综合提取分离技术研究

探讨了传统的提取分离方法，分析了其利弊，对综合提取分离技术进行了深入研究，以期推动民族提取物产业健康、可持续发展。     

家蚕卵蛋白的 SDS-PAGE 分析(动物科学)

本研究探讨了蛋白质提取方法、十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)条件对家蚕卵蛋白分离效果的影响。分别用裂解液提取法、TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法和TCA-丙酮沉淀法制备蛋白质样品,然后进行6%～12%、6%～15%两种梯度胶的SDS-PAGE,获得了不同提取方法和电泳条件下的电泳图谱用以比较家蚕卵蛋白分离效果。结果表明用TCA-丙酮沉淀法除盐,再用含9 mol.L-1尿素、4%CHAPS、1%DTT的裂解液重悬,最适合家蚕卵蛋白提取;6%～12%梯度胶对家蚕卵蛋白的分离较为适宜。利用这一优化方法对家蚕感染微孢子虫的蚕卵和正常蚕卵进行了比较研究,在分子量66 kD和85 kD处找到了与感染微孢子虫相关的蛋白,为进一步进行正常蚕卵和感染微孢子虫蚕卵的蛋白质组学研究奠定了基础。     

海带中褐藻糖胶提取方法的评述

对海带中褐藻糖胶分离提取的多种方法进行了评述，重点讨论了水提取法、酸提取法、溶剂萃取法、超声波提取法、沉淀法，并对上述提取方法的影响因素作了分析，指出了提取方法的最新研究进展。     

宜兴地区银杏叶中银杏黄酮的提取与分离

本文从经济和实用的角度出发，研究了提取时间、温度等因素对提取效果的影响，利用正交设计确定了水提法提取银杏黄酮的最佳条件。同时对银杏叶浸膏的提纯和黄酮化合物的分离进行了初步探索。     

菠菜色素的提取与分离

用抽滤和浸泡法从菠菜叶中提取了色素，使用薄层色谱、柱色谱对叶绿素、胡萝卜素和叶黄素进行了分离．对比分析结果表明，用石油醚-乙醇(3：2)浸泡法提取效果较好，洗脱剂的选择是菠菜色素分离的优化条件．     

马齿苋中黄酮类化合物含量的测定

对不同月份所采集的中草药马齿苋中的黄酮类化合物进行了提取、分离，以芦丁为对照品，用紫外分光光度计对其含量进行了测定。为马齿苋中黄酮类化合物的提取和生产提供了一定的理论依据。     

新型天然气空冷脱除净化合一装置研制

针对以往在采用天然气除油器和天然气干燥器两套设备进行天然气脱除和净化的过程中出现的影响生产,污染环境等问题,研制了新型天然气空冷脱除净化合一装置。本文介绍了新型天然气空冷脱除净化合一装置的设计特点,即根据空冷原理设置空冷装置增加分离环节提高分离效果、采用了新的整体结构、采用新型的分离元件。     

兰州油松松针挥发性成份分析

采用水蒸气蒸馏法对兰州产油松松针的挥发性成份进行提取，采用GC／MS方法对提取的挥发性成份进行了分离、鉴定，共鉴定了20个化学成份．     

泥炭中黄腐酸的分离研究

采用丙酮-水-硫酸混和溶剂对泥炭中的黄腐酸进行了提取分离，对分离工艺进行了研究并测定了3种泥炭中黄腐酸的含量。     

液体培养发状念珠蓝细菌代谢物提取方法的比较分析

比较了基于气相色谱–质谱联用技术(GC-MS)发状念珠蓝细菌代谢物的2种不同提取方法.在对样品进行快速洗涤和淬灭后,分别采用冷甲醇法和甲醇/氯仿法对样品进行提取,并考察了样品量对提取效果的影响.结果显示,从提取到的代谢物种类和丰度角度,冷甲醇法的提取效果要优于甲醇/氯仿法,且采用50,mg样品量的提取效果较佳.通过本方法,在发状念珠蓝细菌中共检测到46种代谢物,包括19种有机酸、1种无机酸、13种氨基酸、4种胺类、4种醇类和5种糖类物质.     

Retro-secretion of recombinant proteins

The retroviral Gag protein can be used to package recombinant proteins produced by mammalian cell cultures. Protein products can then be isolated easily from the recombinant virions.     

利用RT-PCR技术鉴定人ZP3嵌合肽基因在昆虫细胞中的表达

目的：探讨在转录水平上对人卵透明带蛋白3(hZP3)嵌合肽在昆虫细胞中的表达鉴定．方法：用含目的基因的重组病毒感染昆虫细胞，用LiCl法提取RNA，以其为模板，利用一步法RT-PCR反转录出目的DNA．结果：琼脂糖凝胶电泳显示其PCR产物只有一条DNA条带且与目的基因大小一致，而阴性对照未见任何条带．结论：hZP3嵌和肽基因在重组病毒感染的昆虫细胞中成功转录，初步验证了目的基因的表达．     

鸡survivin重组腺病毒载体的构建和体外表达

根据GenBank中鸡survivin cDNA序列,设计引物,从鸡胚组织提取总RNA,利用RT-PCR扩增鸡survivin全长cDNA,经T-A克隆后插入腺病毒穿梭载体、骨架载体,构建腺病毒重组质粒,转染293E4pIX细胞,构建鸡survivin重组腺病毒.T-A克隆的测序结果与GenBank中鸡survivin cDNA完全一致.限制性内切酶分析和PCR表明腺病毒质粒携带survivin基因,Western blot证实重组腺病毒正确表达survivin,survivin基因已被成功重组到腺病毒基因组.     

小鼠造血干细胞的分离、培养及重组慢病毒载体介导的离体hFⅨ基因表达

造血干细胞是基因治疗理想的靶细胞之一,尤其适用于遗传性血液病.而重组慢病毒载体能高效感染造血干细胞,成为造血干细胞途径基因治疗的理想载体.从小鼠骨髓细胞中分离出单个核细胞(MNCs)进行体外悬浮培养,并用免疫磁珠法分离得到高纯度的小鼠Lin-CD117+造血干细胞(HSCs).体外悬浮培养期间,添加细胞因子的造血干细胞的细胞数和集落数逐渐增加,而未添加细胞因子的对照组的细胞数量无明显增加,细胞集落递减.用磷酸钙介导的共转染法制备了携带FⅨ基因的FUXW重组慢病毒,用慢病毒载体分别感染从ICR小鼠和C57小鼠中分离得到的MNCs,7d后测得细胞上清中hFⅨ的表达量分别为41.7±4.2和34.5±6.6ng/mL,而慢病毒感染C57小鼠造血干细胞,添加细胞因子组上清中hFⅨ的表达量为46.6±5.7ng/mL,不添加细胞因子组为33.3±4.8ng/mL.实验结果表明,重组FUXW慢病毒载体可有效感染小鼠单个核细胞和Lin-CD117+造血干细胞,添加细胞因子可提高转移基因的表达量.     

耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析

【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX。将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】AmyGX基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,V_(max)、K_m值分别为0.19U/mg、3.14mg/mL,热半失活温度T_(50)~(30)值为65.2℃;Zn~(2+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Fe~(3+)、Ba~(2+)对该酶具有明显的抑制作用,Na~+、K~+对该酶有激活作用,Mg~(2+)、Ca~(2+)的影响则不明显。【结论】AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景。     

重组盐藻14-3-3蛋白基因的原核表达及分离纯化

根据克隆的杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻14-3-3蛋白的基因.经原核表达、Ni2+亲和层析法纯化,免疫动物制备抗体. 抗体蛋白质印迹分析检测结果表明抗体能特异结合盐藻细胞分子量为29 kD的多肽.     

赤红球菌JDM312环己酮单加氧酶的原核表达及检测

通过酶切法从重组质粒pUC18-chnB中得到编码环己酮单加氧酶的chnB基因序列,将其定向插入原核表达载体pQE30中,构建重组质粒pQE30-chnB,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达目的蛋白,用SDS-PAGE电泳检测表达产物.测序结果表明chnB基因大小为1 623bp,编码由540个氨基酸残基构成的多肽.S...     

大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建

从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA，反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(opening reading frame，ORF)后，重组于克隆载体pGEM3z上，经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定，扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致；在已构建好的重组克隆载体neuritin-pGEM3z基础上，将该neuritin ORF亚克隆到原核表达载体pQE30上，为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。     

有限稀释法筛选重组AcNPV病毒

有限稀释法筛选重组ＡｃＮＰＶ病毒钟劲胡美浩１）（北京大学生命科学学院,北京,１００８７１）关键词重组病毒;梯度稀释;筛选;测活中图分类号Ｑ３３２０引言昆虫杆状病毒表达系统是一高效表达外源基因的表达系统。用于基因工程表达外源基因的ＡｃＮＰＶ（ａｕｔｏｇ...     

甜菜夜蛾核型多角体病毒vp39基因重组真核表达质粒的构建及鉴定

利用DNA重组技术，将杆状病毒极早期基因iel启动子基因克隆至重组质粒pGEM-Se39中，成功地构建了重组真核表达质粒pGEM-IE1-Se39。