适配体修饰的纳米金比色法检测牛奶中的三聚氰胺

以三聚氰胺作为检测目标,设计合成了能与三聚氰胺特异性结合的适配体,选取表面活性剂邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯(PDDA),将纳米金比色法与适配体的分子识别相结合,确立了一种简单、高效、快速检测三聚氰胺的新方法.在三甲基硅丙磺酸(pH 7.0)缓冲溶液条件下,此反应体系的最佳条件为25nmol/L适配体,0.44nmol/L PDDA,反应时间为20min,通过可见光吸收光谱可检测的检测下限为34nmol/L.在牛奶样品的检测中,三聚氰胺的加标回收率为90%~120%,可以满足牛奶样品中三聚氰胺残留的精确检测要求.     

大肠杆菌核酸适配体筛选的研究

由于传统微生物检测存在步骤繁琐、耗费时间、成本较高等缺点,因此研发快速有效检测微生物的新技术新方法显得尤为必要.本文利用whole-cell SELEX技术,进行了大肠杆菌活细胞核酸适配体的筛选,对单链DNA的制备鉴定、每轮筛选核酸文库的检测、核酸适配体的扩增克隆等内容进行了研究,在筛选过程中成功制备了单链DNA,并对整个筛选过程的核酸适配体库进行监测,保证了筛选的顺利进行,并对核酸适配体库进行了扩增和克隆,最终获得靶向大肠杆菌的核酸适配体序列,这将有助于基于核酸适配体的微生物检测新方法的建立.     

适配体修饰的纳米金比色法检测牛奶中三聚氰胺

文章以三聚氰胺作为检测目标,设计合成了能和三聚氰胺特异性结合的适配体,选取表面活性剂PDDA,将纳米金比色法与适配体的分子识别相结合,确立了一种简单、高效、快速检测三聚氰胺的新方法。在MOPS(pH=7.0)缓冲溶液的条件下,此反应体系的最佳条件为25 nM 适配体,0.44 nM PDDA,反应时间为20 min,通过肉眼可视的检测限为0.3 μM,通过紫外吸收光谱可检测的检测下限为34 nM。在牛奶样品的检测中,三聚氰胺的加标回收率在90 %～120 %,可以满足牛奶样品中三聚氰胺残留的精确检测要求。     

水生生物病原核酸适配体研究进展

核酸适配体(Aptamer)是指利用指数富集配体系统进化(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到的能特异性识别和结合靶标的ssDNA或RNA分子,具有高亲和力和高特异性的特点,在快速检测和靶向治疗方面应用广阔。近年来,水生生物细菌和病毒性病原疾病的频繁暴发,严重制约了水生态的健康以及水产养殖业的迅速发展。核酸适配体作为一种新型的识别分子,在水生生物病原的应用上也已取得了一些进展。本文对水生生物细菌和病毒性病原核酸适配体的筛选,及其在检测和治疗领域的研究现状进行综述,并对该领域核酸适配体技术的应用方向进行展望。     

降低酶联核酸适配体分析方法中非特异性吸附的分析研究

以检测蜂蜜中的四环素残留为例,构建间接竞争酶联核酸适体分析法（ic-ELAA）,就ic-ELAA中非特异性吸附的影响因素进行分析,探讨降低非特异性吸附的措施。结果表明：选择2 μg/mL四环素-牛血清蛋白在10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）中过夜包被,次日用0.5 g/mL酪蛋白封闭1 h,竞争反应后用6 μg/mL链霉亲和素-辣根过氧化物酶催化颜色反应放大竞争效果,最后采用450 nm和630 nm双波长读数,可得到灵敏度为0.035 ng/mL的竞争曲线。同时,根据长期实验经验,提出其他降低非特异性吸附的注意事项。     

基于核酸适配体的荧光分析法定量检测MUC1粘蛋白

MUC1粘蛋白是一种高糖化、高分子量的糖蛋白,其在乳腺癌细胞中高度异常表达,其特异性高于组织多肽抗原,敏感性高于癌胚抗原,因此MUC1在乳腺癌诊断中具有很高的临床应用价值,而建立高灵敏的MUC1蛋白定量检测方法对临床诊断具有重要的意义.该研究建立了基于核酸适配体-滚环扩增（RCA）和氧化石墨烯-荧光共振能量转移（GO-FRET）技术的MUC1黏蛋白定量检测技术,实现了MUC1粘蛋白准确、灵敏的定量检测.结果表明,该方法定量检测线性范围为50~1 000 pg/mL,检测限为28.05 pg/mL,定量限为45.57 pg/mL,在人血样品中的回收率为96%~104%.     

P-糖蛋白的核酸适配体筛选及应用研究

基于SELEX技术筛选P-糖蛋白（permeability glycoprotein,P-gp）的特异性核酸适配体（aptamer,Apt）,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）法、表面等离子体共振（SPR）法表征了Apt与P-gp的结合能力,采用与P-gp结合能力最强的Apt5在人结直肠腺癌细胞（Caco-2）、人脑微管内皮细胞（hCMEC/D3）两种细胞系上考察了对P-gp外排功能的抑制效果.筛选得到10条长度为81 bp的P-gp核酸适配体,结合能力大小顺序为:Apt5>Apt8>Apt1>Apt4>Apt6>Apt10>Apt7>Apt2>Apt9>Apt3.Apt5使hCMEC/D3及Caco-2细胞内罗丹明123的蓄积量分别增加了40.77%（P<0.01）,32.39%（P<0.05）,能潜在抑制P-gp的外排功能.本研究首次报道了P-gp的多条核酸适配体,与P-gp有较强的结合能力,并能抑制P-gp的外排功能,有望成为P-gp的潜在新型抑制剂.      

基于核酸适配体Q5的石斑鱼虹彩病毒快速检测技术

石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus,SGIV)在不同鱼群之间迅速传播,其致死率极高,严重制约了我国海水石斑鱼(Epinephelus tauvina)养殖业健康可持续发展。为了及早发现和鉴定出病原,降低经济损失,促进渔业发展,开发方便快捷的石斑鱼虹彩病毒检测技术已迫在眉睫。本研究基于核酸适配体Q5,研发出一种核酸适配体Q5-荧光分子探针(Aptamer Q5-based fluorescent molecular probe,Q5-AFMP),并且对Q5-AFMP检测感染石斑鱼虹彩病毒的特异性,以及Q5-AFMP在细胞水平和组织水平检测石斑鱼虹彩病毒感染的灵敏度进行分析。研究结果表明:Q5-AFMP能够在细胞水平和组织水平高特异性检测出石斑鱼虹彩病毒的感染,而且具有较高的灵敏度。因此Q5-AFMP能够用于石斑鱼虹彩病毒的快速检测和诊断。     

基于G四联体的检测汞和铅的适配体传感器

汞和铅污染对人体健康和生态环境造成严重危害.基于汞离子和铅离子诱导G四联体构型改变,建立了一种简单、快速、灵敏的传感器以定量检测汞和铅.通过优化荧光染料浓度、反应时间进一步优化体系检测灵敏度.在最佳实验条件下,适配体对Hg2+的检出限为1.57 μM,荧光信号比与Hg2+浓度在0.5～4.0 μM范围内呈现良好的线性关...     

特异性检测卵形鲳鲹源哈维氏弧菌的核酸适配体的筛选与鉴定

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水养殖动物常见的主要致病菌之一,严重危害着我国华南沿海地区水产养殖业的健康可持续发展.针对哈维氏弧菌的快速检测诊断技术和抑菌技术等方面进行系统研究,并开发具有市场发展潜力的快速检测试剂盒和抗菌功能产品,对控制哈维氏弧菌的危害极其重要.为此,本研究以哈维氏弧菌为靶标,利用指数...     

过氧化物模拟酶氯化血红素含量的测定

以氯化血红素(Hemin)作为过氧化物模拟酶,4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine,4-AAP)和苯酚(phenol)为氢供体底物,通过Hemin催化活化H2O2氧化底物偶联显色反应,建立了测定Hemin含量的分析方法.实验表明在pH为10.0条件下,Hemin在0~1.28×10-6mol/L线性范围内符合朗伯-比尔定律,测定Hemin表观摩尔吸光系数为4.05×105L.mol-1.cm-1,以加入回收法试验Hemin的含量测定,结果满意.     

比色法测定二氧化氯的含量

根据二氧化氯与酪氨酸显色反应的特性,发现除了490nm显色反应吸收峰外,306nm有一更强的吸收峰,同样可利用比色法测定二氧化氯的含量,该法测定二氧化氯的浓度范围可扩展为2.5～25.0mg/L。     

酶联免疫测定法(ELISA)在检测牛奶中氯霉素残留的应用

运用酶联免疫法测定牛奶中的氯霉素残留.氯霉素在0.1～3 μg/L范围内呈线性,线性方程为y=-22.306 x 45.667,r=0.9932.向样品中分别添加0.45,1.35,4.05 μg/kg 3个水平的氯霉素,平均回收率分别为86.7%,89.6%和81.8%,最低检测限为0.1 μg/L,批内变异系数为5.9%～8.4%,批间变异系数为5.9%～14.2%.结果表明该方法灵敏度高,重复性好,适合牛奶中氯霉素残留筛选检测.     

超声波法提取氯化血红素的初步研究

详细报导了氯化血红素提取新方法．在20％的加水量，超声溶血10min和提取15min的条件下，氯化血红素的纯度和收率分别达到了96％和90％．采用此方法不但降低了生产成本和生产周期，而且还避免了使用对环境有污染的氯仿和吡绽等物质．     

萃取法氯化血红素脱铁的初步研究

详细报导了一种氯化血红素脱铁的TBP萃取新方法，在萃取时间1h，萃取剂TBP加入量为Fe量的10-20倍，盐酸加入量为硫酸体积的1／3，稀释剂选用非极性的苯和萃取温度40℃等条件下，氯化血红素的脱铁率和血卟啉及血卟啉衍生物的纯度分别达到了99.82％和97.85％．采用此方法不但降低了生产成本，而且还缩短了生产周期．     

微生物法在检测牛奶中氯霉素残留的应用

用微生物法检测牛奶中氯霉素的残留,根据氯霉素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性和定量检测牛奶中氯霉素的残留量．快速检测试纸法操作简单、速度快且重复性较好,适用于大量样品的残留检测;棉签法和发酵法费用小,但耗时长、重复性差、灵敏度低,只适用于氯霉素残留的定性检测．     

动物源性食品的氯霉素ELISA检测及分析

采用酶联免疫法检测了730例天津口岸进出口肉制品、水产品、乳制品和蜂蜜等几种动物源性食品中的氯霉素含量,对阳性结果经液相色谱-质谱联用EEC Cy3.6 confirming method进行确证,分析了其残留现状,并对英国RANDOX公司氯霉素检测试剂盒从检测范围、B/B050%抑制浓度、板内变异、板间变异、样品添加试验、实际样品检测、稳定性等方面各项指标进行试验.结果表明,试剂盒的检测低限为0.1 ng/mL,线性范围为0.05～4.7 ng/mL,B/B050%抑制浓度为0.4 ng/mL,样品加标回收率为80.5%～110%,板内变异系数小于5%,板间变异系数小于10%,试剂盒稳定性好.     

基于比色光谱和SVM快速检测白菜中氧乐果农残方法

为快速安全地检测白菜中氧乐果农药残留,用改进的氯化钯乙酸溶液作比色剂,和氧乐果农药发生比色反应,利用分光光度计在300～1100nm采集吸光度谱图。将氧乐果乳油农药和白菜汁混合,利用乙醇萃取,在0.5～400mg/kg随机配置了60个样本,分别和等量的乙酸氯化钯溶液反应。实验证明,当样本质量比大于50mg/kg时,吸光度曲线的走势发生变化,且和质量比的相关性较差;当样本质量比大于90mg/kg时,吸光度曲线和样本质量比相关性更差。引入支持向量机SVM进行三分类建模,利用5-折交叉验证,当光谱数据归一化为[0,1],核函数采用径向基RBF函数时,测试集样本质量比范围的预测效果最好,准确率达到96.7742%,为快速检测蔬菜中氧乐果的质量比范围提供了可行的方法。     

食品中葡萄糖的酶—比色法分析

用葡萄糖氧化酶和过氧化物酶作酶试剂，苯酚和４氨基安替吡啉作显色剂比色测定食品中的葡萄糖．测定的最大吸收波长为５０５ｎｍ，酶促反应稳定时间４０ｍｉｎ．２４ｈ内重现性好，相对误差小于２％．３２种食品分析确定标准系列范围、称样量．样品测定的不确定度小于０．０９８ｍｇ／ｇ，检出限为０．００３３％．     

异烟酸-吡唑啉酮比色法测定氰化物实验条件的选择

在各种不同的工业废水中,常含有少量的氰化物。由于氰化物有剧毒,因此确定检测方法的测定条件尤为重要。分析了采用异烟酸—吡唑啉酮比色法测定氰化物的实验条件的选择,介绍了其实验原理与实验步骤。