达与肝癌的TNM分期密切相关(P=0.04).结论:Egfl3在肝癌组织及细胞系中的表达显著上调,且其上调与肝癌的TNM分期及肝癌细胞的侵袭迁移潜能密切相关.     

重组Nkx2．5腺病毒的构建及心肌细胞感染实验

利用AdEasy腺病毒表达系统构建了Nkx2．5重组腺病毒．Nkx2．5基因克隆入pAdTrackcmv质粒,pAdTtrackcmv—Nkx2．5经Pme I线性化后转化含pAdEasy-1的BJ5183菌进行同源重组,以构建pAdEsay-Nkx2．5重组质粒．pAdEsay—Nkx2．5转染293A细胞进行病毒包装．以Ad-Nkx2．5重组腺病毒感染Hela及乳鼠心肌细胞,检测了Nkx2．5蛋白表达及对下游ANF和β-MHC基因的表达调控;并采用感染病毒的H9c2心肌细胞经H2O2处理建立细胞凋亡模型,采用噻唑蓝法和荧光染色法检测了细胞存活率和凋亡细胞的形态变化．结果显示,Nkx2．5过表达能抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡．     

利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达

 为探究纺锤体蛋白INMAP 的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用,制备INMAP 多克隆抗体.利用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导His-INMAP 融合蛋白进行原核表达,SDS-PAGE 及免疫印迹检测蛋白表达.4.0 mol/L 尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白,镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度.以所获抗原免疫4 只Balb/c 小鼠,收集心脏抗血清.以纯化前、后的原核表达产物作为抗原,检测INMAP 多克隆抗体的特异性.通过免疫印迹分析INMAP 在正常肝细胞系L-02 及5个肝癌细胞系(PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721 和BEL-7402)中的表达差异.结果显示,His-INMAP 融合蛋白主要以包涵体形式存在,经4.0 mol/L 尿素处理可获得可溶性目的蛋白,且纯化后的抗原纯度较高(94.1%).INMAP 多克隆抗体能与INMAP 抗原特异结合.INMAP 在6 种肝细胞中具有多态性,除PLC 外,在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调.本研究制备的INMAP 多克隆抗体特异性高,为INMAP 基因功能的进一步研究奠定了基础.     

敬钊缨毛蛛蛛毒对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖、细胞周期和C-myc蛋白的影响

通过MTT方法可知敬钊缨毛蛛蛛毒对BEL 7402细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.05),时效和量效关系良好.IC50为18mg/L.敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制BEL 7402细胞DNA的合成.流式细胞仪检测发现经过蛛毒作用的BEL 7402细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞在G0/G1期.WesternBlot方法进一步检测到蛛毒作用BEL 7402细胞72h后,C myc蛋白表达减弱.实验结果表明,敬钊缨毛蛛蛛毒可以抑制人肝癌细胞BEL 7402的增殖和DNA的合成,其药理作用机理可能除了诱导凋亡外主要是使BEL 7402细胞周期相关蛋白C myc表达减弱,导致细胞周期的变化.     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

中药柴胡提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞内VCR蓄积的影响

目的　测定中药柴胡(BupleurunChineseDC,BCDC)提取物对人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR蓄积的影响,以探索柴胡逆转BEL 7402细胞多药耐药的机制.方法　高效液相色谱法测定BCDC作用于BEL 7402后细胞内VCR蓄积情况的变化.结果　柴胡可使人肝癌细胞BEL 7402细胞内VCR浓度升高(P<0.01).结论　柴胡可以增加VCR在BEL 7402细胞内的积聚浓度,部分逆转BEL 7402细胞的MDR.     

人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型的建立

目的　建立成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。方法　初代移植后 ,通过皮下埋块法进行裸鼠体内连续传代移植 ,并对移植瘤的生长、组织形态和超微结构、染色体核型进行观察和检测。结果　通过连续传代移植建立了成瘤稳定、潜伏期短的人小细胞肺癌NCI_H4 4 6细胞裸鼠移植瘤模型。移植瘤的组织形态和超微结构特点符合NCI_H4 4 6细胞特点 ,染色体核型属人类染色体     

人小肠癌腹水转移细胞系HIC的建立及其生物学特征

建立了从人小肠癌腹水中分离培养的细胞系ＨＩＣ，目前已传３００余代，存活４２个月，并冻存３ａ余，单层培养细胞最短倍增时间１４ｈ，细胞具有未分化癌细胞特征，在裸鼠体内成瘤并具有非定点转移能力，该细胞系的染色体组型为亚三倍体，众数５３条。     

培养肝癌细胞有丝分裂中的动态

<正> 一、实验目的:观察肝癌细胞有丝分裂中的细胞运动和归转并探讨其机制和生物学意义。二、材料与方法:使用 BEL—7402肝癌细胞系培养于含20%小牛血清的199培养基中。原瓶传代后48小时,在倒装显微镜直视下按水平方向摇瓶,得到基本上同步于 M 期的肝癌细胞,转接到特制的双盖片培养瓶内(另有短文介绍这种培养瓶),置 Olympus(IMT型)倒置显微镜下保温35℃作追踪观察,并作不定时摄影记录。     

腺病毒介导的wtp53基因对五种癌细胞系的生长抑制作用

构建重组腺病毒载体 Ad CMVp53 ,将 wtp53分别导入 PG(人肺巨细胞瘤细胞 )、CAE(人结肠癌细胞 )、HCT(人结肠癌细胞 )、He La(人宫颈癌细胞 )及 BEL74 0 2 (人肝癌细胞 )五种癌细胞中 ,测定 Ad CMVp53对癌细胞的半抑制浓度 ( IC5 0 )和细胞生长曲线 ,分析不同组织癌细胞对 Ad CMVp53的敏感程度 .结果表明 ,Ad CMVp53对癌细胞具有与病毒剂量相关的明显致死作用 ,但不同细胞对腺病毒剂量的敏感程度有差异 ,PG、CAE和BEL74 0 2三个细胞系较为敏感 ,其 IC5 0 低于 1 5MOI(重复感染率 ,multipicity of infection) ;而 He La和 HCT细胞需要较高的病毒剂量 ,IC5 0 分别为 1 0 0 MOI和 80 0 MOI.     

Suppression of tumorigenicity in human colon carcinoma cells by introduction of normal chromosome 5 or 18.

Development of colon carcinomas can be associated with allelic deletions on several chromosomes, including 5q and 18q. The APC gene on 5q and the DCC gene on 18q have been identified as potential tumour suppressor genes, whose suppression contributes to colon carcinogenesis. To investigate the role of genes in these deleted regions, we have now introduced a single normal human chromosome into a human colon carcinoma cell line, COKFu, through microcell hybridization. Several clones of hybrid cells containing normal chromosome 5, and others containing normal chromosome 18, were obtained. The morphology of the hybrid cells was markedly altered: the hybrids with chromosome 5 exhibited a closely packed polygonal morphology, and the hybrid cells with chromosome 18 were flattened. The cloning efficiency of the hybrid cells in soft agar was reduced from 0.46 to 0% of that of the parental carcinoma cells, and the tumorigenicity of these hybrid cells in athymic nude mice was completely suppressed. The growth properties of the hybrid cells with chromosome 11 were not substantially changed. These results strongly suggest that the genes on normal chromosome 5 and 18 function as tumour suppressors in colon carcinogenesis.     

人小肠癌腹水转移细胞的无血清建系培养

人小肠癌腹水转移细胞系ＨＩＣ的无血清培养亚系经过３ａ的传代培养建立成功，命名为ＨＩＣＳＦ。该细胞仍保留其母系ＨＩＣ一些属性：亚三倍体组型，众数５３条；增殖活跃，倍增时间１６ｈ；异体动物移植致瘤，具有活跃的血管生成行为和较高的转移行为。由于培养条件的变化，该细胞也获得了一些新的特征，ＨＩＣＳＦ细胞属弱贴附细胞，形态多变。贴附细胞主要靠树枝状突起贴附于培养介质，突起内微管、微丝相对较多，细胞骨架总体上呈无序排列。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明ＨＩＣＳＦ细胞分泌多种蛋白质进入培养上清中，培养上清的层析分离表明，至少存在分子质量分别为９０，７０，４５和１０ｋｕ４种促生长活性因子，同时也存在分子质量分别为６０和３０ｋｕ２种生长抑制活性因子。这些生长因子共同调控着ＨＩＣＳＦ细胞的自主生长。     

Investigation of hrDNA targeting vector-mediated tumor-specific suicide gene therapy for hepatocellular carcinoma

Vectors pose most pivotal problem of gene therapy[1]. Because of the high transfection efficiency both in vitro and in vivo, the viral vector has been employed in 70% clinical trials of gene therapy (http://www.wiley.co.uk/ genmed/clinical). However, thei…