实验大鼠肺支原体ELISA检测方法的建立

报告了实验大鼠肺支原体感染ELISA检测方法的研究。抗原包被量在0.5μg/ml,酶结合物1:16000稀释时,P/N值最大。波长在492时O.D值随抗原和抗体浓度不同而呈现有规律的变化。阳性血清稀释至1:1280时,P/N值仍在阳性范围之内。与常规的分离培养方法相比较,ELISA的阳性检出率高,且阳性血清的ELISA阻断率均大于50％。重复测定,实验结果的再现性好。以上结果说明所建立的ELISA方法,其敏感性、特异性和重复性均好。在所检测的130只普通级大鼠中,抗体阳性率达91％。另外还发现在实验大鼠中还存在关节支原体的感染,且一般与肺支原体以混合感染的形式存在。在清洁级大鼠中未见这两种支原体的感染。     

大鼠生殖道肺支原体的分离与探讨

从１１只普通雌性大鼠生殖道分离出７株肺支原体，同时从它们的呼吸道也分离出肺支原体；另有１只大鼠生殖道和呼吸道均未分离出肺支原体。从该试验说明生殖道也可感染肺支原体。     

实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立

目的 建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。方法 针对多种大、小鼠易感支原体的16 s rRNA基因中较保守的区域设计1对引物和探针,建立荧光定量PCR方法并检测其特异性、灵敏性及重复性。结果 该方法在模板浓度为5×100～5×106 copies/μL之间呈良好的线性关系(R2=0.9972)且扩增效率为98.11%;特异性强,能够区分检测金黄色葡萄球菌等常见的病原菌;灵敏性高,检测下限为5 copies/μL,比常规PCR的检测灵敏性高100倍;重复性好,对不同浓度模板进行组内和组间重复性试验的变异系数均低于2%。用荧光定量PCR和普通PCR方法对不同来源不同类型的120份临床样品进行检测,结果表明小鼠支原体检测阳性率分别为3.33%(2/60)、1.67%(1/60),细胞样品支原体检测阳性率均为5%(3/60)。结论 本研究建立的荧光定量PCR方法快速、特异强、灵敏性高、重复性好,可用于实验动物常见支原体的快速诊断。     

肺支原体培养特性研究

以肺支原体为标准株，莱德劳氏无甾醇原体为参照株，用六种基础培养基对肺支原体的适宜培养基，添加成分，培养温度，湿度，ＰＨ值，二氧化碳需要情况及不同菌落形态进行了研究。     

两种肺支原体培养基质量的比较

对常用的国产培养基与进口的培养基进行了初步的质量比较实验。结果表明 :国产培养基与进口的培养基质量两者无显著差别。定性实验中 ,半流体培养基灵敏度均达到 10 - 7稀释度 ;液体培养基灵敏度均达到 10 - 9稀释度 ;定量实验中 ,两者测定同一样品的活菌数 ,国产培养基的结果为 8 5× 10 8CFU ml;国外培养基为 1× 10 9CFU ml。两种培养基用于支原体保存时 ,在 - 2 0℃条件下 2个月下降 1个对数级 ,但 6个月以上时 ,支原体活性很快下降。肺支原体在进口培养基上的发育状态优于国产培养基。     

肺支原体抗原快检试剂盒的研制

用不同抗体建立快检肺支原体抗原的夹心ＥＬＩＳＡ方法，并以培养汪评价，研制相应的试剂盒。结果表明夹心ＥＬＩＳＡ检测方法与培养法相符经为１００％，检出极限为１０００菌／ｍＬ，该方法特异性高，与其它相关抗原交叉反应低于３３％，度剂盒稳定性好。     

抗原热灭活对小鼠肺炎支原体ELISA检测的影响

目的优化小鼠肺炎支原体ELISA检测方法,降低非特异性反应。方法肺炎支原体热灭活处理后制备ELISA板,检测小鼠血清,与常规ELISA及分离培养方法相比较。结果优化后的ELISA方法平均本底值为0.03,敏感度为1:1280;优化ELISA方法与分离培养方法的符合率为99.27%,比常规ELISA方法高;PCR验证改进后的ELISA方法具有较好的准确性。结论优化后的方法准确性好,灵敏度高,对小鼠肺炎支原体的检测具有重要的实际意义。     

实验大鼠仙台病毒ELISA检测试剂盒的研制及其初步应用

报导实验大鼠仙台病毒血清抗体IgG ELISA检测试剂盒的研制过程及其初步应用。在ELISA反应条件及试剂盒的实用性方面进行了研究,首次进行了试剂盒的阴性对照血清的标化;并且同其它血清学方法进行了比较。结果表明,试剂盒的敏感性高、特异性强、重复性良好,操作简便,适用于常规检测。通过对京津地区六个单位的实验大鼠仙台病毒抗体检测发现,在普通大鼠中,阳性率高达81％:在清洁大鼠中,未发现仙台病毒的感染。     

肺炎支原体肺炎及其肺外并发症临床分析

目的：探讨肺炎支原体肺炎以及肺外并发症的临床特点。方法：对内蒙古赤峰市第二医院2011-12-2012-12住院的600例肺炎患儿进行肺炎支原体抗体检测,对MP-IgM阳性者给予肝功能、肝脏B超及心肌酶谱检查。结果：6-12岁阳性率占60%,且常在感染同时出现肺外并发症。结论：肺炎支原体感染大多侵犯肺部,但易引起肺外并发症,故在治疗过程中有发热、咽痛症状,而且又同时或先后出现多系统器官免疫损害时应考虑到肺炎支原体感染。     

实验大鼠肺炎病毒ELISA检测试剂盒的研究

在小鼠肺炎病毒的抗原特性进行鉴定的基础上,将其毒种感染BHK_(21)细胞作为抗原,建立了检测大鼠PVM抗体的酶联免疫吸附试验的试剂盒。经过提纯PVM免疫血清结合辣根过氧化物酶,用于阻断试验、免疫荧光抗体(IFA)试验,考核了本试剂盒的特异性,对该试剂盒的灵敏性及重演性作了验证。并用本试剂盒对154只大鼠的PVM抗体水平进行调查,结果是开放大鼠PVM阳性率为38.2％,清洁大鼠为0。并对154只大鼠标本用光密度OD值定值的两种方法作了探讨。     

血清中支原体污染的检测及其方法分析

血清作为疫苗生产中的主要原辅材料,很容易被支原体污染.为了更好、更准确地检测血清中支原体的污染情况,本试验对血清中支原体污染的检测及方法进行了分析.分别用直接培养法、DNA荧光染色法和PCR法对17批新生牛血清样品进行了支原体检测.直接培养法检测结果有15批支原体阴性,2批阳性,阳性率为11.8%;DNA荧光染色法和PCR法检测结果均为14批支原体阴性,3批阳性,阳性率为17.6%.以上结果表明培养法与DNA荧光染色法或PCR法之间存在明显差异.对血清支原体进行检测时,应用直接培养法和DNA荧光染色法或PCR法同时联合应用,以提高对血清中支原体检测的准确性.     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物。建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增小出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。     

实验性大鼠血脂检测

目的　检测普通级和清洁级SD大鼠血清总胆固醇 (TC)和甘油三酯 (TG)值。方法　TC测定采用酶法 (终点法 CHO PAPMethod) ,TG采用酶法 (终点法 GPO PAPMethod)。结果　 (1)普通级雌性SD大鼠血清TC和TG值分别为 (1 67± 0 2 4)mmol L和 (0 52± 0 12 )mmol L ;(2 )普通级雄性SD大鼠血清TC和TG值分别为 (1 52± 0 18)mmol L和 (0 58± 0 14 )mmol L ;(3 )清洁级雌性SD大鼠血清TC和TG值分别为 (1 80± 0 3 2 )mmol L和 (0 43± 0 0 9)mmol L ;(4)清洁级雄性SD大鼠血清TC和TG值分别为 (1 60± 0 42 )mmol L和 (0 75± 0 3 0 )mmol L。结论　本实验为洁净实验动物正常血液测定参考系统的确立提供一定的参考数据     

论鸡支原体病的诊断与防治

从患病鸡的外观和剖检症状推断为支原体疾病，通过从病鸡中分离病原微生物，进而进行分离培养和显微镜检查，鸡胚的接种、全血凝集实验，最后确认为禽的支原体疾病。通过药敏实验，选择了合适的药物进行治疗，有效的控制了疫情的发展和传播，同时也加深了自己对鸡的慢性呼吸道疾病的感性认识和理性认识．     

基于pgk蛋白的犬嗜血支原体ELISA诊断方法的建立（英文）

为了开发一种准确、快速的检测犬嗜血支原体的方法,建立了一种基于犬嗜血支原体磷酸甘油酸激酶(PGK)的间接ELISA方法 .从已发表的NCBI犬嗜血支原体全基因组序列库中获得了其磷酸甘油酸激酶(PGK)基因序列.通过选择原核生物首选的密码子优化基因序列,将化学合成的新基因序列pgk插入质粒中,成功构建了原核表达载体pet32a(+)-pgk,并在大肠杆菌BL21中表达.经SDS-PAGE证实,该蛋白的相对分子量约为60 ku.以纯化的PGK重组蛋白作为抗原进行包被,建立了基于PGK蛋白的间接ELISA方法,并进一步对条件进行优化.结果表明,抗原的最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清的最佳稀释倍数为1∶200,封闭剂的最佳工作浓度为5%脱脂乳,最佳封闭时间为45 min,待检血清的最佳作用时间为60 min,酶标二抗的最佳工作浓度为1∶5 000,酶标二抗的最佳作用时间为30 min.基于以上,建立了一种检测犬嗜血支原体的间接ELISA方法,并选择临床阴性血清计算其临界值.采用该方法检测166份临床样本,阳性率为21.1%,与荧光定量PCR检测结果一致.本研究为犬嗜血支原体的临床监测提供了...     

浅谈鸡支原体病的诊断与防治

通过从病鸡中分离病原微生物,进而进行分离培养和显微镜检查,鸡胚的接种、全血凝集实验,最后确认为禽的支原体疾病。通过药敏实验,选择了合适的药物进行治疗,有效的控制疫情的发展和传播。     

长期观察的CEA高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤

本文报道ＣＥＡ高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤的长期观察结果。４年多来该移植瘤已传６８代，共移值２６５只裸鼠，移植成活率１００％，经长期观察，该移植瘤形态学特点和分泌功能无改变，未见侵润、转移和消退现象，高发泌ＣＥＡ的生物学特性一直稳定，阿辛蓝／ＰＡＳ证实有大量酸性粘液分泌。     

大鼠被动皮肤过敏试验检测方法的探讨

采用ELISA方法,用酶标仪定量检测大鼠血清中的IgE和组胺,用全自动血细胞分析仪定量检测嗜酸性粒细胞,并与传统的蓝斑吸收度的实验方法进行比较。试验结果表明此方法灵敏快速,结果准确可靠,适于多组份中药过敏原的检测。     

开放系统中肺支原体一次性人工感染兔和小鼠的研究

肺支原体（M.pulmois）经鼻一次性人工感染成年普通青紫兰兔和清洁级昆明小鼠,105CFU／只,然后饲喂于20±2℃,相对湿度60±10％的开放环境中,隔七天取鼻咽、气管拭子、肺及血样,经分离培养法追踪感染菌在兔、鼠呼吸系统的分布,用间接ELISA法检测相应感染期内血液中抗体IgG的变化情况结果表明,开放系统中MP经一鼻次性人工感染后普通级青紫兰兔肺泡周围分布最多,同时在鼻腔、咽、气管各段均有,且在感染第十四天,部分兔死亡,随后加剧,在21天内全部感染兔死亡,血液在感染第7－14天出现,并达最高值。清洁级昆明小鼠对MP不敏感,在感染49天中仅有1只死亡。同时血中抗体IgG在感染第7天达最高,随后逐渐下降,28天后几乎用间接ELISA法测不出来。小鼠感染0－14天内,M.Pul均可从鼻腔、咽、气管、肺分得,随后仅能从鼻咽部和气管分得。