花背蟾蜍早期发育中内胚层细胞核的分化

以细胞核移植的方法,探讨花背蟾蜍早期发育中内胚层细胞核的分化。实验按供体胚胎的不同发育时期分7组,并以囊胚期动物极区细胞核的移植作对照。结果表明:原肠晚期以前的内胚层细胞核与囊胚期动物极区细胞核一样,是尚未分化的,它们仍具有发育的全能性。从神经胚期开始,细胞核有了明显的分化,但这种分化是渐进的,至摄食期的蝌蚪仍有部分细胞核保持着促使卵子发育的功能。     

LiCl致畸的蟾蜍胚胎发育早期外胚层细胞核超微结构观察

花背蟾蜍Bufo raddei胚胎发育早期,原肠期外胚层细胞核内含有大量凝聚状的异染色质块。神经板形成后,神经外胚层细胞核内染色质多呈分散状态,到较晚阶段,细胞核内有一部分染色质又由分散状态转变为凝聚状态,利用LiCl在囊胚中期前处理,可产生明显的胚胎背前部化发育,这样的胚胎其外胚层细胞核内染色质的超微变化与未处理胚胎的一致。     

花背蟾蜍内胚层细胞核在核移植胚胎LDH表达上的等能性

研究了花背蟾蜍发育不同阶段内胚层细胞核为供体的核移植胚胎的LDH同工酶。发育20期之前的核移植胚胎整体的LDH同工酶谱均与发育同期正常受精的胚胎结果一致。发育20期之后,分别取肝、鳃、脑及肠进行分析,核移植胚胎的LDH同工酶表现也与对照组基本一致,表明花背蟾蜍早期发育不同阶段的内胚层细胞核在核移植胚胎LDH同工酶表达上具有全能性。     

移植不同发育时期的黑眶蟾蜍细胞核到成熟卵后其早期DNA合成的研究

本研究采用细胞核移植技术及同位素标记法测定不同发育时期的胚胎细胞核移入经针刺激活的成熟黑眶蟾蜍的卵中后,测定其早期胚胎DNA合成的情况。结果表明其第一次DNA合成的高峰期具有随供核胚胎发育时间的增加而推迟出现的趋势。据此说明分化程度越高的细胞核移入成熟的卵子后,在卵细胞质中进行调整和适应所需的时间越长。     

斑马鱼体细胞核移植——头肾细胞和尾鳍细胞核移入成熟具核卵子发育能力的初步研究

将经直接消化的斑马鱼头肾细胞或经短暂培养的尾鳍细胞核移植到同种成熟具核卵子中，移核卵可发育到原肠晚期；将移核卵发育成的囊胚细胞核作供体进行第2次核移植，受体卵可发育到尾芽期或肌肉感应期。流式细胞仪测定DNA含量表明，受体卵发育形成的囊胚细胞DNA含量与正常囊胚细胞DNA含量相同，由此可知，移核卵中的雌原核没有参与移核胚胎的发育。     

花背蟾蜍和中华大蟾蜍胚胎染色体组型分析

本研究用空气干燥制片法,以胚胎细胞为材料,对花背蟾蜍和中华大蟾蜍从囊胚期到尾芽期胚胎染色体的组型及其变化进行了比较分析。结果表明:两种蟾蜍发育各期的胚胎染色体均与其成体有基本相同的染色体组型。染色体绝对长度由囊胚列原肠晚期逐渐增长,神经胚期开始下降,尾芽期显著缩短。囊胚期染色体数目大多为四倍体。四倍体的出现率随发育时期的进展而逐渐减少,到神经胚期恢复正常。囊胚期分裂相中有额外随体,其出现率在不同染色体及其长、短臂上均无一定的规律。     

黑脊倒刺鱼巴原生殖细胞起源和迁移的研究

在显微及亚显微的水平上,对黑脊倒刺鱼巴原生殖细胞(PGCs)的起源和迁移的过程进行了研究.PGCs最早发现于低囊胚期的囊胚层,后来从早期胚胎的下胚层迁移到脏壁中胚层,再沿着肠系膜迁移到两侧的生殖嵴中,最终与生殖嵴细胞共同组成未分化的性腺.其迁移过程既与周围组织细胞的推动有关,也与其自身的主动迁移能力有关.     

影响体细胞核移植重构胚发育的因素

目前已有多种动物被成功克隆,但存在着诸多未知因素,使体细胞核移植重构胚发育至囊胚阶段的比例过低,克隆动物存在早衰等异常现象.该文围绕这产生这些现象的根本原因、高度分化的体细胞核移入卵质后所发生的分子事件以及其影响因素如体细胞的来源和培养代数、细胞周期、核质相互作用、细胞核再程序化、线粒体等方面对体细胞核移植重构胚发育的影响等进行综述.     

无尾两棲类心脏的决定与分化

内胚层在两栖类心脏发生过程中起着重要的作用。在有尾类神经期去除内胚层不能得到心脏的形成,心脏原基在尾芽期才能显示其自己分化的能力。在无尾类方面尚缺少系统的工作,本文用黑斑蛙Rana nigromaculata,泽蛙Rana limnocharis和狭口蛙 Callula borealis三种无尾类为材料,自原肠晚期至神经胚期进行下列三方面的实验研究。1.切除全部内胚层。2.分离心脏原基外植培养。3.取部分神经板与心脏原基一起外植培养。实验结果指出这三种无尾类在13期(早神经胚)心脏原基已开始显示其自己分化的能力,在缺少内胚层的情况下发育为分化程度不一的跳动的心脏结构。神经组织在早神经期并没有抑制心脏的发生,说明无尾类与有尾类不同,在早神经期的心脏原基已经充分决定,能按其预定意义分化。     

转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响

细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响.     

胚胎干细胞的研究及其在临床上的应用

胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞的一类未分化的全能性(多能性)干细胞，具有无限增殖和分化潜能。对其研究必将在发育生物学的基础理论、动物胚胎工程及临床医学等方面产生巨大影响，具有十分诱人的前景。     

人输卵管上皮细胞共培养系统对小鼠胚胎体外发育的影响

常规体外培养的胚胎桑椹胚以上发育率低,胚胎质量不高及移植环境不适合可能是导致IVF-ET成功率低下的原因。目前,国外一些实验室尝试将多种哺乳动物乃至人的胚胎与输卵管组织或上皮细胞进行共培养,发现有促进胚胎体外发育及提高妊娠率的作用,本课题组将人输卵管上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对胚胎体外发育及胚胎质量的影响。结果显示：共培养的胚胎24h后大部分发育到4细胞期以上,发育快的已达桑椹胚。培养48h后共培养的胚胎大部分发育成桑椹胚,有些已开始形成囊胚腔。到72h,正常发育的共培养胚胎形成囊胚和孵出囊胚。3个观察…     

客观地认识动物克隆问题

要获得遗传物质完全相同的生物体,必须应用克隆技术。克隆（ｃｌｏｎｅ）即无性繁殖系,指单一的亲代细胞通过无性繁殖而产生的一组细胞。克隆动物是把动物的细胞核转移到成熟的去核卵细胞质内而发育成的动物个体,它可分为胚型克隆和无性克隆两种。胚型克隆动物是指用早期胚胎细胞核作供体移植、克隆所形成的动物。其主要克隆方式有胚胎分割,胎细胞核移植、胚胎干细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植和胚胎嵌合。目前世界上已经完成了对小鼠、家兔、山羊、绵羊、猪、牛、马等动物的胚胎分割克隆;用胚胎细胞核移植技术克隆成功了小鼠、家兔…     

小鼠体细胞核移植及ES细胞样集落分离

利用小鼠皮肤成纤维细胞为核供体进行体细胞核移植并从重构胚中分离胚胎干细胞(ES)样集落,以便对体细胞核移植重构胚来源的ES细胞样集落进行研究.结果显示,小鼠皮肤成纤维细胞作为核供体,核移植重构胚激活率为60.48%(254/420),囊胚发育率为6.90%(29/420),6个囊胚中分离出ES细胞样集落,分离率为1.43%(6/420),3个ES细胞样集落能够稳定传代,至第5代时核型正常率分别为77.84%,75.18%,77.20%.分离出的ES细胞样集落具有岛屿状团状隆起结构,碱性磷酸酶染色呈阳性,体外可自发分化成上皮样或梭形细胞.实验证实小鼠唇部皮肤成纤维细胞能够支持体细胞核移植重构胚发育至囊胚,并能分离出可以稳定传代的ES细胞样集落.     

生活污水对黑眶蟾蜍胚胎及蝌蚪发育的影响

两栖类蝌蚪发育对环境污染比较敏感,可用于对环境污染的生物监测.观察了黑眶蟾蜍胚胎及蝌蚪在生活污水中的发育情况,可以看出随着污染浓度增大,表现为胚胎及蝌蚪死亡率增加,发育时期延长,蝌蚪的体重增加延迟,体长发育延迟,尾部萎缩过程延迟.结果表明:黑眶蟾蜍胚胎在生活污水浓度达到10%为致死量,8%为半致死量.蝌蚪在生活污水中浓度达到80%为致死量,60%为半致死量,50%对发育明显影响,甚至致畸,50%对体长和尾长的影响最为明显.     

日本沼虾胚胎复眼发生的研究

应用光镜技术和透射电镜技术,研究了日本沼虾胚胎复眼的发生.在原肠期,胚区前端的外胚层细胞增殖形成视叶原基.发育至后无节幼体期开始形成视神经节.在前蚤状幼体早期胚胎出现复眼色素，同时构成复眼的细胞开始分化。前蚤状幼体晚期，复眼色素区扩大到复眼直径的一半。复眼由个眼构成，每个个眼由角膜、角膜生成细胞、晶锥、小网膜细胞等组成。超微结构显示，胚胎的复眼结构与成体的相似，但感杆束直径比成体小。至胚胎孵化，眼柄尚未发育完善。     

IGF-Ⅰ及其受体在牛体外受精早期胚胎中的表达

采用成分明确的体外培养系统产生牛体外受精胚胎,结合荧光免疫定位的方法,利用激光共聚焦成像系统研究了在牛卵母细胞及不同发育阶段早期胚胎中IGF-Ⅰ及其受体的表达.结果表明,IGF-Ⅰ及其受体从未成熟的卵母细胞、成熟的卵母细胞到早期胚胎发育的各个阶段均有表达,在COC的颗粒细胞中也有表达.IGF-I在成熟卵母细胞中主要定位于细胞膜附近,在未成熟卵母细胞、2细胞期胚胎中分布于细胞膜及膜下区域,在8细胞期胚胎和桑椹胚中分布于整个细胞质中,在囊胚阶段主要位于滋胚层,内细胞团细胞有少量的表达.IGF-IR在未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞以及2细胞、8细胞期胚胎中集中分布于卵裂球远离胚胎中心的细胞膜上,在桑椹胚期时遍布于整个胚胎细胞的细胞质中,在囊胚期时主要分布在滋胚层,内细胞团细胞有少量表达.     

氯化锂对泥鳅胚胎发育的影响

研究了ＬｉＣｌ对泥鳅早期胚胎发育的影响。结果表明，ＬｉＣｌ对卵裂早期至神经胚期的形态发育有明显的致畸作用，不同发育时期的胚胎对ＬｉＣｌ的敏感性不同。ＬｉＣｌ对原肠期胚胎的致畸效应相对较强。     

鸟类胚胎消化道原基细胞分化的研究

本文用不同发育时期鹌鹑胚与鸡胚的种间移植实验结果表明,相当于鸡胚H.＆ H.17—23期的鹌鹑胚后肠原基尚不具备自主分化的潜能,只能并入寄主大肠发育,但不同区域的消化道中胚层间质细胞对内胚层细胞具有不同的诱导能力.相当于鸡胚H.＆ H.28—23期的鹌鹑胚后肠原基已具有自主分化的潜能,在寄主鸡胚体腔内能定向发育成鹌鹑大肠.本文还对移植系统中消化道原基细胞的分化进行了分析.     

冷冻中甘油对小鼠胚胎保护效果的研究

将小鼠２－细胞、４－细胞、８－细胞以及桑棋期的胚胎快速冷冻,以甘油作低温保护剂,浓度分别为０．５ｍｏｌ／Ｌ,１．５ｍｏｌ／Ｌ,２．５ｍｏｌ／Ｌ,３．５ｍｏｌＬ培养到囊胚阶段。结果表明：随着保护剂浓度的升高,胚胎发育率增加;在囊胚之前,发育程度越高,抗低温的能力越强,胚胎的发育率也就越高,各阶段组发育到囊胚期的胚胎经移植后均能得到正常发育的胎儿。