ERK信号转导通路在PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞增殖中的作用

了解ERK信号转导通路在PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞增殖中的作用.原代培养人脐动脉平滑肌细胞（hUASMC）,取生长正常的细胞分4组：对照组,PDGF（platelet derived growth factor）组,ERK阻断剂组和PDGF＋ERK阻断剂组.继续培养24h后,用免疫细胞化学技术测细胞核内核增殖抗原（PCNA）的表达;用MTT法测细胞的增殖活性.结果显示：1）与对照组相比,PDGF组细胞内PCNA 的表达明显增强,MTT法测得A值也升高（P〈0.01）.2）ERK阻断剂可完全抑制PDGF诱导的PCNA 的表达增多和A值的升高.结论：ERK信号转导通路参与了PDGF诱导的人动脉平滑肌细胞的增殖.     

人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

人类心房肌细胞的原代培养与鉴定

探索人心房肌细胞的原代培养方法。取心外科手术患者(5/12~57岁,平均6.5岁)常规切除的右心耳,利用酶消化法原代培养心房肌细胞并进行光镜和免疫细胞化学鉴定。结果急性分离的细胞成圆形,1 d后开始贴壁。贴壁的心肌细胞部分聚集成团,成梭形或三角形。随着培养时间延长,细胞逐渐向四周伸展。免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈横纹肌肌动蛋白染色阳性。说明利用酶消化法成功培养出人心房肌细胞,为深入研究人心房肌细胞基因与功能打下了基础。     

心脉隆胶囊对原代大鼠血管平滑肌细胞形态损伤的保护作用

目的:探讨大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的原代培养方法及观察心脉隆胶囊(XMLJ)对由H2O2诱导VSMCs细胞形态损伤的保护作用。方法:采用组织贴块法培养原代大鼠VSMCs,继而用62.5μmol.L-1H2O2损伤细胞,通过HE染色观察XMLJ对VSMCs形态损伤的保护作用。结果:200μg.mL-1的XMLJ对过氧应激造成的VSMCs形态损伤,具有明显的保护作用,细胞形态接近于正常组VSMCs。结论:组织贴块法培养大鼠VSMCs方便简单,XMLJ对H2O2诱导的VSMCs细胞形态损伤具有一定的保护作用。     

人心房成纤维细胞体外组织块贴壁培养与鉴定

从建立体外循环将进行心脏手术的风湿性心脏病患者体内无菌下取心脏停跳前右心耳组织，采用组织块贴壁法进行心房成纤维细胞的分离培养，通过光学显微镜观察培养后的细胞形态，并通过免疫细胞化学的方法鉴定所分离培养的细胞。贴壁4—6d后可见长梭形贴壁生长的细胞游离出组织块，细胞生长迅速，2—3d后即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，胞体较大，细胞浆透明，细胞核较大，呈椭圆形，无自发性搏动。免疫细胞化学检测显示所培养细胞波形蛋白呈阳性反应。通过组织块贴壁法顺利分离人心房成纤维细胞。     

豚鼠气管平滑肌细胞培养

目的 建立一种简便、快捷的豚鼠气管平滑肌细胞培养方法。方法 幼年豚鼠气管平滑肌组织块原代培养 法。结果 豚鼠气管平滑肌组织块贴壁5～8d后可见细胞自组织块周围长出,细胞长梭形,核位于中央,呈辐射状 向四周生长。两周后细胞长满瓶壁。经α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-smooth muscle actin monoclonal antibody, α-SMA)免疫组化染色鉴定,获得的细胞为平滑肌细胞。结论 豚鼠气管平滑肌组织块培养法可快速获得数量充足 的气管平滑肌细胞。     

组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的方法研究

实验应用SD雄性大鼠的外周肺组织,进行大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)的原代培养和传代培养,并从实验动物、培养基、操作条件、剪块方法、植块方法等细节方面对组织块法培养RPMVEC的方法进行探讨改进.同时,对培养细胞进行Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构,通过MTT观察细胞生长情况.体外培养的原代RPMVEC在光镜下呈多角形或梭形,胞核清晰,呈卵圆形.细胞单层呈典型的铺路石样排列.细胞生长状态良好、抗Ⅷ因子相关抗原染色阳性.透射电镜可见Weibel-palade小体.改进后的组织块培养法获取RPMVEC的成功率高,污染几率低,细胞活力好,纯度高,数量大,同时保有了PMVEC的结构和功能,可用于进一步的实验研究.     

兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的为构建组织工程化尿道提供种子细胞。方法切取新西兰兔阴茎头．采用组织块贴壁培养法体外原代培养，光镜、HE染色等观察细胞形态，MTT法作生长曲线间接反应细胞增殖能力，以及免疫组化法鉴定细胞本质。结果经10～14d养后，培养瓶底铺满梭状细胞，呈明显的“峰一谷”样生长。免疫组化法鉴定确认为尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞组织块贴壁法培养简便可靠，细胞可大量扩增，可为于组织工程尿道构建的研究提供种子细胞。     

不同还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察三种还原性巯基氨基酸对人血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),在培养液中分别加入三种不同浓度的还原性巯基氨基酸(Hcy,Cys,GSH)对VSMCs进行刺激,24h后同MTT比色法测定细胞的活力,<'3>H-TdR测定细胞的增殖率.结果:随浓度增加.Hcy和Cys明显促进VSMCs增殖,Hcy的作用略强于Cys;GSH只有在极高浓度时(1000umol/L)才显著促进VSMCs增殖.结论:极高浓度的Hcy、Cys、GSH均可促进VSMCs增殖.     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

小断面收缩率轴类零件楔横轧成形的可行性分析

利用ANSYS/LS-DYNA软件,对楔横轧小断面收缩率轴类零件的成形过程进行了有限元数值模拟,通过与常规断面收缩率轧件对比,分析了小断面收缩率轧件的表面和心部质量情况.结果表明:相同工艺参数条件下,小断面收缩率轧件横截面的椭圆度大于常规断面收缩率轧件;由于小断面收缩率轧件中心点处的平均应力和最大主应力均较大,因而更容易发生心部缺陷.提出了改善轧件表面和心部质量的措施.经轧制实验验证,楔横轧成形小断面收缩率轴类零件是可行的.     

基于PWM控制电子束焊机高压电源的研究

电子束焊机焊接过程中发生放电会造成焊缝缺陷,严重影响焊接质量,甚至使工件报废。介绍了一种能有效防止高压放电时所带来的危害,实现电源的快速保护。避免了因高压放电造成的焊接缺陷,保证了精密焊件的成功焊接。     

数学娱乐(六)——移棋相间

移棋相间(移动白色棋子和黑色棋子变成黑色棋子和白色棋子相间)是一个悬而未决的问题,本文获得一般的移动棋子规律.     

象棋机器人棋子定位和身份判定方法

针对象棋机器人系统中棋子定位过程烦琐、误差大及通过文字识别棋子的算法复杂度高的问题,提出一种基于图像处理的棋子定位和高度测量方法;以及棋子身份判定算法。首先,根据文字的颜色特征分割棋子并对二值图像做线性融合和膨胀运算;通过绘制轮廓外接圆定位棋子。然后,匹配RGB与RGB-D图像结合数学模型,测量棋子高度。其次,用数字编码定义棋子身份并实时判定。最后,结果表明,方法的棋子分割正确率100%,定位误差0. 51 mm,平均定位时间0. 212 s。高度测量误差1 mm。单流程棋子身份判定算法和系统运行时间分别为9 ms和0. 224 s、可见方法的有效性和实用性。     

圆柱件无鼓镦粗的模拟研究

采用了圆柱件端面制凹的方法，通过模拟研究得出圆柱件镦粗时所产生的鼓形与压下率，凹形比和高径比的关系式。该式可用于无鼓镦粗和微鼓镦粗的工艺参数设计，并为定量计算圆柱件镦粗时产生的鼓形值提供了又一算式。     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

探讨更为简单的SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,为临床应用建立心肌细胞模型.取出生24 h内SD大鼠的左心室,剪碎、消化、分离和纯化,进行培养,0.1 g/L胰酶消化,可以分离到形态完整、贴壁生长的心肌细胞.进一步通过离心、差速贴壁和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化得到95%以上的心肌细胞.成功建立了心肌细胞体外培养模型,获得了高纯度的心肌细胞.     

双酶法水解对大豆寡肽苦味的影响

大豆寡肽具有多种生理功能,但大豆分离蛋白在酶水解过程中生成的苦味限制了大豆寡肽在食品中的应用．文中利用单一酶Promatex和双酶Promatex／Flavourzyme对大豆分离蛋白进行水解,在相同的水解度和肽链长度下,比较水解方法对大豆寡肽溶液苦味的影响．结果表明,采用双酶Promatex／Flavourzyme分步水解大豆分离蛋白生产大豆寡肽,不但水解液的苦味值大大降低,而且生产周期明显缩短．     

喇叭裙丝绺方向及裙片数对造型效果的影响

在了解喇叭裙结构和工艺的基础上,通过实验研究喇叭裙的最佳丝绺方向和裙片数．选用同一种面料,并按不同斜裁角度,不同裙片数量制作成喇叭裙,然后通过拍照进行数据处理,得出斜裁角度及裙片数对喇叭裙外观形态的影响以及最佳斜裁角度及裙片数,从而优化喇叭裙的外观形态．结果表明,选用涤棉混纺面料制作喇叭裙时,在裙片数相同时,各片中线沿面料经向裁剪制作出的喇叭裙外观形态较好;在喇叭裙各片中线与面料经向夹角相同时,10片裙的外观形态较好．     

分片代数曲面的绘制

提出了一种基于多边形化的分片代数曲面的绘制方法．首先，计算每一个单元所处的片的序号，接着计算它们和曲面的所有的交点形成一个多边形，然后将这个多边形分解成若干个三角形使得每一个三角形都落在同一片曲面上．在该方法中，每一片被染上不同的颜色以便对它们进行局部的控制．最后给出了一些例子以说明这个方法的有效．