烟草悬浮培养细胞的建立及其对机械刺激的敏感性研究

文章以幼嫩烟草茎髓为实验材料进行愈伤组织的诱导,确定了建立烟草悬浮培养细胞初期愈伤组织和液体培养基的最佳配比,以及烟草悬浮培养细胞的最佳继代量和继代时间,并以此为材料研究了烟草悬浮培养细胞对机械刺激的敏感性。     

外源基因转化烟草悬浮细胞方法的改进

烟草悬浮培养细胞作为一种重要的实验材料已有较多的研究,将外源基因通过克隆进行载体构建,转化入悬浮培养的烟草细胞并进行表达,在带有相应筛选抗性的抗生素固体培养基中进行培养,再将愈伤组织转入液体培养基中进行培养,得到转入外源基因的液体悬浮培养烟草细胞.我们通过对此法作一些改进,使其便于操作、省时,适合在一般实验室条件下进行操作,且烟草悬浮培养细胞传代培养快,取材方便的特性对实验的开展也有很大的促进.     

盐胁迫对植物的影响及植物耐盐机理研究进展

盐分是影响植物生长发育的一个重要环境因素,盐胁迫对植物的整个生命进程产生影响,盐分通过渗透胁迫、离子毒害,使植物细胞膜透性改变,造成氧化胁迫、代谢紊乱及蛋白质合成受阻等现象,植物的耐盐性主要体现在离子的选择性吸收和区域化作用、渗透调节、光合作用途径的改变以及活性氧清除机制。     

DMSO诱导烟草BY-2悬浮细胞的凋亡

烟草BY-2悬浮细胞经不同浓度的DMSO处理后发现,2％DMSO处理可导致细胞核染色质凝集或核结构解体,琼脂糖凝胶电泳显示基因组DNA降解成明显的梯状条带,从而表现出典型的细胞凋亡特征．对微丝骨架的进一步观察发现,2％DMSO处理引起细胞内微丝骨架分布异常,造成微丝骨架不同程度地断裂．这些结果为进一步研究微丝骨架在植物细胞凋亡中的功能奠定了基础．     

H2O2诱导烟草悬浮细胞的凋亡

烟草悬浮细胞经不同浓度的过氧化氢处理发现 ,当用 6mmol L的H2 O2 处理时从形态学上可观察到明显的染色质凝聚 ,细胞质皱缩和细胞核解体等现象 ;DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA被降解形成明显的DNA梯状条带 ,从而表现出典型的细胞凋亡特征 .其他高浓度的处理也有以上特征 ,但细胞坏死数目也相对增多 ,因此本研究认为 6mmol L的H2 O2 处理 2 4h能够非常有效地诱导烟草悬浮细胞的凋亡 .     

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定,发现其存在较大差异．梅核品种幼叶黄酮含量最高,为3．32％,大白果品种幼叶黄酮含量最低,为0.84％;梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高,达1．26％,岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低,为0.22％．选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养,研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响．结果表明,在150mL培养瓶中装有50mL培养液,接种量为鲜质量30—40g/L,对培养细胞给予3000—40001x的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成,以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长．HPLC检测结果显示,银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2．82％．     

水解酪蛋白对烟草愈伤组织和悬浮培养细胞生长的促进作用

报道了水解酪蛋白对烟草愈伤组织和悬浮细胞生长的促进作用，并确定了水解酪蛋白的适宜用量。     

悬浮培养红豆杉细胞中影响细胞生长和紫杉醇产量若干因？…

综述了悬浮培养红豆杉细胞生长状态、植物生长调节因子、糖分、氨基酸、无机盐、ｐＨ值及光照等因素对细胞悬浮培养生产紫杉醇的作用,为探索生产紫杉醇的最适条件和大规模细胞培养（生产紫杉醇）提供理论依据。     

伊贝母细胞悬浮培养的研究

研究了伊贝母细胞悬浮培养过程中接种量、培养方式和激素浓度对细胞生长的影响；测得细胞生长周期为１９～２４ｄ；分析了培养液的ｐＨ、蔗糖浓度、电导率和Ｄｏ变化的原因。鉴定了悬浮培养细胞中含有生物碱，其总生物碱和西贝素含量均高于栽培鳞茎。     

愈伤组织悬浮培养法研究长喙田菁（Sesbania rostrata）根、茎、叶的重金属抗性

通过悬浮培养长喙田菁（Sesbania rostrata)愈伤组织,分别研究长喙田菁根,茎,叶各器官对重金属胁迫的反应,并量化各器官的重金属抗性,研究结果表明,愈伤组织悬浮培养方法能够有效测定植物根,,戒骄戒躁地的重金属抗生,长喙田菁根愈伤组织对Pb,Zn,Cu和Cd的抗性远高于茎和叶愈伤组织,叶愈伤组织则对各重金属较为敏感,其抗性只有根的1／8－1／4,Pb对根,茎,叶的半抑制质量浓度分别为80,40和15mg/L,Zn则分别为80,30和10mg/L,Cu分别为20．8和4mg/L,Cd分别115,8和6mg/L。     

活体烟草BY-2悬浮细胞微丝骨架的标记

微丝骨架是细胞骨架的重要成员,在细胞的多项生理活动中发挥着重要作用.本论文利用荧光标记鬼笔环肽技术和GFP融合蛋白技术,对活体烟草BY-2悬浮细胞中微丝骨架的标记方法进行了探索,结果表明,10nmol/L的Alexa488-Phalloidin为细胞微丝骨架标记的最佳浓度,利用PCR等技术构建pPZP-NtFABD2-GFP植物表达载体后,转化烟草BY-2悬浮细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察发现,NtFABD2-GFP融合蛋白能够清晰地显示活体烟草悬浮细胞内的微丝骨架.这些结果为进一步深入研究微丝骨架在活体植物细胞中的功能奠定了基础.     

转MT工程菌的构建及其对重金属的抗性研究

利用重叠延伸PCR技术克隆金属硫蛋白(MT)和绿色荧光蛋白(GFP)基因片段,并将两基因融合连接构建重组表达载体,采用氯化锂法转化毕赤酵母,获得工程菌株.荧光显微镜观察发现,工程菌在蓝光激发下发出绿色荧光,说明GFP基因被正确表达.在培养基中加入一定浓度的铜(1.0 mmol/L,1.5 mmol/L)、铬(150 μmol/L,200 μmol/L)、镉(120 μmol/L,140 μmol/L)、砷(40 μmol/L,60 μmol/L)化合物后,对照菌生长抑制,转基因菌株长势明显好于对照菌,表现出对金属离子的耐受性,说明工程菌过表达MT能够增强宿主对重金属离子的耐受性,提高菌株耐污能力,在微生物法净化重金属废水中具有一定优势.     

植物对重金属耐性机理的研究进展

从两方面综述了植物对重金属胁迫的耐性机理.（1）植物生理生化代谢途径对重金属胁迫的适应性反应,包括与重金属解毒螯合相关的硫代谢途径;与植物抗氧化相关的活性氧代谢途径;与酚类物质生成及植物木质化形成相关的次生代谢途径.（2）植物对重金属耐性的分子机理研究,包括对与重金属胁迫相关代谢途径中关键酶基因克隆和功能鉴定;金属硫蛋白（MT）和膜金属转运蛋白基因表达和调控;与重金属胁迫相关的植物逆境信号传导的研究.随着基因组学的发展,通过进化各异的模式生物基因组比较及通过使用一些如基因差异表达技术、表达序列高通量分析技术和功能获得或突变体互补等技术在植物重金属耐性机理的研究中也取得了一些进展.     

Apoptosis Induced by High Concentrations of Nicotinamide in Tobacco Suspension Cells

As an inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), nicotinamide has a restraining effect on apoptosis at certain low concentrations. In our present study, apoptosis induced by high concentrations of nicotinamide was observed in tobacco suspension cells. When cells were preincubated with 250 mmol/L nicotinamide for 24 h, the hallmarks of apoptosis were detected, including DNA fragments increasing in size by multiples of 180-200 bp，the condensation and peripheral distribution of nuclear chromatin, and a positive reaction to the TUNEL assay. At the same time, the degradation of PARP and the reduction in the potential of the inner membrane of mitochondria appeared in apoptotic cells induced by high concentrations of nicotinamide. This result indicates that apoptosis induced by high concentrations of nicotinamide is associated with caspase-3-1ike activity and with the opening of mitochondrial permeability pores. These results partially support the hypothesis that high concentrations of PARP inhibitor could force cells to enter an apoptotic pathway by delay of DNA repair in replicating cells.     

HAK基因对玉米的遗传转化及其耐盐性研究

摘要：用农杆菌介导法将高亲和性钾离子转运体基因（HAK）和Bar基因转入5个优良玉米自交系7922、P138、265、238和271中,并对影响其遗传转化效率因素进行了优化．经PCR和RT-PCR检测证实获得阳性植株．除草剂涂抹实验证明Bar基因已经整合进玉米基因组．用不同浓度的盐溶液处理转基因植株和对照植株,发现转基因植株叶片中的K＋含量、脯氨酸和叶绿素含量均高于未转化植株,而Na＋含量低于未转化植株,表明HAK基因已经整合进玉米基因组,并通过过量表达提高了植株的耐盐性．     

烟草悬浮系培养与细胞器的分离

通过诱导BY-2型烟草叶片愈伤组织,进一步建立烟草细胞悬浮系．酶解去壁从细胞悬浮系中获得原生质体,用含有0．5％Triton X-100的CSK缓冲液破裂细胞膜,释放出细胞器,再通过不连续的蔗糖,Percou梯度进行速率区带离心,分离纯化出细胞核和叶绿体,通过分离、纯化细胞核的对照实验证明不同培养条件对烟草细胞悬浮系的生长和周期具有显著影响。     

添加剂对悬浮浇注钢夹杂物及力学性能的影响

研究了悬浮浇注钢坯时加入稀土、铝、锰等元素对钢中非金属夹杂物及钢坯力学性能的影响，结果表明，稀土、铝和锰均可有效地改善夹杂物的形态、尺寸和分布，使钢坯塑韧性提高，其中以稀土和铝的作用更为明显。它们在钢液中与氧反应，形成大量分散细小的氧化物颗粒，使夹杂物的有害作用降低。当稀土以一号稀土合金形式加入时，造成夹杂物偏差，使钢的力学性能恶化。     

矿业废弃地中耐重金属蕨类植物的研究进展

矿业废弃地是造成环境污染、水土流失和土地荒漠化的重大隐患,其带来的后果对经济发展和人类生存有长远影响.在矿业废弃地的生态恢复中,植物修复技术是治理重金属污染土壤的有效手段,有着很大的应用潜力.其中蕨类植物因具有抗逆境能力强、生长迅速、繁殖能力强以及在环境条件适宜情况下生物量能够急剧提高等特点,可以弥补现有修复植物的缺点和不足,是较理想的植物修复资源.本文对近年来关于耐重金属蕨类植物的分布与定居状况,及其生殖对策、生态作用、耐性机制的研究进展作一简要综述,并展望了今后该领域的研究发展方向.