中国新记录种毛细木霉Trichoderma capillare及功能评价

木霉菌株TW22166分离自湖南省洞庭湖滩涂湿地,该菌株分生孢子梗具有长而发达的主轴,二次分枝丰富,不规则,一般单生,分生孢子梗向顶方向着生单个瓶梗。利用ITS、tef1及rpb2序列分析,发现该菌株同Trichoderma capillare同源性达到99%以上;在以rpb2构建的系统发育进化树中,TW22166与Trichoderma capillare strain GJS 06 66 ［JN175530-1］位于同一分支。该菌株在PDA平板上对9种植物病原真菌均有抑制作用,其中对Fusariumoxysporum的抑制率为1000%。菌株具有蛋白酶、几丁质酶及纤维素酶活性,其中蛋白酶活性较高,透明圈宽度达160 mm。该菌株鉴定为毛细木霉Trichoderma capillare,是木霉属中国新记录种,也是一株较有潜力的生物防治菌株。     

防治西洋参立枯病木霉菌株的筛选鉴定及其小区防治效果

摘要：利用平板对峙实验及小区试验,筛选高效防治西洋参立枯病的木霉菌株,并采用ITS（internal transcribed spacer)序列分析与形态学特征相结合的方法进行种类鉴定。结果表明,供试木霉菌株在PDA平板上对立枯丝核菌(R. solani)均有抑制作用,菌株HB20111效果最好,抑制率达99.33%;菌株HB20111对西洋参立枯病的小区效果显著,与其他处理间存在显著性差异(P<0.05);第1年拌种处理对西洋参立枯病的防治效果、单株参增重率及总参增重率分别达71.81%、33.54%和92.75%;第2年蘸根处理对西洋参立枯病的防治效果、单株参增重率及总参增重率分别达91.04%、158.06%和1 369.34%;菌株HB20111的分生孢子梗为典型的单侧分枝,其他形态学特征同深绿木霉(T. atroviride)一致,ITS序列与T. atroviride同源性达100.0%,将菌株HB20111鉴定为T. atroviride。HB20111生长速度快,产孢能力强,生防效果高,有望替代化学杀菌剂应用于西洋参种植中。     

一株盖姆斯木霉TW20050的鉴定及功能评价

明确木霉菌株TW20050的分类地位,并评价其生物学功能。通过形态学特征结合ITS、tef1及rpb2序列分析进行种类鉴定,利用菌丝生长速率法测定菌株的抑菌能力,利用透明圈大小定性检测菌株的水解酶活性。结果表明:菌株TW20050的形态学特征与Trichoderma gamsii一致,其ITS、tef1和rpb2序列与Trichoderma gamsii的同源性均达到99%以上,在以rpb2构建的系统发育进化树中,TW20050与Trichoderma gamsii strain S488[KJ665270.1]位于同一分支。菌株TW20050在PDA平板上对10种植物病原真菌均有抑制作用,对终极腐霉的抑制率最高,达92.0%。菌株TW20050具有蛋白酶、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶及纤维素酶活性,其中蛋白酶活性和纤维素酶活性较高,透明圈宽度分别为9.8 mm和6.5 mm。综合形态学特征和序列分析,将菌株TW20050鉴定为盖姆斯木霉。菌株TW20050不但对植物病原真菌具有广谱抗性,而且具有多种水解酶活性,是一株较有潜力的生物防治菌株。     

鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌的种类鉴定及其寄主范围测定

鉴定鸡蛋花鞘锈菌Coleosporium plumeriae重寄生真菌的种类,明确其寄主范围,为鸡蛋花锈病及其他植物锈病的生物防治提供依据。通过分离和纯化鸡蛋花锈病叶背夏孢子堆上的重寄生真菌,经单孢纯化获得12个单孢菌株,其菌落及分生孢子特征一致,菌落白色,分生孢子近圆形或卵圆形,单胞,无色,呈头状聚生在分生孢子梗顶端。选取菌株PR-CPH1作为代表,分析3个片段的核苷酸序列,PR-CPH1的ITS(MW505984)、SSU(MW505988)和LSU(MW505987)序列与Simplicillium subtropicum的ITS(AB603990)、SSU(LC496895)和LSU(LC496880)序列的一致性分别为99.00%、98.11%和98.11%。系统发育树分析发现,菌株PR-CPH1的ITS-SSU-LSU联合序列与S.subtropicum(菌株号：JCM18180)聚在同一个分支。结合形态特征和ITS、SSU、LSU的序列分析,鉴定鸡蛋花鞘锈菌重寄生真菌为S.subtropicum。测定S.subtropicum寄主范围的结果显示,在8种植物锈菌中,菌株PR...     

枝孢菌危害葡萄果实症状发病原因与防治

1991年我院实习农场保护地葡萄,落花后十天左右,突然发生严重落果。取病果粒表面菌镜检,其病原菌形态特征是:分生孢子梗微淡褐色,直立,有4～6个分隔,近顶部有2～3次分枝,分枝顶端串生分生孢子,分生孢子单胞、无色、卵圆形,大小为10～15×5～7μm.分生孢子梗和分生孢子成簇于病果表面时,呈淡褐色。     

豇豆枯萎病病原分离鉴定

通过采集武汉市豇豆种植区豇豆枯萎病病株,经常规组织分离法分离纯化获得菌株JKW-1、JKW-2和JKW-3,并对3个菌株进行致病性测定、形态学及分子生物学鉴定.结果表明,3个菌株均为致病的镰刀菌,其中菌株JKW-1和JKW-2菌落色泽为紫红色,JKW-3菌落色泽为白色,均能产生大型分生孢子、小型分生孢子和厚垣孢子,但在菌落形态、产孢量、分生孢子大小等方面存在差异;对这3个菌株的核糖体RNA基因内转录间隔区(rDNA-ITS)进行了PCR扩增和序列测定,并在GenBank中进行Blast搜索和比对分析,根据rDNA-ITS序列分析结果结合豇豆病株症状和病菌的形态学特征,判定引起武汉市豇豆枯萎病的病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.).     

PS0312产色素青霉菌株形态及其重要生物学的研究

PS0312是一从土样分离获得产色素菌株，菌株代谢产生的色素物质在pH=1—3的溶液中呈黄色、4～6为橘红色、7—9显红褐色，〉10为紫红色。菌株的气生菌丝形成分生孢子梗，分生孢子梗上部多分1次，少不分技，罕分枝2次，顶端产生小梗，帚状枝单束顶端急剧变细；分生孢子梨形，梗上分生3—6个产孢细胞，顶端着分生孢子，PS0312为一青霉菌株（Penicilliumsp．）。PS0312菌株的生长温度为10℃-35℃，最适生长温度为320C；生长pH=1—10，适宜生长的pH=2—10，最适pH=3；葡萄糖为菌株利用的最佳碳源；无机氮源中以（NH4）2SO4对菌株的生长最为有利，牛肉膏、蛋白胨及酵母膏对菌株生长速率有影响，但尿素有机氮对菌株的生长不利。     

黄河三角洲湿地木霉分离与耐盐活性鉴定

木霉菌可以提高植物的抗逆性。为了获得耐盐活性好的木霉菌株,本研究从盐渍化严重的山东东营黄河三角洲湿地中采集土样和水样,分离并筛选了耐盐的木霉菌株,鉴定木霉菌株的耐盐活性。结果表明:黄河三角洲湿地48个样品共分离获得64株木霉,木霉数量与土壤深度呈负相关,与盐度没有明显相关性;通过不同浓度Na Cl胁迫下木霉菌株在固体培养基(PDA)和液体培养基(PDW)中的生长和产孢情况观察,从64株木霉中鉴定出6株具有高耐盐活性的木霉菌株;其中3株木霉(TW-304、TW-327和TW-353)在1 000 mmol/L Na Cl胁迫下,菌丝生长与对照相比,耐盐活性达到50%以上,具有极高的耐盐性;通过形态学和分子学鉴定显示TW-304、TW-327和TW-353三株木霉分别为哈茨木霉、深绿木霉、哈茨木霉。该研究筛选获得的耐盐木霉菌株为耐盐微生物菌剂的开发利用提供新的种质资源。     

荒漠生境下双网无梗囊霉(Acaulospora bireticulata)的遗传特征

为了阐明荒漠生境下双网无梗囊霉(Acaulospora bireticulata)的遗传多样性,2010年7月从河北省与内蒙古交界处选择多伦、黑城子、二羊点、元上都和正蓝旗5个样地,按0～50cm土层分别采集柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)、沙蒿(Artemisia sphaerocephala)、羊柴(Hedysalum leave)和沙柳(Salix psammophila)等4种植物根围土壤样品.研究了AM真菌与土壤因子和宿主植物的相互关系.对不同样地各个宿主植物双网无梗囊霉进行了RAPD(random amplified polymorphic DNA)分析,每个菌株都出现了1 000,540,480bp条带;进一步测得了18S到28S间的DNA片段序列,进行序列比对后,不同菌株间遗传距离最大只有0.008,DNA序列间无显著差异,存在的碱基差异主要出现在28S区域.发现土壤因子和宿主植物对双网无梗囊霉遗传特征无明显影响.说明双网无梗囊霉分布具有广谱性.     

绿色木霉LTR-2的ATMT插入突变及5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮高产菌株的筛选

通过土壤杆菌介导的T-DNA转化方法,利用土壤杆菌菌株携带的Ti质粒,对绿色木霉LTR-2进行插入突变,获得木霉LTR-2突变体共400株。以串珠镰孢菌为指示菌,采用抑菌圈方法,从中筛选吡喃酮高产突变体6株,PCR和探针杂交证实,T-DNA序列已经插入到木霉LTR-2基因组。经GC-MS分析发现,其中一株突变体T-54在PDA培养基上产生的吡喃酮含量较高,在分生孢子中的含量达到了2.62 mg/g,比出发菌株提高9倍。     

里氏木霉产酶菌株的选育研究

采用紫外线和亚硝酸联合诱变技术,得到产纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶的高产的菌株里氏木霉Y07.试验表明,诱变后菌株的木聚糖酶活由325 U/g,提高到28 500 U/g,相对于出发菌株提高了88倍;纤维素酶活由560 U/g,提高到2600 U/g,相对于出发菌株提高了4.6倍;β-葡聚糖酶活由480 U/g,提高到5500 U/g,相对于出发菌株提高了11.5倍.     

木霉菌株T11-W的鉴定及其对南方根结线虫卵的寄生性研究

采用经典实验方法和分子鉴定技术进行了木霉菌株T11-W的鉴定及其对南方根结线虫分散卵的寄生性研究。结果表明,T11-W为哈茨木霉(Trichoderma harzianum),对南方根结线虫分散卵具有寄生作用,校正寄生率为73.46%,相对孵化抑制率为94.19%。本文丰富了木霉菌防治南方根结线虫的理论研究,对哈茨木霉作为新型、高效的微生物杀线剂的生产具有一定的指导意义。     

多功能植病生防木霉的分离筛选与鉴定

从采集的120份土壤样品中分离获得木霉244株。对峙培养发现其中对棉花立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）具有拮抗能力的有114株;固体培养检测木霉的解磷和固氮能力,发现所有菌株都能够水解植酸钙,有74株能够水解磷酸钙,未发现具有固氮能力的菌株。对抑菌圈和解磷圈最大的19株木霉在液体培养条件下检测了解磷和解钾能力,其中菌株T13—8（1．792μg／mL）、123（1．652μg／mL）显示出较高的解磷能力,部分菌株在液体培养条件下不能解磷;部分菌株在液体培养下显示出解钾功能,其中菌株T47-4（20．585μg／mL）显示出较高的解钾能力。上述19个菌株的形态学和ITS序列分析鉴定表明,其中9个菌株为Trichoderma longibrachiatum,8个菌株为rharzianum,另外2个菌株分别为rvirens和zcitrinoviride。     

木霉T11-W及苹果枝条木屑对黄瓜幼苗生长的影响

为探寻苹果树修剪枝条资源化快速利用的方法,以黄瓜（津研四号）为试材,分别测定了苹果枝条培养木霉T11-W后(处理木屑)和同时添加木霉对盆栽黄瓜幼苗生长发育的影响,并与不同添加量的未处理苹果枝条（原木屑）处理和单独木霉T11-W处理进行对比。结果显示：单独木霉T11-W处理对黄瓜幼苗生长促进效应最为显著;原木屑质量分数为0.7%时,添加木霉可改善其对根长的抑制,并能进一步提高根的干物质量;木霉+木屑处理(处理木屑或原木屑)综合评价虽不如单独木霉T11-W处理,但根冠比最高;原木屑处理用量0.35%时,对黄瓜幼苗生长的综合促进作用弱于空白对照,用量0.7%时,促进作用高于空白对照,表明原木屑添加量大,利于黄瓜幼苗生长;木屑在0.35%使用量时,处理木屑对黄瓜幼苗的促生长作用优于原木屑处理。     

木霉菌制剂对禾谷全蚀病的防治作用

木霉菌是对多种植物病原真菌有作用的拮抗体,包括Gaeumannomyces graminis var.tritici(Ggt),Pythium spp.,Rhizoctonia solani以及Fusarium spp．木霉菌能产生抑制植物病原真菌生长与活力的抗菌物质,是理想的植物病害生物防治菌。有效的生物防治方法可为农民提供低风险而又灵活的病害防治措施,特别是在需要减缓病原菌对化学杀菌剂产生抗药性的情况下。本文综合介绍了在南澳大利亚田间进行的利用康宁木霉菌(T.koningii)防治禾谷类根部病害的结果,并重点介绍澳大利亚在商品化开发方面的工作进展。在病害发生严重的情况下,康宁木霉菌可降低小麦全蚀病和丝核菌根腐病发病程度分别达2,4％和48％。小麦产量增加7％,也能降低大麦丝核菌根腐病发病程度达59％。康宁木霉菌也能够防治由Ceratocystis paradoxa引起的甘蔗凤梨病。     

抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株的筛选及其抑菌机理

筛选得到一株可有效抑制姜瘟青枯假单胞菌的木霉菌株SMF2(Tricoderma spp SMF2)，证实其胞外分泌的抗生素--木霉素是抑制姜瘟菌生长的主要物质，该物质对热稳定，固体发酵是培养木霉制剂的有效方法，并对培养基的组成、培养条件进行了初步优化。     

食用菌木霉种类鉴定

从不同食用菌上分离到57株木霉,按Rifai和Bissett的分类系统共鉴定出6种木霉：康氏木霉（Trichoderma koningii）、拟康木霉（Trichoderma pseudokoningii）、哈茨木霉（Trichodema harzianum）、桔绿木霉（Trichoderma citrinviride）、长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）和非钩木霉（Trichodema inhamatum）。首次从白灵菇的培养基质上分离到了非钩木霉、康氏木霉和拟康木霉,后两种是食用菌上木霉的优势种,分别占总菌株数的50．87％和26．32％。     

刺松藻内生真菌长枝木霉的化学成分研究

对烟台近岸的绿藻刺松藻来源的一株内生真菌长枝木霉的次生代谢产物进行了探索.通过硅胶柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱层析、制备薄层层析和高效液相色谱等色谱分离手段,以及超导核磁共振等波谱鉴定技术,从该菌的马铃薯-葡萄糖和菊芋-葡萄糖液体培养基发酵产物中继续分离并鉴定了5个化合物,包括5α,8α-环氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇（1）;麦角-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇（2）;β-谷甾醇（3）;5-羟基-3-甲基戊-2-烯酸（4）和角鲨烯（5）.化合物4和5均为首次从木霉中分离得到.抑菌活性测试结果表明化合物1～5对细菌和真菌无明显抑制作用.