肌钙蛋白Ⅰ的提取纯化

心肌肌钙蛋白Ⅰ具有极强的心脏特异性，可以通过检测患者血清内心肌肌钙蛋白Ⅰ的含量来诊断急性心肌梗塞。利用肌钙蛋白Ｃ和肌钙蛋白Ⅰ在钙离子存在下具有特异性结合的性质，制成了肌钙蛋白Ｃ亲和凝胶。利用肌钙蛋白Ｃ－肌钙蛋白Ⅰ亲和层析，提取和纯化了人和牛心肌肌钙蛋白Ⅰ，由１００ｇ心肌中可以提取到６０ｍｇ，以后可用来制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ的单克隆抗体杂交瘤细胞。     

肌钙蛋白C-肌钙蛋白Ⅰ亲和层析动力学的模型

肌钙蛋白（Ｔｎ）Ｉ有着极强的心肌特异性,心肌肌钙蛋白是唯一存在于心肌细胞中的异构体,可以通过检测患者血液中的心肌ＴｎＩ含量来确诊急性心肌梗塞。根据在钙离子存在下,ＴｎＣ和ＴｎＩ特异结合的特性,可以利用亲和层析提取纯化ＴｎＩ。根据ＴｎＩ从亲和层析柱的穿透曲线,对Ａｒｎｏｌｄ等人提出的孔内扩散模型进行了分析,证明孔内扩散过程不是此亲和层析过程中的限速步骤。在缓冲液体系（ｐＨ８．０）中,提出了包括以一个正向二级、逆向一级来描述ＴｎＣ—ＴｎＩ反应速率方程,并用实验验证了该模型的正确性,从而首次阐明了ＴｎＣ—ＴｎＩ提取纯化体系的动力学机制,揭示了该过程的限速步骤为ＴｎＣ—ＴｎＩ反应过程。     

肌钙蛋白Ⅰ检测在急性心肌梗死中的应用

目的:探讨肌钙蛋白I检测在急性心肌梗死中的应用价值。方法:检测了11例AMI患者发病时肌钙蛋白I(CTnI)变化,并与CK—MB加以比较。结果:CTnI测定较心肌酶学检测有较宽的诊断时间窗,是对AMI有高敏感、高特异的生化指标。结论:急性心肌梗死(AMI)及早诊断与治疗是降低其死亡率的关键,AMI的早期诊断一直以CK—MB为“金标准”,但在AMI发作6小时内阳性率较低且对心肌特异性并非专一。     

一种定义C语言表达式的新方法

C语言具有运算符丰富,表达式灵活的特点。但是,表达式的概念没有准确的定义,给初学者造成理解上的困难。分析表达式的结构特点,发现和数理逻辑中的合式公式很相似,可以采用合式公式递归的方式对C语言的表达式进行递归定义。通过表达式的递归定义,能够准确的分析一个字符串式子是不是表达式。同时,利用这个递归定义,同时结合运算符的优先级,能够决定表达式运算过程中出栈、入栈的顺序,从而计算出表达式的值。     

肌钙蛋白的结构和功能

肌钙蛋白（troponin）在节肌肉收缩中起到了重要的作用，因此一直成为研究的热点。本文分别介绍了troponin是如何发现的，及其结构与功能．此外还简要阐述了troponin所参与的肌肉收缩的钙调节机制。     

重组人心肌肌钙蛋白Ⅰ基因工程菌的构建与表达

人心肌肌钙蛋白Ⅰ(hcTnI)是临床检测心肌损伤及预后提供诊断的生物学指标,由于来源有限,采用基因重组技术,以期获得高表达量的人心肌肌钙蛋白Ⅰ.人工合成hcTnI基因,将其插入pET-11a载体中,通过酶切鉴定正确后转入表达宿主菌BL21(DE3)中,诱导表达目的蛋白.采用蛋白免疫印迹反应(Western Blot,WB)鉴定表达目的蛋白的免疫特异性.经SDS-PAGE证实重组蛋白的相对分子质量约为2.6×104,凝胶密度扫描软件检测到目的蛋白占总蛋白比例为30.1%,WB实验验证诱导后目的蛋白特异性良好.成功构建了重组hcTnI基因在大肠杆菌表达的工程菌株,并获得表达,为制备高特异性的抗体及临床检测应用和测定标准化奠定了基础.     

人心肌肌钙蛋白I和C亚基的基因工程表达及两者的结合实验

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是检测心肌损伤的理想标志物,具有很高的特异性,在病人体内可停留较长时间．以人心肌cDNA为模板,通过PCR方法克隆了人的cTnI和cTnC基因,将cTnI和cTnC基因插入到原核表达载体pBV220中,转化E．coli DH5α菌株并诱导表达,经SDS-PAGE分析,分别发现分子质量为28ku和18ku的特异性蛋白条带．cTnI经Western blotting检测,结果与天然蛋白一致．将纯化得到的cTnI免疫小鼠后,用人天然标准抗原检测小鼠的抗血清效价在1：16000以上,并且呈高度特异性,与cTnC无交叉反应．而表达的cTnC可以在一定条件下和cTnI结合,证明2种基因工程蛋白是具有天然构象和结合功能的．cTnI和cTnC的表达及2种蛋白结合试验的研究结果为进一步研发免疫诊断试剂奠定了良好的基础．     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.     

肌钙蛋白I对小儿心肌炎诊断及与酶学对比研究

目的评估血清心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）对小儿心肌炎的诊断价值,并与肌酸激酶（CK）及其同功酶MB（CK-MB）进行对比研究．方法全自动生化分析仪对cTnⅠ,CK及CK—MB进行定量检测．结果1）心肌炎组cTnI,CK及CK-MB均明显高于正常对照组（P〈0．001）．cTnⅠ升高38例,占76％;CK升高21例,占42％;CK-MB升高25例,占50％．cTnⅠ与CK,CK-MB呈正相关关系．2）治疗2周后,cTnⅠ与对照组比较有显著性差异（P〈0．001）,CK及CK-MB与对照组无显著性差异（P〉0．05）．3）心肌炎组22例ST-T改变患儿测cTnⅠ升高20例（91％）,CK升高8例（37％）,CK-MB升高6例（27％）．结论cTnⅠ及CK,CK-MB对小儿心肌炎的诊断均较敏感,其中cTnT对心肌损害的敏感性及特异性均高于CK和CK—MB．cTnⅠ诊断时间窗宽于CK,CK-MB,特异性也高于心肌酶学检查．     

指纹图的特征增强与去伪的分级处理算法

提出了一种指纹图特征增强与去伪的分级算法．对指纹的二值图进行增强,有效减少虚假细节点的出现;在细化图上跟踪并标记脊线,去除具有连接关系的伪细节点;利用指纹对偶性除去断点等无脊线连接关系的伪细节点．实验结果表明,此算法在去除伪细节点方面具有很好的效果,达到了自动指纹身份识别系统的实时要求．     

Probing the calcium-induced conformational transition of troponin C with site-directed mutants

The contraction of skeletal muscle is regulated by calcium binding to troponin C (TnC). TnC consists of two spatially independent domains, each of which contains two metal ion binding sites. Calcium binding to the regulatory sites of the N-terminal domain triggers muscle contraction by a series of conformational changes. Site-directed mutagenesis offers a means of elucidating the links in this signal path between TnC and actin-myosin crossbridges. Such mapping is possible if the mutants shift the equilibrium between 'on' and 'off' states of the regulatory complex while maintaining the coupling between calcium binding and tension development. Candidate amino-acid residues for yielding this information would be in positions remote from the calcium-binding sites and from the site of development of tension. Analysis of the crystal structure of TnC and of the model of the calcium-activated molecule has enabled us to identify two such residues: Glu 57 and Glu 88. In separate experiments we have replaced each of these residues by lysines. The resulting reduction in calcium affinity indicates that these residues have a long-range effect on calcium binding. This result may reflect the formation of a salt bridge between positions 57 and 88 that is not present in the native molecule. Moreover, the level of tension recovery when the mutants are incorporated into muscle suggests that the interaction between TnC and other muscle components has also been altered. Thus, these residues may participate in the contraction signal transmission.     

Inhibition of mutant troponin C activity by an intra-domain disulphide bond

Triggering of contraction in striated muscles involves a conformational transition in the N-terminal domain of troponin C, the calcium-binding component of thin filaments. We have designed a mutant troponin C in which the key conformational transition and the calcium-regulatory activity are reversibly blocked by the formation of a disulphide bridge. Our results may be applicable to other proteins of the same family of calcium-binding proteins.     

香菇多糖提取技术的研究

本文综合分析了香菇在各种因素(水、酸、碱、复合酶)的影响下菌多糖的提取率,筛选出较佳的提取工艺,最大限度地保持香菇中所含有的多糖物质对人体的抗肿瘤的保健作用。     

苯乙醛的新合成方法

目的研究苯乙醛的新合成方法。方法以苯并咪唑盐和苄基氯为原料，利用苯并咪唑盐与Grignard试剂的加成．水解反应合成苯乙醛。结果苯乙醛的产率73％，产物的红外光谱以及熔点与文献报道一致。结论苯并咪唑盐与Grignard试剂的加成-水解反应为苯乙醛提供了一种简便的新合成方法。     

N-甲基邻苯二甲酰亚胺的新合成方法

研究了以苯酐与甲胺水溶液为原料合成N-甲基邻苯二甲酰亚胺(NMP),提出了一种合成NMP的新方法,并对产物进行了红外表征,结果表明产物是N-甲基邻苯二甲酰亚胺.考察了原料配比、反应温度、反应时间对产物收率的影响,得出了最佳反应条件:苯酐与甲胺的摩尔比为1∶2,反应温度为150 ℃,反应时间为4 h,收率达到85.5%.     

尿素溶液吸收法洁净CO_2气体中NO_X工艺的研究

研究CO2气体中的氮氧化物净化工艺,得到最佳条件：吸收液温度40～60℃,空塔气速5．4cm／s,填料高与塔径比9：1,瓷环填料空隙率为68％,尿素填充量为0．8倍填料高,吸收液中尿素溶液浓度不低于4．86mol／L。此方法是一种过程简单、综合利用的绿色化学工艺。     

复合地基沉降计算新方法-桩体沉降法

通过模型试验和数值模拟对复合地基进行研究,提出了桩体沉降法计算复合地基沉降的新方法.根据对不同参数(桩长、桩径、桩体模量、褥垫层厚度、褥垫层模量、加固区土体模量、下卧层土体模量)的复合地基的分析,提出了桩体沉降法的两个重要参数:桩顶应力比和桩端应力比,并推导其经验公式.通过与工程实测对比分析表明,采用桩体沉降法计算的沉降量与实测数据相吻合,可以认为是工程设计的一种可靠方法.     

戊二醛的新合成方法

目的 研究戊二醛的新合成方法。方法 以苯并咪唑盐和二卤代烷为原料，利用苯并咪唑盐与双Grignard试剂的加成-水解反应合成戊二醛。结果 戊二醛的产率73％，产物的红外光谱以及熔点与献报道一致。结论 苯并咪唑盐与双Grignard试剂的加成-水解反应为戊二醛的合成提供了一种简便的新方法。