GrNPV多角体蛋白的表面增强拉曼光谱研究

草原毛虫核型多角体病毒(简称GrNPV)是四川大学生物工程系首次分离发现和命名的一种昆虫病毒,现已用GrNPV研制成一种复合的病毒杀虫剂,研究GrNPV的分子结构是很有必要的工作,我们已研究了GrNPV包涵体的SERS谱,这里是研究GrNPV多角体蛋白的SERS谱.GrNPV多角体蛋白的荧光背底强,未能得到较好的常规拉曼谱,但我们在pH3·5下获得了具有一增强效果的SERS谱,并作了分析和讨论.     

单头饲养斜纹夜蛾增殖S1NPV病毒的研究

使用人工半合成饲料大规模单头饲养斜纹夜蛾幼虫，增殖核型多角体病毒，通过不同接种浓度、接种龄期、饲养温度以及不同饲料的比较，遴选出当３龄幼虫接种的病毒浓度为３．８５×１０＾５ＰＩＢｓ／ｍＬ，４龄幼虫接种的病毒浓度为３．８５×１０＾７ＰＩＢｓ／ｍＬ时，病毒产量最高，４龄幼虫接种增殖病毒的最适温度为２４－２７℃，人工半合成饲料饲养幼虫增殖病毒效果优于天然饲料，同时，罹病虫尸热处理瑟其病毒产量之间，有显     

S1NPV对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值

斜纹夜蛾核型多角体病毒对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值因温度和虫龄而异，早龄愈大，温度愈高，则侵染阈值也大。在２０－４０℃内，３龄幼虫的侵染阈值为９０９０．９－６６６６６６．７ＰＩＢ头，５龄幼 虫为１３１５７８．９－７１４２８５．７ＰＩＢｓ／头。温度升高，各龄幼虫的侵染阈值差异逐渐减小，接种量为２×１０＾６ＰＩＢｓ／头左右及高于２×１０＾７ＰＩＢｓ／头时，Ｓ１ＮＰＶ自身似有一定的协生作用和拮抗作用。     

草原毛虫核型多角体病毒的安全性研究 Ⅱ.用Ames法检测核型多角体病毒的致突变性

用Ames法检测了GrNPV的致突变性.实验用常规的点试法,不经代谢活化和经代谢活化的渗入法,和改良的平板渗入法来检测不同剂量的GrNPV对原核生物的致突变性.结果表明,GrNPV对原核生物无诱变作用,无剂量效应关系,从而推测GrNPV对哺乳动物无潜在的致突变性.     

两种核多角体病毒感染甜菜夜蛾血细胞系的电镜观察

用苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV)和芹菜夜蛾核多角体病毒(SfaMNPV)感染甜菜夜蛾(Laphgma exigua)血细胞系Le-H-HNPU_7,通过光镜和电镜技术证实,该细胞系对这两种NPV都很敏感,病毒在细胞中的发生呈现出典型的NPV病理发展过程。电镜下可以见到受染细胞核中病毒发生基质、病毒粒子和多角体。其病毒形态大小分别是:AcMNPV病毒粒子为27.8±1.83×214.4±33.5nm,多角体为1.82±0.35μm,多角体蛋白质晶格为60.7A;SfaMNPV病毒粒子为38.1±2.09×306±14.5nm,多角体为1.45+0.1μ,多角体蛋白质晶格为70A。     

芹菜夜蛾核型多角体病毒感染5种昆虫细胞系的研究

用０．５ＭＯＩ的ＳｆａＭＮＰＶ病毒感染液感染５种昆虫细胞系：Ｂｍｅ、Ｐｘ、Ｈｖ、Ｔｎ和ＬｅＨ。结果表明：这５种细胞系对ＳｆａＭＮＰＶ都敏感，感染１４４ｈ后，受染细胞百分率分别是２．８４％、１１．８３％、８％１、６．６５、６．２２和７．０２。电镜观察可见感染细胞核中出现病毒发生基质、病毒粒子和多角体，病毒形态大小分别是：多角体１．４５±０．１０μｍ，病毒粒子３８．１±２．０９×３０６±１４．５ｎｍ，     

重组斜纹夜蛾核型多角体病毒的构建和初步筛选

斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhedroviruse,SpltMNPV)日本株(C3)(又命名为SpltMNPV Ⅱ)是Kamiya等从日本全国各地野外感病幼虫收集、分离到189个SpltMNPV克隆中繁殖率和毒力极强的一种新型病毒株.本研究在SpltMNPV Ⅱ的基础上构建了egt缺失的,多角体启动子启动的,BmK ITa1成熟肽和增强型绿色荧光蛋白(egfp)融合表达的重组移载体psk-△egt-pph-BmK ITa1-egfp,并通过共转染初步筛选出重组病毒感染的荧光细胞.成果为进一步研制高效重组SpltMNPV生物杀虫剂提供了可行性.     

SINPV对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值

斜纹夜蛾核型多角体病毒（ＳＩＮＰＶ）对斜纹夜蛾幼虫的侵染阈值因温度和虫龄而异，虫龄愈大，温度愈高，则侵染阈值也愈大．在２０～４０℃内，３龄幼虫的侵染阈值为９０９０．９～６６６６６６．７ＰＩＢｓ／头，５龄幼虫为１３１５７８．９～７１４２８５．７ＰＩＢｓ／头．随温度升高，各龄幼虫的侵染阈值差异逐渐减少，接种量为２×１０６ＰＩＢｓ／头左右及高于２×１０７ＰＩＢｓ／头时，ＳＩＮＰＶ自身似有一定的协生作用和拮抗作用．作为病原体侵染阈值、致病性及寄主抗病性的指标，侵染阈值优于ＬＤ５０和ＬＣ５０，为解决病原体密度阈值的获取提供了一定的基础．     

SlNPV多角体蛋白基因的序列分析

ＳｌＮＰＶ多角体蛋白基因的开放读码框为７５０ｂｐ,编码２４９个氨基酸的蛋白质,是目前所发现的最长的多角体蛋白基因．ＳｌＮＰＶ多角体蛋白Ｍｒ＝２９２３６,其氨基酸序列与其它核多角体病毒的多角体蛋白氨基酸序列有高度同源性．     

SlNPV p10基因特征的研究

从病毒感染后期的斜纹夜蛾幼虫脂肪体中提取ｍＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ探针,并使之与ＳｌＮＰＶ基因组的酶切片段杂交,将ＳｌＮＰＶｐ１０基因定位于ＢａｍＨ Ｉ－３．０千碱基片段上。ＳｌＮＰＶｐ１０是目前发现的最长ｐ１０基因;基因的启动子内含有２个ＡＴＴＧＴＡ基序,是目前所发现的ｐ１０基因中唯一含有２个Ａ／ＴＴＴＧＴＡ基序者。ＳｌＮＰＶ Ｐ１０蛋白含有１０个七肽重复单元,可形成１个相对较长的卷曲螺旋。Ｓ     

斜纹夜蛾NPVp74基因的克隆及部分序列分析

以含ｐ７４基因的ＡｃＮＰＶＥｃｏＲⅠ－Ｐ片段作探针,与ＳｌＮＰＶ基因组在非严格条件下进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,将ＳｌＮＰＶｐ７４基因定位于４９００ｂｐ的ＳｌＮＰＶＸｈｏⅠ－Ｐ片段．对ＳｌＮＰＶＸｈｏⅠ－Ｐ片段中的一段９４０ｂｐ的ＤＮＡ片段进行序列测定,通过ｉｎｔｅｒｎｅｔ经ＢＬＡＳＴ与Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ中的ｄａｔａｂａｓｅ比较分析发现,序列中的一段２４３ｎｔ序列与ＡｃＮＰＶｐ７４基因有６０％的同源性,一段８１ｎｔ序列与ＡｃＮＰＶｐ７４基因的同源性高达７９％．与ＣｆＮＰＶｐ７４相比,２段２６４ｎｔ和１００ｎｔ序列分别有６０％和７１％的同源性．测得序列中的部分序列与ＢｍＮＰＶ、ＯｐＮＰＶｐ７４基因也有高达５８％～７８％的同源性．同时,这部分序列编码的氨基酸与ＡｃＮＰＶ及ＯｐＮＰＶＰ７４蛋白的氨基酸序列也有很高的同源性．结果表明所测序列的一部分为ＳｌＮＰＶＰ７４蛋白Ｃ－端的编码序列．     

SlNPV PK基因的部分序列分析

ＳｌＮＰＶ基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ－Ｘｂａ片段上含有部分的ＰＫ基因，ＳｌＮＰＶＰＫ的氨基酸序列与ＨａＮＰＶ，ＨｚＮＰＶＳｐｌｉＮＰＶ，ＡｆＮＰＶ，ＡｃＮＩＶ，ＬｄＮＰＶＰＫ氨基酸序列的同源性分别为４５％，４４％，８９％，３７％，３８％和３７％，其上含有蛋白激酶的特征序列ＩＶＨＡＮＤＶＫＬＥＮＶＬ。     

斜纹夜蛾NPV多角体基因的克隆和部分测序

本文对ＳＩＮＰＶ基因组作了酶解分析，测得其基因组大小为１４５ｋｂ，并用双酶法确定了ＳＩＮＰＶ基因组的ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔⅠ物理图谱。以含ＡｃＮＰＶ多角体基因的质粒ｐＡＣ－Ⅰ的ＳａｌＩ－Ｃ片段为探针，对ＳＩＮＰＶＤＮＡ酶切片段ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交结果，初步判断多角体基因定位于ＰｓｔＩ－Ｂ／Ｃ／Ｄ片段、ＢｇｌⅡ－Ｃ／Ｄ片段、ＢａｍＨＩ－Ｂ／Ｃ片段和ＥｃｏＲＩ－Ａ／Ｂ片段上，且ＳＩＮＰＶ与ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因有６４％的同源性，而以大肠仟菌质粒ｐＵＣ１９为载体对ＳＩＮＰＶ的多角体基因试克隆，得到带有ＢｇｌⅡ－ＰｓｔⅠ双酶切片段的２个克隆子。对这两个杂交阳性克隆子之一的核苷酸序列测定，表明插入片段与ＢｍＮＰＶ多角体基因上游序列亦有一定同源性。     

斜纹夜蛾核多角体病毒egt基因的克隆和部分序列分析

用ＡｃＭＮＰＶｅｇｔ基因中的保守区部分片段为探针,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交确定ＳｌＭＮ－ＰＶｅｇｔ基因的位置在ＰｓｔⅠ４９７０ｂｐ和ＸｂａⅠ２６００ｂｐ的片段上．采用双链ＤＮＡ序列分析方法测序,在２６００ｂｐ片段上的ＥｃｏＲⅠ位点两侧得到５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列,用计算机ＤＮＡＳＩＳ和ＰＲＯＳＩＳ软件,将５９４ｂｐＤＮＡ碱基序列所推测的氨基酸序列与ＡｃＭＮＰＶ和ＳｌｉＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因氨基酸序列进行同源比较,其同源性分别为４５％和８６．５％．     

美国白蛾核型多角体病毒的研究进展

美国白蛾(Hyphantria cunea(Drury))属鳞翅目(Lepidoptera)灯蛾科(Arctiidae),是一种重要的国际性检疫害虫,从1979年入侵以来,对我国林业和园林绿化造成重大危害。美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea Nucleopolyhedrovirus,HcNPV)生物杀虫剂能有效控制寄主美国白蛾种群的数量,在生物防治中起到了重要的控害作用,具有重要的经济、生态和环保价值,应用前景十分广阔。从侵染特点、致病性、流行病毒学、基因组特点及应用前景等方面综述了美国白蛾核型多角体病毒的研究进展。     

核型多角体病毒gp67基因的研究

核型多角体病毒是重要的杆状病毒，在其生活周期中存在有包涵体产生的病毒粒子和出芽病毒粒子两种形式的子代病毒．出芽病毒能有效地感染血腔细胞，并且发现，它的感染能力决定于病毒粒子囊膜上的ｇｐ６７蛋白，ｇｐ６７蛋白为酸激发的膜融合作用所必需．ｇｐ６７蛋白还是囊膜上唯一由病毒编码的膜蛋白．序列分析表明，ｇｐ６７蛋白与木瓜蛋白酶同源，蛋白分子的主要功能区有Ｎ端的信号肽序列，Ｃ端的转膜固着序列，以及中间的外作用区域，膜融合作用区段位于外作用区域上．ｇｐ６７蛋白在胞质合成后，会发生寡聚化及糖基化其他．ｇｐ６７基因的转录存在有依赖于ＴＡＴＡ盒和不依赖于ＴＡＴＡ盒两种转录因子，并且这两种方式有部分重叠现象．利用ｇｐ６７蛋白的基因工程正引起人们的重视     

柳毒蛾核型多角体病毒内蒙株(LsNPV-IM)DNA的限制性内切酶谱分析

将柳毒蛾核型多角体悬液降解 ,降解产物经 Tris-饱和酚和氯仿抽提 ,乙醇沉淀分离出Ls NPV-DNA.用限制性内切酶 Pst ,Hind ,Pst /Hind ,Hind /Eco R 和 Pst /Bam H 单酶切或双酶切 .经琼脂糖凝胶电泳并对其结果进行分析 ,建立了酶切图谱