抗纤维结合素单克隆抗体与自身抗原组蛋白免疫交叉反应的…

应用免疫扩散和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ分析证实了抗纤维结合素（ＦＮ）单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫学交叉反应。通过计算机技术进一步分析了交叉反应的分子基础。在组蛋白和ＦＮ之间有５个氨基酸序列同源性区域被发现。同源性区域与Ｐｏｌｌａｒｄ所预测的组蛋白抗原决定族相一致。根据抗原抗体反应的物理学，化学和免疫学特性，讨论了单克隆抗体与不相关抗原发生交叉反应的可能原因。包括：１．分子模拟－氨基酸序列同源     

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋自的免疫交叉反应研究

WesternBlot实验证实了结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）H37Ra的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应．利用计算机软件对交叉反应的分子生物学基础进行了分析,发现结核分枝杆菌H37Ra的蛋白与组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4各有一个包含3个或4个氨基酸的序列同源区域．     

结核分枝杆菌单克隆抗体与自身抗原组蛋白的免疫交叉反应研究

ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验证实了结核分枝杆菌的Ｈ３７Ｒａ的单克隆抗体与自身抗原组蛋白发生免疫交叉反应。     

结核分枝杆菌特异性抗原的N末端氨基酸序列分析

把ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析抗原抗体反应的高度特异性与ＰＶＤＦ膜作为载体进行蛋白质氨基酸序列分析的高度敏感性相结合对结核分枝菌的特异性抗原表位刊物筛选和分析鉴定,获得了一个分子质量为３１ｋｕ,Ｎ末端为ＡｌａＧｌｕＶａｌＡｓｐＬｅｕＶａｌＰｈｅＡｌａＶａｌＳｅｒＴｒｐＰｒｏＶａｌＧｌｙ的结核分枝杆菌抗原。     

皖南尖吻蝮蛇毒出血毒素Ⅰ氨基酸序列初步研究

中国皖南尖吻蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）毒出血毒素Ｉ（ＡａＨＩ）氨基酸序列得到初步测定．ＡａＨＩ的Ｎ端１３个残基序列为ＳＴＥＦＱＲＹＭＥＩＶＩＶ．序列比较表明ＡａＨＩ与其它种属来源的低分子量（２０～２４ｋＤ）蛇毒出血毒素和金属蛋白酶有较高的同源性．     

椭圆偏振光谱法研究固——液界面上抗原体反应

用气相沉各法将Ｎ－β（氨乙基）ｒ－氨丙基三甲氧基硅烷沉积在单晶硅表面上，并用戊二醛将正常兔ＩｇＧ抗原固定在硅烷化后的单晶硅表面上，然后用椭圆偏振光谱法固－液界面上的正常兔ＩｇＧ抗原与羊－抗兔抗体反应进行了研究，结果表明该方法能直接研究抗原抗体反应，具有较高的特异性和灵敏性，克服了现代了免疫学研究中的需要第二特征为指针的缺陷。     

5—NO2phen合Fe（Ⅱ）对B—Z振荡反应的催化作用

研究了 Ｆｅ（Ⅱ）的 ５－ＮＯ２ｐｈｅｎ配合物对Ｂｅｌｏｚｏｖ－Ｚｈａｂｏｔｉｎｓｋｉｉ振荡反应的催化作用；从与 Ｆｅ（Ⅱ）的 ｐｈｅｎ，ｂｉｐｙ，ｔｅｒｐｙ 配合物的相互比较（催化参数、酸的影响等）出发，对该化合物的催化特点进行了讨论。最后，给出 Ｆｅ（Ⅱ）的 ５－ＮＯ２ｐｈｅｎ配合物催化Ｂ－Ｚ振荡反应各组分的浓度范围和优势区域图。     

化学探针方法研究固氮酶M—簇和P—簇对的结构与功能关系

根据配位催化原理和化学探针思路，推断了野生菌固氮酶在酶促固氮反应中（Ｍｏ）位直接参与结合分子氮（Ｎ＝Ｎ）；论证了固氮酶钼铁蛋白Ｍ－簇（Ｋｉｍ－Ｒｅｓｓ模型）必须是活口的钼－铁－硫原子簇笼，对底物和抑制剂有人子识别能力，只有Ｎ＝Ｎ才能作为底物络合在（Ｍｏ－３Ｆｅ，３Ｆｅ）七核活性中心，而且必须有一条质子（和电子）接力传递链到达（Ｍｏ）位，Ｎ＝Ｎ才能排去氢基配体而进到（Ｍｏ）位，（否则就只能象ＨＣ＝Ｃ     

扩展青霉（Penicilliumexpansum）PF868脂肪酶的纯化 …

扩展青霉（Ｐ．ｅｘｐａｎｓｕｍ）ＰＦ８６８所脂肪酶通过硫酸铵沉淀纤维素柱层析以及Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ２００柱层析等步骤被纯化了７４倍。最终比活力为６９．７ｕ／ｍｇ。纯化后的脂肪酶经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯和微内径高效液相色谱纯。分子量经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ确定为２８．４４ＫＤ。脂肪酶Ｎ－端氨基酸序列测定的结果是：ＡＴＡＤＡＡＡＡＦＰＤ－这与其他一些真菌产的脂肪酶的序列具有国闫的同源性。     

抗基因工程人rIFN-γ杂交瘤细胞株的建立

用杂交瘤技术将基因工程人γ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）免疫的Ｂ淋巴细胞与ｓｐ２／０鼠骨髓瘤细胞融合，建立了 ３株抗 ｒＩＦＮ－γ杂交瘤细胞株。这些细胞株经两年多的传代培养仍保持稳定分泌抗体的能力，并与ｒＩＦＮ－γ及新型γ－干扰素呈特异性反应，可用于亲和层析纯化γ－干扰素．     

蒙古鮊ob基因的克隆与组织表达特异性的初步研究

根据已知的人和鼠ob基因序列设计引物,通过运用RT-PCR技术首次从蒙古鮊脂肪组织的RNA中扩增获得ob基因片段,并经序列分析证实为ob基因编码区438 bp的序列.不同物种同源性比较表明ob基因序列具有很高的保守性:蒙古鮊与人、猪和鼠的ob基因核苷酸编码序列的同源性分别为82.9%、84.0%和99.1%;蒙古鮊ob基因编码的蛋白leptin氨基酸序列与人、猪和鼠氨基酸同源性分别为80.8%、78.8%和95.9%.用RT-PCR技术分析组织ob基因的表达特异性,结果表明:ob基因在脂肪和肝脏组织中的表达量最大,在心脏、脾脏、肌肉、脑、卵巢中的表达量次之,在肾脏中仅微量表达,而在精巢和肠道组织中则不表达.     

扇形游仆虫谷胱甘肽过氧化物酶cDNA的克隆及序列特征分析

采用cDNA 末端快速扩增( rapid amplification of cDNA ends,RACE) 技术,对纤毛虫原生动物扇形游仆虫（Euplotes vannus）GPx cDNA特征进行分析. 克隆到扇形游仆虫GPx cDNA全长序列为672bp,该序列编码182个氨基酸,属硫氧还蛋白超家族,且具有一定的保守性,含有3个催化残基和3个特征性基序．氨基酸序列进化分析结果表明,扇形游仆虫与其他纤毛虫物种同源性较高,亲缘关系较近,研究结果为扇形游仆虫GPx在生态毒理学的应用提供基础信息．     

SlNPV多角体蛋白基因的序列分析

ＳｌＮＰＶ多角体蛋白基因的开放读码框为７５０ｂｐ,编码２４９个氨基酸的蛋白质,是目前所发现的最长的多角体蛋白基因．ＳｌＮＰＶ多角体蛋白Ｍｒ＝２９２３６,其氨基酸序列与其它核多角体病毒的多角体蛋白氨基酸序列有高度同源性．     

胀果甘草查尔酮合成酶基因cDNA的克隆及序列分析

为进一步利用基因工程手段调控甘草黄酮的合成,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从胀果甘草愈伤组织中克隆查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因的cDNA,运用DNAMAN软件对序列进行分析,运用PHYLIP 3.67软件绘制系统进化树.克隆得到的基因片段全长为1 170 bp,包含1个完整的开放阅读框架(ORF),编码1个由389个氨基酸残基组成的多肽.该基因片段与紫花苜蓿、大豆、豌豆等几种豆科植物的CHS核苷酸同源率高达80%以上,氨基酸同源率高达90%以上.表明克隆得到了胀果甘草chs基因cDNA,序列提交GenBank注册,序列号为EU706287.     

鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析

新城疫病毒（NDV）ND-xx08毒株经10 d龄SPF鸡胚增殖后,提取其基因组RNA并反转录成cDNA,用NDV F基因特异性引物,经PCR扩增后获得与F基因预期大小一致的DNA片段。将NDV F基因片段克隆到pMD18-T载体上,并进行EcoR I和Hind III双酶切鉴定和测序鉴定。结果显示,ND-xx08毒株F基因片段的长度为1 662 bp,共编码554个氨基酸,F蛋白的裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株氨基酸序列结构。将NDV ND-xx08株F基因的47 bp到420 bp序列与新城疫病毒基因型I至基因型Ⅸ毒株的相同序列绘制病毒基因进化树,显示ND-xx08分离株属于基因Ⅶe型。将NDV ND-xx08株F全基因与国内外发表的23株NDV F基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较分析,结果表明,其核苷酸序列的同源性在82.7%~97.8%之间,氨基酸同源性在87.5%~97.7%之间。     

锯缘青蟹精氨酸激酶基因的克隆与表达

通过分子生物学方法,克隆得到锯缘青蟹（Scylla serrata）精氨酸激酶（Arginine Kinase,AK）开放阅读框基因序列.测序结果显示：该开放阅读框基因的序列长度为1 071 bp,编码356个氨基酸残基;该序列登录Genbank（GQ：851626）,序列比对结果显示,锯缘青蟹精氨酸激酶与凡纳滨对虾（...     

Nucleotide sequence and formation of the transforming gene of a mouse sarcoma virus

The complete nucleotide sequence of the transforming gene of a mouse sarcoma virus has been determined. It codes for a protein of 374 amino acids. The nucleotide sequence of the junctions between a murine leukaemia virus and cellular sequences leading to the formation of the viral transforming gene have also been elucidated. The viral transforming sequence and its cellular homologue share an uninterrupted stretch of 1,159 nucleotides, with few base substitutions. The predicted amino acid sequence of the mouse sarcoma virus transforming gene was found to share considerable homology with the proposed amino acid sequence of the avian sarcoma virus oncogene (src) product.     

长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达

目的 分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C,CST3)cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础。方法 对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证。结果 长爪沙鼠Cst3基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低。密码子优化后的长爪沙鼠Cst3表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体。经1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导12 h,可获得大量CST3蛋白。结论 成功地构建了长爪沙鼠CST3蛋白的体外表达体系。     

Genome organization and phylogenetic tree analysis of Garlic virus E, a new member of genus Allexivirus

The complete sequence of an Allexivirus isolated from garlic plants in Yuhang City, Zhejiang Province, China had been determined. The single-strand, positive RNA genome was 8451 nucleotides in length excluding poly(A) tail. The genome organization of this virus was similar to that of the other Allexiviruses but only with 62.8%-64.8% nucleotide acid identities. The amino acid sequences of proteins encoded by ORF1-6 shared 67.6%-78.5%, 55.4%-66.2%, 56.7%- 66.4%, 40.3%-55.6%, 66.3%-79.7% and 52.2%- 68.8% identities with those of the others respectively. The homology range between it and the other Allexiviruses was similar to that between the other distinct species in this genus. A more comprehensive comparison using all available CP amino acid sequences showed that it shared only 63.9%- 79.8% amino acids identical with the others. Therefore, it had been considered as a new member of the genus, named as garlic virus E (GarV-E). Phylogenetic analysis confirmed GarV-E as a distinct member and the correct names and classification of some members of genus Allexivirus were also discussed.     

水稻几丁质酶基因(Oschi)cDNA的克隆及序列分析

 以成功克隆大蕉几丁质酶基因（MpChi-1）时设计的一对引物,采用RT-PCR技术从广亲和水稻品种（Oryza．satival L．Cpslo17）中扩增到一水稻几丁质酶的全长cDNA,长1 115 bp,命名为Oschi;此序列已在GenBank中注册,登录号为EU045451;将Oschi基因核苷酸测序结果在NCBI服务器上用BLAST搜索软件进行同源性基因检索;并将Oschi的cDNA序列及氨基酸序列与大蕉及其它单子叶植物的相应序列进行多重序列排列比较并构建系统树;结果显示此基因具有编码Ⅰ类几丁质酶的基本结构;与大蕉核苷酸序列相比同源性为99%,氨基酸序列同源性为99%,与预测登记的最相近的水稻［Oryza sativa(japonica cultivar-group)］核苷酸序列相比同源性为98%, 氨基酸序列同源性为98%;广亲和水稻Oschi基因与大蕉MpChi-1基因的序列及蛋白结构有较高的一致性。