ELISA 抗原检测与荧光 RT-PCR快速诊断猪瘟的比较研究

为找出临床上猪瘟快速、有效的诊断方法,对荣昌县2个猪场出现的40头临床症状疑似猪瘟的病猪进行病理剖检,结果证实有8头病猪出现猪瘟典型症状.采集40头病猪的血样,进行ELISA猪瘟抗原检测和荧光RTPCR猪瘟核酸检测,结果显示ELISA抗原检测检出7份血样为猪瘟抗原阳性,阳性检出率为87.5%;荧光RTPCR核酸检测出4份血样为阳性,阳性检出率为50%.该结果证实,ELISA猪瘟抗原检测的阳性检出率比荧光RT-PCR核酸检测更高,建议临床上采用ELISA抗原检测的方法进行猪瘟的快速诊断.     

NC膜富集法、实时荧光PCR法、培养法检测志贺菌的比较研究

观察、比较硝酸纤维素膜富集法、实时荧光PCR法及传统培养法对志贺菌阳性检出率的不同.对137例临床样本分别采用硝酸纤维素膜富集法、实时荧光PCR法、传统培养法进行检测.3种方法检测结果阳性率分别为13.14%、20.44%、8.03%.硝酸纤维素膜富集法是在培养法基础上进行了一些改进,采用"先分离再培养"的方法,与传统培养法比较,检测结果阳性率明显提高,两者比较,差异有统计学意义(P0.05).另一方面,硝酸纤维素膜富集法耗时较短,特异性高,成本低并且无需特殊设备,特别适宜基层检测单位和健康筛查单位使用.实时荧光PCR法检测结果阳性率最高,但同时假阳性率也最高.传统培养法检测结果阳性率最低,但现今在临床工作中仍以传统培养法作为志贺菌检测的标准方法.研究结果显示,硝酸纤维素膜富集法检测志贺菌,明显提高了检测结果的阳性率,且特异性高、耗时较短,具有很好的临床应用前景.     

实时荧光定量RT-PCR检测糖皮质激素α-受体mRNA表达水平方法的建立

建立用荧光定量RT-PCR的方法检测人糖皮质激素α-受体(GR-α)mRNA水平的标准曲线.根据人糖皮质激素α-受体mRNA序列(GeneBank No. NM_000176)设计引物,反转录出cDNA,再插入到PMD18-T载体中.再根据cDNA设计引物和探针,采用TaqMan探针荧光定量RT-PcR的检测方法,构建人GR-α基因表达量的标准曲线.由PMD18-T-GR-α所构建的标准曲线线性关系良好(反应体系中含1×101-1×105拷贝数的人GR-α基因分子时,扩增反应Ct值与拷贝数的对数呈较好的线性关系)、灵敏度高(可检测出低于10个拷贝/μL的样品)、特异性强、准确可靠.     

金属卟啉标记物在化学发光免疫检测中优势的理论分析

为阐述金属卟啉配合物替代辣根过氧化酶作为标记物进行化学发光免疫检测的优势,文章构建了简单的化学发光免疫检测模型,分析了化学发光免疫反应中的平衡方程.结果表明:金属卟啉配合物作为标记物在理论上可以提高信噪比2个数量级以上;与酶标法相比,高纯度的金属卟啉标记抗体大大降低了非特异吸附本底信号和检测体系的系统误差,极大提高了化...     

金属卟啉标记物在化学发光免疫检测中优势的理论分析

为阐述金属卟啉配合物替代辣根过氧化酶作为标记物进行化学发光免疫检测的优势,文章构建了简单的化学发光免疫检测模型,分析了化学发光免疫反应中的平衡方程.结果表明:金属卟啉配合物作为标记物在理论上可以提高信噪比2个数量级以上;与酶标法相比,高纯度的金属卟啉标记抗体大大降低了非特异吸附本底信号和检测体系的系统误差,极大提高了化学发光免疫检测的灵敏度和准确度.     

实时荧光PCR方法检测含麸质的谷类产品管家基因

采用实时荧光PCR方法鉴别含麸质的谷类成分,选择大麦Hordein管家基因、小麦Gliadin管家基因、黑麦Sec1管家基因和燕麦Avenin管家基因作为物种鉴定的特异性标记基因,设计适合于Taqman探针实时荧光PCR扩增的引物和探针,从而达到鉴别检测食品中含麸质的谷类大麦、小麦、黑麦、燕麦成分的目的.特异性实验结果表明,分别采用大麦、小麦、黑麦、燕麦的引物和探针进行实时PCR扩增时,经检测25种样品,只有相对应的阳性物种样品产生荧光信号,其余非该物种样品均不产生荧光信号,表现出了很高的物种鉴定特异性.以大麦为例的灵敏性实验结果表明,原料样品检测灵敏性可达到0.01%,加工后的食品则可达到0.05%,符合食品成分痕量检测要求.     

RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA的研究

AFPmRNA是成人肝细胞癌变后AFP基因转录产物.RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA对原发性肝癌的早期诊断、鉴别诊断及预测转移均有重要意义.探讨了AFPmRNA的基因特点、RT-PCR检测方法及AFPmRNA的临床检测意义.     

用化学发光法检测脂膜的过氧化 Ⅰ.脂质体的自发的和诱发的化学发光

制备了多种类型的脂质体,用化学发光法去测量其上的脂膜过氧化和自由基反应。试验表明:脂质体脂膜的过氧化与介质的温度、pH、pO_2及脂质体的浓度有关,试验过程中应该控制这些因素。用细胞色素C和H_2O_2诱发扩增化学发光时,还应控制反应的时间。脂质体接近于生物膜,是研究脂质过氧化的好材料。用化学发光法测量脂质过氧化和自由基反应,具有灵敏、快速、简便的优点。     

实时荧光定量PCR用于新型冠状病毒检测的效果分析

分析实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)用于新型冠状病毒检测的效果。采集筛查2020年2月至6月疫情期间有发热症状、有湖北工作、旅居史者的咽拭子标本15650份,将新冠病毒的开放读码框1ab(ORF1ab)、核壳蛋白(N)基因等2段保守基因序列作为检测靶标,并采用实时qPCR。15650份检测标本中,阳性1例,阳性率0.0064%。疫情期间有发热症状、有湖北工作、旅居史者进行新冠病毒核酸检测极为必要,qPCR为一种新冠病毒检测的有效方法,可将咽拭子标本中的新冠病毒核酸快速高效检出,在疫情防控中发挥着重要作用。     

蓝藻Synechococcus elongatus PCC7 942荧光实时定量RT-PCR实验体系的优化

蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的报道较少.研究尝试通过对影响RNA提取质量的溶菌酶作用时间、起始细胞数量等因素,以及对影响qPCR反应特异性和重现性的c DNA模板浓度、引物浓度、引物退火温度等条件进行优化,初步建立了一套适用于S.elongatus PCC 7942的qPCR实验体系.结果表明震荡培养至OD750≈0.4时,取10 m L蓝藻细胞起始提取实验,使用3 mg/m L溶菌酶处理10 min后,再经试剂盒法提取总RNA的策略,RNA得率最高且质量最好.蓝藻的qPCR优化结果显示c DNA终质量浓度0.1μg/μL,引物终浓度4 pmol/L,并根据引物对Tm值调整退火温度是最佳反应条件.     

实时荧光定量PCR法检测环境假单胞菌属细菌丰度

应用实时荧光定量PCR法,建立了总细菌及假单胞菌属的标准曲线,并以环境样本中假单胞菌属与总细菌的比值反映其细菌丰度.应用该方法评价人工除藻反应器中组合填料、无纺布、弹性填料等介质对太湖水中溶藻细菌之一的假单胞菌属的富集情况.结果显示:该方法对总细菌的检测范围为103~108个基因拷贝/μL(R2=0.997);假单胞菌属的检测范围为1~105个基因拷贝/μL(R2=0.994).对除藻反应器溶藻细菌富集效果的评价显示,所建立的方法能有效检测反应器中填料对该类溶藻细菌的富集程度.初步证明所建立的方法可有效定量假单胞菌属在环境样本中的丰度.     

2株甲型肝炎病毒蛋白酶2A核苷酸序列的测定与比较

从甲型肝炎病毒２个不同株感染的ＫＭＢ１７细胞中提取总ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ特异性扩增出此２毒株病毒蛋白２Ａ基因,将２个２Ａ基因克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定,得到２个２Ａ基因的核心苷酸序列,序列比较发现它们及与ＨＡＶ野毒株相对应序列有突变存在,Ｈ２株与ＨＭ１７５相比有一个点突变,同源性为９９．７２％;与ＨＭ１７５比较,Ｈ２株和Ｌ８株第３１９７位核苷酸均由Ａ突变为Ｇ,相应的氨基酸由丝氨酸     

化学发光法检测保健食品中SOD活性的研究

目的：建立保健食品ＳＯＤ活性检测的标准。方法：采用化学发光法测定保健食品（花粉、茶等）中ＳＯＤ活性,及其试验条件的研究。即黄嘌呤氧化酶、次黄嘌呤、鲁咪诺、温度等因素对ＳＯＤ活性测定体系的影响,进行该方法的精密度试验,其ＣＶ（％）为２．３。结果：方法重现性好,灵敏高度,操作简便,检测迅速。结论：是监测ＳＯＤ型保健食品ＳＯＤ活性的可靠方法。     

基于银纳米增强的化学发光法检测对苯二酚

在碱性条件下,银纳米(Ag NPs)对luminol-K3Fe(CN)6化学发光体系具有显著的增强作用.研究发现,对苯二酚(HQ)对luminol-K3Fe(CN)6-Ag NPs化学发光体系具有抑制作用.结合流动注射技术提出了luminol-K3Fe(CN)6-Ag NPs化学发光(FI-CL)灵敏检测HQ的新方法.结果表明,HQ的线性范围为1.0×10-10~1.0×10-7mol·L-1,检出限为3.0×10-11mol·L-1,对5.0×10-9mol·L-1的HQ溶液平行测定11次的RSD为1.4%.将提出的方法分别用于河水和自来水中HQ含量的测定,加标回收率分别为98.0%~100.8%和99.1%~100.4%.结合化学发光光谱,对银纳米增强luminol-K3Fe(CN)6化学发光体系以及HQ对该体系的抑制作用机理进行了探讨.     

化学发光分析检测抗生素残留的研究进展

评述了化学发光分析的原理及各体系在抗生素残留检测上的最新研究进展。     

应用实时荧光定量PCR方法检测实验用猫巴尔通体的感染

目的 建立高效特异的巴尔通体实时荧光定量PCR检测方法,并应用于实验用猫的微生物检测工作中。方法 针对NCBI公布的巴尔通体序列设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定;并使用该方法对142个猫样品进行检测。结果 成功建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;该方法线性范围为1.0×101 copies/μL～1.0×109 copies/μL,相关系数为0.998,检测极限达10 copies/μL;特异性结果显示所建方法具有良好的特异性,并在142份实验用猫样品中检测出阳性样品6份。结论 实时荧光定量PCR方法可用于实验用猫巴尔通体的检测工作中。     

依赖点机化学的荧光检测方法在病原微生物的免疫检测中的应用

介绍了一种新型抗体的荧光标记检测技术在病原微生物的检测中的应用.首先,以热致死的致病性大肠埃希氏菌免疫Bal B/C小鼠,收集高效价抗体并精制,然后利用6-叠氮-己酸琥珀酰亚胺酯上的琥珀酰亚胺基团将其标记于IgG游离的氨基,获得叠氮化的IgG(N3-IgG),随后通过铜离子催化4-乙炔基-N-乙基-1,8-萘酰亚胺中的炔基与N3-IgG的N3基团进行点击化学反应,使抗体具备可被观察的荧光.依据N3与炔基反应的荧光信号强度,计算N3基团标记效率,结果表明每分子IgG平均可标记6分子的N3基团.与商品化的荧光标记试剂NHS-FITC标记的抗体的比较结果表明,建立的依赖于点击化学反应的荧光抗体技术的检测灵敏度和特异性与现有的常用方法相当.最后,采用N3-IgG进行对应的致病性大肠埃希氏菌的荧光抗体染色分析,结果表明,该方法可有效用于病原微生物的检测.建立了一种新的病原微生物免疫荧光抗体分析方法,丰富了免疫学检测体系和荧光抗体检测手段.     

荧光定量RT-PCR检测脑心肌炎病毒方法的建立及初步应用

根据GenBank中公布的脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus EMCV) 3D基因保守区段设计并合成1对引物, 以提取的EMCV核酸为模板, 分别进行荧光定量RT PCR扩增, 优化反应体系及条件, 建立脑心肌炎病毒荧光定量RT PCR检测方法, 并初步运用于静注人免疫球蛋白(IVIG)纳米膜过滤工艺去除EMCV效果的验证. 结果显示该方法实验内和实验间的精密度均小于5%, 最低检测限为102 copies/ μL; 纳米膜过滤工艺可使样品中的EMCV滴度下降4Logs.     

实时荧光PCR技术检测致敏原小麦的研究

采用实时荧光PCR技术检测致敏原小麦成分.试验结果表明:采用小麦管家基因GAG56D和Wx012基因的特异性检测引物和探针进行检测时,26种样品经实时PCR扩增,只有小麦产生阳性的荧光信号,其余样品均不产生荧光信号.灵敏度试验结果表明:该方法对小麦致敏原基因的检测灵敏度较高,可达到1 mg.kg-1,符合痕量检测要求.