猫传染性腹膜炎的诊断

目的对临床疑似猫传染性腹膜炎病例进行分子生物学、病理学诊断。方法根据冠状病毒3'UTR保守基因序列设计一对引物,对4例病死猫的组织器官和10例腹水进行RT-PCR检测,并对扩增产物进行序列测定;同时对所有病死猫组织器官进行组织病理学诊断。结果RT-PCR扩增产物克隆测序结果与GenBank中猫传染性腹膜炎病毒基因序列同源性为97%~98%。小肠浆膜、肝脏、脾脏等组织可观察到典型的炎性肉芽肿样变、灶性坏死和炎性细胞浸润。结论证实了4只病死猫感染了猫传染性腹膜炎病毒,且10例腹水中检测到猫传染性腹膜炎病毒核酸。     

猫细小病毒 PCR 检测方法的建立及初步应用

摘要: 目的 建立猫细小病毒 PCR 检测方法,应用于猫临床样本中 FPV 的快速检测。方法 根据已发表的 FPV VP2 基因序列设计合成引物,并以此建立 FPV 的 PCR 检测方法,并对方法的特异性、敏感性、稳定性等进行验证。 用建立的方法对 33 份猫临床样品进行检测。结果 建立的 FPV PCR 检测方法与猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)、猫冠 状病毒(FeCV)、猫合胞体病毒(FeSFV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)均无交叉反应;可检测病毒最小滴度为 5lgTCID50 / mL,相应的 DNA 模板浓度为 4. 9 × 102 拷贝/μL;FPV DNA 在 － 30℃冰箱放置 12 个月仍可检测出目的条带。应用 该方法从 33 份猫临床样本中检测出 21 份 FPV 核酸阳性。结论 建立的 FPV PCR 检测方法具有特异、敏感及稳定 的特点,适合于临床 FPV 的感染检测。     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

我国猕猴群中B病毒分离鉴定和检测方法研究初报

本实验从野外捕获的恒河猴的口腔溃疡灶中分离到一株病毒。该病毒在Vero细胞上具有B病毒特征性细胞病变 ,电镜观察具有疱疹病毒的典型形态与结构。经PCR扩增、SacⅡ酶切、PCR产物测序并与美国分离的BVE2 4 90株的部分基因序列进行比较 ,初步证实该分离株为B病毒 ,并命名为BV1 4 7株。用BV1 4 7株制备抗原片 ,并与国产HSV 1抗原片同时进行猴血清中B病毒抗体检测 ,可明显提高阳性检出率。B病毒的分离成功 ,对于提高我国实验猕猴的质量和检测水平 ,建立无B病毒猴群 ,增加出口创汇均具有十分重要的意义。     

牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 gB基因设计特异引物和TaqMan探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进行测定。用建立的方法对181份牛源性样本进行检测。结果 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)均无交叉反应;检测灵敏度可达到1×101copies/μL;批内变异系数均小于5%。应用建立的方法检测181份牛源性样本,有6份样本BHV-1核酸为阳性。结论 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BHV-1污染的检测。     

实验动物雪貂阿留申病病毒核酸检测方法的建立

目的 建立阿留申病病毒PCR检测方法,以用于实验动物雪貂阿留申病病毒的检测。方法 参考Genebank中阿留申病病毒核酸VP2基因序列设计一对引物,建立PCR检测方法,进行特异性、敏感性测试,并对实验雪貂粪便样品进行筛查。结果 测序结果显示,使用设计的引物可特异性地扩增获得阿留申病病毒的VP2中531 bp基因片段;在常见实验动物DNA病毒,小鼠多瘤病毒、小鼠细小病毒、犬细小病毒、疱疹病毒、鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠腺病毒中均未扩增出目的条带;以目的片段核酸为模板测试该方法敏感性,检测下限达到90. 6 copy/μL。应用该方法对39份雪貂粪便样品进行检测,未检测出阿留申病病毒核酸阳性。结论 本研究建立的方法具备一定的特异性和敏感性,可作为实验动物雪貂中阿留申病病毒感染病原筛查的方法。     

孔雀低致病性禽流感病毒株的分离与鉴定

用鸡胚分离方法从发病孔雀脑组织中分离病毒;将分离病毒进行血凝试验、血凝抑制试验、致病指数试验和半数致死量试验。结果表明,该株病毒可凝集鸡红血球,血凝性可被已知的禽流感(H9N2)抗体所抑制,脑内致病指数在1.6~2.5范围内,半数致死量,致病指数为50%,表明该病毒为低致病力禽流感毒株。     

粘虫幼虫血清,血浆及血细胞裂解液凝集活性的比较研究

利用血凝试验及半抗原抑制试验分别测定了粘虫Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔａ（Ｗａｌｋｅｒ）幼虫血清、血浆和血细胞裂解液凝集红细胞的能力及专性抑制凝集的糖种类。结果显示：血清和血浆均能凝集鸡、羊及人Ｂ型血红细胞，而且对同种红细胞的凝集活力完全相同；然而血细胞裂解液只凝集羊红细胞，对鸡和人Ｂ型血红细胞不凝集。糖抑制试验表明：血清或血浆对人Ｂ型血红细胞的凝集被乳糖及岩藻糖抑制，而对羊红细胞的凝集则被昆     

应用TD-PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒

从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128 bp,酶切后,B病毒能产生72 bp和56 bp片段,而HSV-1不能产生酶切产物;该方法能较好地鉴定猴B病毒,同时也将有密切抗原关系的HSV-1区分开来.     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。     

研究生论文疑似重复分析与学术规范教育

以普通大学研究生学术论文为研究对象,提取了大连市某普通高校学报编辑部研究生来稿的学术不端检测报告,从疑似重复率、疑似重复类型分布两方面进行统计分析。研究结果表明,研究生出现学术不端行为的原因主要是学术规范常识相对淡薄,对学术不端行为约束不足。并从加强研究生学术规范教育、加强导师学术规范意识、健全学术规范相应的惩处机制等方面提出建议。     

Disease-specific and tissue-specific production of unintegrated feline leukaemia virus variant DNA in feline AIDS

Feline leukaemia viruses (FeLVs) have long been known to be associated with induction of proliferative and anti-proliferative diseases of domestic cats. Strains of FeLV have been recognized which specifically induce lymphosarcoma, aplastic anaemia, myelodysplastic anaemia, and, recently, feline AIDS (acquired immune deficiency syndrome), a naturally occurring immunosuppressive syndrome strikingly similar to human AIDS which is lethal in 100% of inoculated and viraemic specific-pathogen-free (SPF) cats. Here, we have analysed FeLV DNA in tissues of 22 SPF cats that had been inoculated with the feline AIDS strain (FeLV-FAIDS) and we find two classes of viral DNA--a monotypic common form which is detectable in bone marrow regardless of disease state, and variant forms, recognizable by restriction site differences, whose appearance correlates with onset of disease symptoms and persists throughout the course of the disease. FeLV-FAIDS variant DNA is detected at high concentration (10-50 copies per cell) and principally as unintegrated viral DNA (UVD) in bone marrow of cats with feline AIDS. In marked contrast high levels of UVD were not present in cats in the terminal-stages of T-cell lymphosarcoma, aplastic anaemia, or myelodysplastic anaemia induced by other FeLV strains. These results parallel recent observations in humans, where high levels of UVD were sometimes found in cells derived from AIDS patients infected with human T-lymphotropic virus type III (HTLV-III)/lymph-adenopathy-associated virus (LAV), and suggest that persistence of unintegrated variant viral DNA is a crucial indicator of retrovirus-induced cytopathic disease syndromes such as AIDS.     

应用实时荧光定量PCR方法检测实验用猫巴尔通体的感染

目的 建立高效特异的巴尔通体实时荧光定量PCR检测方法,并应用于实验用猫的微生物检测工作中。方法 针对NCBI公布的巴尔通体序列设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定;并使用该方法对142个猫样品进行检测。结果 成功建立巴尔通体实时荧光定量PCR方法;该方法线性范围为1.0×101 copies/μL～1.0×109 copies/μL,相关系数为0.998,检测极限达10 copies/μL;特异性结果显示所建方法具有良好的特异性,并在142份实验用猫样品中检测出阳性样品6份。结论 实时荧光定量PCR方法可用于实验用猫巴尔通体的检测工作中。     

基于Logistic种群模型的城市流浪猫数量研究

流浪猫是城市居民最为关心的社会问题之一。本文应用Logistic种群模型建立了城市流浪猫数量研究模型,分析了随时间发展流浪猫数量的变化趋势,根据有关资料数据,给出模型算例,在此基础上预测了某城市流浪猫数量发展趋势。     

20例胰腺损伤的诊断与治疗

回顾性分析1997--2007年收治的20例胰腺损伤的临床资料,探讨胰腺损伤的诊断和治疗方法。认为,胰腺损伤早期诊断困难,应高度警惕;对怀疑或诊断为胰腺损伤者,应尽早手术探查,并根据损伤的部位及严重程度,选择合理的手术方式。     

实验兔和猫在降压物质检查中的比较研究

摘要:目的 通过比较实验兔和猫对组胺标准品的降压反应,探讨实验兔应用于药品降压物质检查的可行性。方法 取普通级的新西兰兔、日本大耳白兔、青紫蓝兔和猫各 6 只,雌雄各半,经戊巴比妥钠麻醉后通过静脉分别注射 0. 05 ~ 5. 0 μg / kg(实验兔) 、0. 05 ~ 1. 0 μg / kg( 猫) 的组胺标准品溶液以及 0. 5 mL / kg 和 1. 0 mL / kg 的生脉注射液。 首先通过比较 3 种实验兔对组胺标准品降压反应的敏感性、重现性和血压稳定性等指标,再比较实验兔和猫对组胺灵敏度 试 验 结 果 与 《 中 国 药 典》 要 求 的 符 合 性 及 其 对 组 胺 标 准 品 与 生 脉 注 射 液 降 压 反 应 的 差 异 性。结果 3 种实验兔对组胺标准品降压反应的敏感性和重现性均比较一致,品种间没有显著性差异,但在实验过程中新西兰兔血压较为稳定且操作方便;与猫相比较,实验兔对组胺降压反应极不敏感,其降压反应值约为猫的 1 / 8,且其灵敏度试验结果不符合药典的要求,但对生 脉 注 射 液 却 和 猫 一 样 具 有 明 显 的 降 压 反 应,降 压 值 约 为 猫 2 / 3。结论 实验兔对组胺物质的降压反应不敏感,暂时无法用于降压物质检查,但对生脉注射液仍较敏感,说明组胺对动物的降压作用具有明显的动物种属选择性。     

降压物质检查中家猫的麻醉方法初探

目的优化药品降压物质检查试验时家猫的麻醉方法。方法 2.0 kg以上健康家猫,雌雄不限,雌者无孕,累计35只,速眠新与戊巴比妥钠复合麻醉进行降压物质检查,先行肌肉注射速眠新,待家猫无抵抗时再行腹腔注射戊巴比妥钠,观察麻醉效果及对降压试验的影响程度。结果速眠新与戊巴比妥钠复合麻醉,用药剂量少于推荐剂量,对血压影响小,初血压大多可达药典规定标准,灵敏度测试符合规定,中间无需追加即可满足多个供试品检查,克服了单纯速眠新或戊巴比妥钠麻醉的缺陷,又降低了因家猫难以制动的保定操作难度,安全且易掌握。结论降压物质检查中,速眠新与戊巴比妥钠复合麻醉,对实验干扰较小,安全范围较大,操作简便,经济,是降压物质检查试验中较为理想的家猫麻醉方法。     

Development of virus non-producer lymphosarcomas in pet cats exposed to FeLv

Naturally occurring oncoviruses of several species are transmitted contagiously and cause lymphosarcoma (LSA) or leukaemia in their hosts. All naturally occurring oncoviruses replicate in vivo in the tumours they induce or, as with bovine leukaemia virus, can be isolated from tumour cells grown in short-term cell culture. However, we have shown that feline leukemia virus (FeLV) is not present in a significant minority of pet cats that develop LSA. Unlike experimentally induced virus-negative leukaemias and sarcomas of other species, LSA cells from FeLV-negative LSA cats lack any FeLV proteins, including p15 or p12, and complete functional copies of FeLV provirus and thus do not produce FeLV when grown in cell culture. Thus, except for FeLV, the naturally occurring animal leukaemogenic oncoviruses seem to induce only virus-producing lymphoid tumours. Our earlier findings prompted a study to determine the frequency of occurrence of FeLV non-producer (NP) LSA in pet cats and whether NP LSAs develop in cats exposed to FeLV. We report here epidemiological data which indicate that development of NP LSAs in pet cats is associated with exposure to FeLV and suggest that FeLV may be the aetiological agent for FeLV NP feline LSAs. Thus, feline NP LSAs may be suitable for studying the potential viral aetiology and mechanism of leukaemogenesis of human lymphoid tumours in which no oncoviruses have, as yet, been proved to cause the disease.