GrNPV多角体蛋白的表面增强拉曼光谱研究

草原毛虫核型多角体病毒(简称GrNPV)是四川大学生物工程系首次分离发现和命名的一种昆虫病毒,现已用GrNPV研制成一种复合的病毒杀虫剂,研究GrNPV的分子结构是很有必要的工作,我们已研究了GrNPV包涵体的SERS谱,这里是研究GrNPV多角体蛋白的SERS谱.GrNPV多角体蛋白的荧光背底强,未能得到较好的常规拉曼谱,但我们在pH3·5下获得了具有一增强效果的SERS谱,并作了分析和讨论.     

青海草原毛虫核型多角体病毒增殖的研究

本文试验结果表明,影响草原毛虫核型多角体病毒产量的最主要因子是病毒浓度,其次是饲毒时幼虫的虫龄,饲毒浓度和虫龄的组合.在四龄初采用1.5×10~6PIB/ml 的病毒浓度饲毒48小时得到了病毒增殖的最高产量.     

甜菜夜蛾多核壳型核型多角体病毒vp39基因的克隆与表达

参照苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV)衣壳蛋白基因vp39的序列设计引物,采用PCR技术扩增了甜菜夜蛾核型多角体病毒的约1．3kb片段,通过将片段亚克隆至原核表达载体pET-28构建出重组表达质粒pET-Se39,以pET-Se39转化E.coli BL21。经IPTG诱导后,SeMNPVvp39基因高效表达,SDS－PAGE分析显示表达产物的分子量为39KD,并且表达量在IPTG诱导4h达到最高水平。／     

DNA甲基转移酶抑制剂DAC对AcMNPV感染的影响

通过DNA甲基转移酶抑制剂DAC(地西他滨,decitabine)改变DNA甲基化水平,研究杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)DNA的甲基化与病毒复制和基因表达调控的关系。通过流式细胞术和病毒mRNA的Real-time PCR检测发现,低浓度DAC(30nmol/L)处理细胞后会使报告基因绿色荧光蛋白基因(Green fluorescent protein gene,gfp)的表达提前,且表达水平明显上升。对低浓度DAC处理组和对照组产生的病毒效价监控表明,低浓度DAC的存在可以提高病毒的效价。经连续DAC处理,在第六代细胞中生产的AcMNPV多角体感染甜菜夜蛾后,幼虫死亡率明显高于对照组。这些结果表明,DAC对杆状病毒DNA复制和基因表达具有一定作用。     

甘蓝夜蛾核型多角体病毒的分离、鉴定和毒力测定

甘蓝夜蛾(Mamdstra bressicae L.)是石河子垦区甜菜的重要害虫,严重发生时对甜菜含糖量的影响较大。除危害甜菜外,还为害甘蓝等十字花科蔬菜及禾本科、豆科、茄科等作物。在石河子地区一年发生三代,以蛹在土中越冬,幼虫一般为6龄。 1984年8月,我们在室内饲养的甘蓝夜蛾幼虫中,发现自然慛病死亡现象,经分离鉴定是被甘蓝夜蛾核型多角体病毒以下简称MbNpV侵染所致。对该病毒多角体的观察和初步研究国内虽有报道(1)(2),但为搞清新疆昆虫病毒资源,了解MbNPV进行生物防治的可能性,我们对该病毒的形态和毒力等进行了研究。现将结果报告如下:     

1×10~9 PIB/g SpltNPV·15%虫酰肼悬浮剂对甘蓝斜纹夜蛾的田间防效

用1×109PIB/g斜纹夜蛾核型多角体病毒·15%,虫酰肼悬浮剂进行了甘蓝斜纹夜蛾的田间药效试验。结果表明:供试药剂对甘蓝斜纹夜蛾具有良好的防治效果,田间制剂用量1 500 g/hm2时,药后3天对甘蓝斜纹夜蛾幼虫的防效达到80%,以上,且持效期达14 d,显著优于对照药剂1×109PIB/g斜纹夜蛾核型多角体病毒可湿性粉剂1 500 g/hm2的防效和持效期,说明1×109PIB/g斜纹夜蛾核型多角体病毒·15%,虫酰肼悬浮剂在防治甘蓝斜纹夜蛾上具体良好的推广应用前景。     

大豆银纹夜蛾核型多角体病毒的研究——银纹夜蛾核型多角体病毒的分离鉴定

从豆田采到自然罹病死亡的银纹夜蛾幼虫,经分离鉴定其病原体是一种核型多角体病毒。感病幼虫体色由淡绿变为黄绿以至黄白色,体节肿大,倒垂死亡,体壁脆软,常液化流出淡褐色脓液,无嗅味。切片观察幼虫受害组织,主要是表皮细胞、血细胞、脂肪体,气管基质及中肠上皮细胞,此处丝腺、肌肉细胞也被侵染。病变主题表现为细胞核膨大,核内充满大量多角体。电镜观察多角体呈正三边形,直径1.34u,病毒粒子杆状,大小346×57.8nm呈单粒包埋。根据国际病毒分类与命名系统,此病毒属于杆状毒科(B aculoviridae)、杆状病毒属(Baculovirus)、或核型多角体病毒A亚组,定名为银纹夜蛾核型多角体病毒。     

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA片段的克隆与鉴定

实验提取芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株DNA，5种限制性内切酶消化，并对Eco RⅠ酶切片段进行分子克隆．结果表明，芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株分子量为113．78kb；实验成功克隆出10个病毒DNA Eco RⅠ酶切片段．上述结果为芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株的分子生物学分析提供了基础材料．     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的定位及克隆

以苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ的膜表面糖蛋白基因ｇｐ６４作为探针，对经不同内切酶酶切的家蚕核型多角体病毒基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＢａｍＨⅠ酶切产生的４．２ｋｂ和７．６ｋｂ片段呈阳性杂交，经ＤＮＡ片段回收，将４．２ｋｂ片段进行了克隆     

人M-CSF与SCF融合蛋白的构建及其在昆虫细胞中的表达

应用重组DNA技术构建M-CSF与SCF的融合基因并将其克隆于昆虫杆状病毒转移载体pVL1392中,通过与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)DNA共转染草地夜蛾细胞Sf9,融合基因插入AcNPV基因组.重组病毒感染单层Sf9细胞后,表达产物分泌到胞外培养液中,用MTT比色法和TF-1细胞株可检测到表达产物与IL-3的协同效应.上述研究为开发具有应用价值的新型细胞融合因子奠定了基础.