小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的分离与培养。方法取BALB/c小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对MEF的生长形态进行观察,并对传代细胞培养液、胚胎胎龄、胰蛋白酶浓度进行筛选。结果 MEF在体外为贴壁生长型细胞,第三、四、五代细胞纯度较高且增殖最为旺盛;添加血清的M199和DMEM均能较好的满足原代细胞的生长,两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异;11.5～16.5d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;0.1%胰蛋白酶消化MEF时间以8～11min为宜。结论通过对MEF分离培养影响因素的筛选,为MEF的进一步研究奠定了基础。     

胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养

目的:探讨胚胎大鼠肺成纤维细胞的体外培养条件.方法:采用胶原酶消化19d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞后采用加胎牛血清的DMEM培养液,进行细胞培养.用波形蛋白免疫细胞化学染色对所分离的细胞进行鉴定.结果:细胞培养24h后有一定量细胞贴壁,48h后贴壁细胞开始生长.结论:该实验方法可以成功地培养大鼠胚胎肺成纤维细胞.     

昆明鼠胚胎干细胞的分离培养与鉴定

目的：从昆明系小鼠的早期胚胎分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)．方法：收集小鼠3．5d胚龄的囊胚，将其培养在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上，5—6d后取隆起生长的内细胞团块分离后再培养，观察集落的生长情况并通过碱性磷酸酶染色、原位杂交、细胞核型分析等对细胞集落进行鉴定．结果：KS细胞集落性生长，符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性．结论：昆明系小鼠囊胚在胚胎成纤维细胞饲养层上可以发育成ES细胞，并能进行传代培养．     

成年小鼠成纤维细胞体外培养

成年小鼠皮肤成纤维细胞可从尾部取材用组织块培养法进行原代培养,添加血清的M 199(E arle′s)和低糖的DM EM均能较好的满足原代细胞的生长.两种培养液中细胞增殖的速度无明显差异.用0.25%胰蛋白酶消化小鼠尾尖原代培养物,上皮细胞与成纤维细胞有明显的敏感度差别.经控温控时消化传代,可将上皮细胞与成纤维细胞分离纯化.     

Preliminary study on human fibroblasts as feeder layer for human embryonic stem cells culture in vitro

To avoid the direct contact with mouse cells and possible heterogeneous pathogen in future application ,we need to replace mouse embryonic fibroblasts with human fibroblasts as the feeder layer to maintain human embryonic stem cells growth in the undifferentiated state,We Success-fully use human fibroblasts derved from aborted fetus and adult prepuces as feeder layer to maintain human embryonic stem cells growth ,During the passage and growth on this feeder layer,the human embryonic stem cells can keep their undifferentiated state.     

胎牛成纤维细胞的分离培养

应用组织块培养法从胎牛耳部分离培养了胎牛成纤维细胞。应用PCR方法鉴别了细胞的性别。选择雌性成纤维细胞,进行了形态观察、生长曲线测定、染色体分析。结果表明,分离培养的细胞具有正常的大小、形态、分裂增殖特性和染色体数目。胎牛成纤维细胞的培养方法的建立以及其相关的生物学特性的分析,有利于给同种和异种体细胞克隆牛研究提供形态良好、染色体数目正常的供体细胞,同时也为体细胞转基因等其他领域的研究提供了基础条件。     

体外培养高产奶牛胚胎的研究

研究体外培养法培养效果及对体外受精胚胎发育的影响。体外受精胚胎分别在加输卵管上皮细胞单层和颗粒细胞单层（2×106个／ml）的体外培养体系的培养液中培养。结果发现,冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响极显著（P〈0．01）;冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著（P〈0．05）,解冻后A级胚胎存活率79％、囊胚孵化率56％,显著高于B级胚胎存活率60％和囊胚孵化率39％（P〈0．05）。体外培养体系囊胚形成主要集中在第8d,加体细胞的体外培养体系显著好于不加体细胞的简单体外培养法。     

大鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和分裂抑制

大鼠胚胎成纤维细胞（REF）可以作为培养大鼠胚胎干细胞的滋养层．对REF进行分离、原代培养、冻存和有丝分裂抑制,得出如下结论：分离REF时使用组织块生长法优于胰酶消化法;应用血清含量〉40％、DMSO含量为20％的冻存缓冲液能在冻存时最大程度地降低REF所受的伤害;进行REF分裂抑制时使用丝裂霉素C处理的最适终浓度为3ug／m1．     

成人骨髓基质细胞的体外培养

本研究从成人的髋骨抽取骨髓液，离心后将骨髓基质细胞悬液接种培养，待细胞贴壁融合后，进行传代扩增培养．并采用流式细胞术进行细胞周期分析，结果表明原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的骨髓基质细胞，且此体外培养的骨髓基质细胞具有很强的增殖能力．本研究成功地建立了一套完整、简单、可行的体外分离、长期培养扩增人骨髓基质细胞(Human Bone Marrow Stromal Cells hBMSCs)的系统，证明成人骨髓基质细胞能够在体外长期增殖，为人的骨髓基盾细胞的理论研究和临床应用奠定了基础.     

不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

天麻离体培养的研究

天麻(Gastrodia elata BL)为异养植物，在自然条件下需与密环菌共生才能生长。以幼茎为外植体研究了天麻在无菌条件下的生长情况。结果表明，顶芽的存在对于天麻茎段的存活至关重要；在无菌条件下，长约1cm的带有顶芽的茎段在人工培养基上生长良好，茎段可以伸长、形成新的幼茎，在液体培养中还可以形成小块茎。     

精原干细胞体外培养的方法改进

探讨精原干细胞体外培养优化方法,为进一步探讨其生物特征、生殖干细胞移植及生殖损伤及药物保护等研究提供实验基础.制备骨髓基质饲养层,将生后5 d~7 d雄性小鼠生精细胞接种在饲养层上,并于IMDM培养基及37 ℃下共培养,在倒置显微镜下观察细胞生长行为,并对培养后的细胞进行组织学、细胞化学、免疫组化、遗传学鉴定.精原干细胞能在以骨髓基质细胞饲养层上进行增殖和生长,且增殖后的表现出呈簇、团状生长,细胞间可表现出明显的胞质间桥,细胞核大,核/质比高,碱性磷酸酶及C-KIT受体阳性,染色体核型为20对(40条)等精原干细胞的生物学行为特征.原代培养的骨髓基质细胞作饲养层具有取材及制作简便等优点,且能在不添加外源性生长因子的前提下能通过自分泌足够的细胞生长因子,满足精原干细胞体外增殖和抑制分化的需要,是精原干细胞培养的一种良好的饲养层.IMDM培养基、血清及适宜的环境温度是精原干细胞体外培养的重要条件.     

晚蜜桃离体培养初探

采用对比试验设计,进行了晚蜜桃的离体培养。结果表明:MS+6-BA1.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1培养基较适宜初代培养,MS+6-BA1.5mg·L-1+IBA0.2mg·L-1+IAA0.2mg·L-1培养基较适宜继代培养。     

竹节秋海棠离体快繁技术研究

以竹节秋海棠的幼嫩叶作外植体进行了组织培养 .结果表明：（ 1）在不同激素组合的培养基上均能诱导产生丛生芽,在 MS＋ BA2mg/L＋ 2.4－ D0.2mg/L中分化率高,芽质优;（ 2） MS＋ BA0.5mg/L＋ NAA0.2mg/L和 MS＋ BA0.5mg/L＋ 2.4－ D0.05mg/L培养基中有效苗获得率高,长势好;（ 3）再生植株在 1/2MS＋ IBA0.2mg/L＋ NAA0.2mg/L培养基中的生根率达 96％ .     

Properties and applications of embryonic stem cells

Mouse embryonic stem (ES) cells are pluripotent cells derived from the early embryo and can be propagated stably in undifferentiated state in vitro. They retain the ability to differentiate into all cell types found in the embryonic and adult body in vivo, and can be induced to differentiate into many cell types under appropriate culture conditions in vitro. Using these properties, people have set up various differentiated systems of many cell types and tissues in vitro. Through analysis of these systems, one can identify novel bioactive factors and reveal mechanisms of cell differentiation and organogenesis. ES cell-derived differentiated cells can also be applied to cell transplantation therapy. In addition, we summarized the features and potential applications of human ES cells.     

厚荚相思离体培养的初步研究

作者用厚荚相思（Acacia crassicapa)种子获得的无菌苗进行离体培养。结果表明：采用改良的MS 6-BA 0.5-2.0mg/L NAA 0.1-0.2mg/L培养基均能诱导芽的分化和增殖，其中以改良的MS＋6－BA1.5mg/L NAA0.1mg/L为最适宜的培养基。培养30d后，芽繁殖系数可达到4.0。以1／2MS IBA0.5-1.0mg/L培养基培养20d后，生根率可达83.0%以上。生根苗的移栽基质以蛭石较好。     

兔角膜缘上皮细胞在体外壳聚糖共混膜上的培养及生物学鉴定

目的：探讨壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜作为兔角膜缘上皮细胞体外培养载体的可行性。方法：采用消化培养法,用特殊培养液在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上培养兔角膜缘上皮细胞,第7d应用免疫组化方法对培养细胞作生物学鉴别并在扫描电子显微镜下观察细胞形态。结果：上皮细胞AE1／AE5单克隆抗体免疫组化阳性,培养第7d的上皮细胞有多种细胞形态,细胞胞体饱满,相互通过突起连接,表面可见微绒毛。结论：兔角膜缘上皮细胞可在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上生长,并具有分裂增殖能力。