在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0－8.9mmol/L范围时，丙氨酸对细胞生长影响不大，对单抗的生成没有直接影响，但对细胞代谢有较大的影响，随着丙氨酸浓度的提高，葡萄糖的消耗增加；同时，乳酸的生成增加，而丙氨酸和氨的生成减小。     

谷氨酰胺对杂交瘤细胞生长代谢的影响

研究了不同浓度的谷氨酰胺对分泌抗小细胞肺癌单克隆抗体的2F7杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨的生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养2F7杂交瘤细胞,培养条件为pH 7.2～7.4,温度37℃,5%CO_2、95%空气。实验表明,适宜于2F7杂交瘤细胞生长的谷氨酰胺浓度为2.5 mmol/L,谷氨酰胺浓度与细胞的葡萄糖消耗呈反比,与乳酸生成浓度呈反比,与氨的生成浓度呈正比。     

葡萄糖和谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长代谢的影响

在生物反应器的批培养过程中考察了葡萄糖及谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长及代谢的影响。当葡萄糖浓度降至1～4mmol／L，谷氨酰胺浓度降至0．4～2mmol／L时，细胞生长并未受到明显影响，但细胞代谢途径发生转换，乳酸及氨的生成显著减少。葡萄糖和谷氨酰胺浓度的比例对杂交瘤细胞的生长及代谢也有影响，葡萄糖相对较多时，其细胞得率小，乳酸得率大；而当谷氨酰胺相对较多时，其细胞得率小，氨得率大。实验结果表明谷氨酰胺与葡萄糖的能量代谢在某种程度上可进行相互补充。     

底物限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中,低乳酸浓度(1．1～6．14mmol／L,相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响,主要的代谢特征基本不变;在高乳酸浓度(13．1～41,58mmol／L,相应渗透压为701～944kPa)下培养,细胞生长受到抑制,代谢发生明显变化。乳酸对cHsE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中,维持正常的pH,7mmol／L的乳酸浓度,不会明显抑制CHSE细胞的生长。     

谷氨酰胺限制对rCHO细胞生长和代谢的影响

考察了rCHO细胞(Ch inese ham ster ovary,中国仓鼠卵巢细胞)在批培养和谷氨酰胺限制流加培养过程中的生长、代谢特性。实验发现随着谷氨酰胺浓度的下降,谷氨酰胺的比消耗速率以及氨和丙氨酸的比生成速率显著下降。与批培养相比,在谷氨酰胺限制流加培养过程中,培养时间延长,活细胞密度增加,达到2.4×106cells/mL;谷氨酰胺的代谢途径发生改变,代谢副产物生成明显减少,YAmm/G ln由1.04 mm o l/mm o l略微下降到0.92 mm o l/mm o l,YA la/G ln由0.35 mm o l/mm o l下降到0.08 mm o l/mm o l,YX/G ln由0.383×109cells/mm o l增加至0.504×109cells/mm o l,YAmm/X由2.59×1-0 9mm o l/cell下降到1.85×1-0 9mm o l/cell,表明谷氨酰胺代谢的能量利用率显著提高,也证明其参与细胞合成代谢的分率增加。     

柠檬酸对 CHO 细胞生长和代谢的影响

研究了重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO)批培养过程中柠檬酸对细胞生长和代谢的影响。结果表明:柠檬酸明显抑制了细胞的生长。与对照组相比,添加12 mm o l/L柠檬酸的处理组细胞的葡萄糖比消耗速率(QG lc)降低了37.5%,渗透压提高了10.0%,乳酸生成量与葡萄糖消耗量的比值增加了27.0%,氨生成量与谷氨酰胺消耗量的比值也增加了。在谷氨酰胺代谢过程中,更多的谷氨酰胺经谷草转氨酶途径生成α-酮戊二酸,参与能量代谢。柠檬酸促使细胞更多地被捕获在G 1期,阻碍细胞的DNA合成,抑制细胞增殖,并促进蛋白的表达。     

光合细菌Rhodobacter sphaeroides的醋酸代谢

利用 PSB 处理高浓度有机废水是一项十分诱人的废水处理新技术和废水资源化途径。本文就 R.sphaeroides 对醋酸的利用性,共存有机酸对醋酸代谢的影响进行了试验研究,并对它醋酸代谢的可能途径作了探讨。R.sphaeroides 生长的最适醋酸浓度为25mmol·dm~(-3),醋酸浓度增至200mmol·dm~(-3)时,虽然 R.sphaeroides 迟缓期长达24小时以上,但仍能缓慢地生长。共存的琥珀酸对 R.sphaeroides 的醋酸代谢有明显影响。当 TCA 循环中的α-酮戊二酸脱氢酶被抑制时,R.sphae-roides 的生长几乎完全受阻,当乌头酸酶被抑制时,醋酸仍能被利用。R.sphaeroides 中有苹果酸合成酶活性,没检测到异柠檬酸裂介酶和高柠檬酸合成酶的活性。因而 R.sphaeroides 可能既不通过 TCA 循环右半部分和乙醛酸循环生成乙醛酸,也不通过高柠檬酸循环生成乙醛酸,进而由苹果酸的合成而生成草酰乙酸。     

DFO对心肌细胞铁代谢的影响

观察去铁胺(DFO)对原代培养的心肌细胞铁代谢的影响,探讨DFO对心肌细胞铁代谢的影响机制.用原代培养的乳鼠心肌细胞为材料,以不同浓度的DFO孵育细胞,然后检测心肌细胞存活率、搏动频率以及铁转运相关蛋白CP,HP,FP1的表达变化.结果表明:各剂量DFO对心肌细胞存活率无明显影响;心肌细胞搏动频率减慢,停止跳动的细胞数量明显增加,收缩幅度逐渐降低;随着DFO浓度的增加,心肌细胞CP和HP的表达增加而FP1表达减少.由此可以看出,DFO不影响心肌细胞的存活率,但影响细胞的生活状态,也影响心肌细胞内CP,HP和FP1蛋白的表达.     

杂交瘤细胞流加培养中葡萄糖浓度的控制

通过 Wu T3杂交瘤细胞的流加培养 ,当葡萄糖浓度分别控制在 0 .2、0 .5、1 .0和 1 .5g/L时 ,葡萄糖的平均比消耗速率为 1 .1 4× 1 0 -11、1 .47× 1 0 -11、1 .78× 1 0 -11和 2 .2 4× 1 0 -11g/( cell· h) ,乳酸的平均比生成速率为 6.0× 1 0 -12 、8.3× 1 0 -12 、1 1 .6× 1 0 -12 和 1 6.6× 1 0 -12 g/( cell· h)。葡萄糖转化成乳酸的比例为 52 %、57%、64%和 74%。结果表明 ,在 Wu T3细胞的流加培养中 ,当葡萄糖浓度在 0 .2～ 1 .5g/L时 ,葡萄糖浓度越低 ,葡萄糖的比消耗速率和乳酸的比生成速率越低 ,葡萄糖转化成乳酸的比例越低 ,从而提高了葡萄糖的有效利用率 ,减少副产物的生成。     

三七悬浮细胞高密度培养生产人参皂甙和多糖

研究了在摇瓶培养中接种量和各种营养成分对三七悬浮细胞高密度培养的影响，结果表明，磷起始浓度为３．７５ｍｍｏｌ／Ｌ对其细胞培养较佳，接种量对细胞量和产物形成量有一定程度影响，而对细胞倍增数影响更大，在摇瓶培养中采用１２层纱布较棉花塞有利于氧代应，进一步考察了培养过程中糖和其它营养成分的补料策略，发现仅添加合适浓度的糖可使干细胞达到３５ｇ／Ｌ，人参皂甙和多糖分别可高达１．５７ｇ／Ｌ和５．２２ｇ／Ｌ；其     

大鼠原始生殖细胞的分离培养

以不同日龄的大鼠胎仔为材料，对其生殖巢进行解剖分离，并作形态观察．结果发现随着日龄的增加，生殖巢由长变短，由薄增厚，并在１４．５ｄ的生殖巢上发现了明显的性分化．对不同日龄的生殖巢用ＥＤＴＡ－Ｔｒｙｐｓｉｎ在３７℃下进行解离，可以得到原始生殖细胞（ＰＧＣｓ），较早日龄的ＰＧＣｓ形态较不规则，有大量的伪足伸出，运动能力较强．随着日龄的增大，ＰＧＣｓ的形态有所变化，椭圆形、圆形居多，并且运动能力亦有所下降．ＰＧＣｓ的体积比一般的体细胞大，细胞核多为圆形，体积硕大，有多个核仁．将消化液处理后的产物进行培养，ＰＧＣｓ一般能在含血清的ＤＭＥＭ培养液中悬浮生存一周左右，在此期间也有部分ＰＧＣｓ发生皱缩死亡，大量的体细胞在皿底成纤维化，血细胞逐渐死亡．     

不同胰酶消化方法用于制备猴胚肾细胞的评价

为了提高猴胚肾细胞的产量和质量,对生物制品生产中常规使用的四种细胞制备方法进行实验性评价,结果表明热消化法和冷消化法较适合于猴胚肾细胞的制备,冷消化法又优于热消化法,细胞产量高稳定性好,细胞活力强,上述两种方法也适合于幼兔肾和胎猴肺细胞的制备．     

人参组织和细胞培养研究进展

回顾人参组织和细胞培养研究的历史，介绍了人参组织和器官的离体培养、胚状体的诱导、毛状根的培养、花药的培养、原生质体培养、细胞培养、细胞的工业化生产的最新进展。     

西洋参悬浮细胞培养条件的研究

通过试验论述了不同愈伤组织年龄和接种量对细胞悬浮培养的影响，从而得出最佳接种年龄及其最佳接种量；分析了培养方式和转达对细胞悬浮培养影响的原因，确定了有利于细胞生长的培养方式及转速；阐述了在美国ＶｉｒＴｉｓ公司生产的ＯＭＮＩ－ＣＵＬＴＵＲＥＢＥＮＣＨ－ＴＯＰ－２Ｌ发酵罐中，进行西洋参细胞发酵培养的结果。描述了西洋参细胞在发酵罐中的生长曲线、培养液中Ｄｏ变化曲线和培养过程中ｐＨ的变化曲线，为西洋参细胞发酵培养条件最佳化的研究提供了有关数据。     

生物反应器微载体系统大规模培养草鱼细胞及病毒

采用微载体GT-2在细胞培养生物反应器中悬浮培养草鱼细胞和草鱼出血病病毒。合适的工艺条件为:温度26℃,pH6.8～7.2(生长期),7.2～7.4(接毒后),搅拌转速40 r/min,溶氧(DO)40%空气饱和度。GT-2是一种较适合于草鱼细胞贴壁生长的微载体。细胞密度可达7.4×10~6 Cells/mL,病毒滴度可达8.00。     

中华鳖心肌有限细胞系的建立及其生物学特性

首次对中华鳖的心肌细胞进行了体外原代和传代培养获得成功。并对其细胞形态,生长速率等细胞生物学特性以及温度和ＰＨ值对细胞生长的影响进行了观察研究。