血清滤纸斑点免疫结合试验诊断棘球蚴病

以定性滤纸吸附血清样品,保存于室温和4℃冰箱内,3和6个月后对所保存的血清滤纸进行生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验,以检测血清样品中抗棘球蚴抗原的抗体.结果表明2种条件下保存的干血清滤纸的检测结果与新鲜血清样品检测结果基本一致(P＞0.05).证明在生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者免疫应答时,干血清滤纸法可作为患者血清样品的保存方法.     

棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响

以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性 (98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性（93.7%）,提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性 (98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异.     

SLE患者血清抗Sm抗体免疫PCR的方法学评价

目的为SLE患者血清抗Sm抗体提供免疫PCR测定方法.方法评价免疫PCR方法检测抗Sm抗体的特异性、敏感性、重复性和相关性.结果免疫PCR方法测定SLE患者血清抗Sm抗体特异性强,敏感性是ELISA方法的107倍,而且与ELISA方法呈高度正相关.结论免疫PCR方法用于血清抗Sm抗体测定具有临床实用价值.     

胶体金免疫层析法在结核病快速诊断中的应用

目的:探讨用胶体金免疫层析法检测血清及胸水中结核抗体,评估其在结核病快速诊断试验的相关指标。方法:应用免疫层析技术来检测血清及胸水中的结核抗体。检测临床诊断肺结核患者112例(其中分菌阳组、菌阴组)和96例无结核病史的健康体检者的血清结核抗体水平;52例结核性胸膜患者胸水中的结核抗体水平,同时对胸水进行抗酸染色镜检。计算诊断试验的相关指标。结果:该检测方法临床诊断肺结核的敏感性为60.7%,特异性为95.83%,准确性为79.2%,诊断指数为156.53%,阳性预期值为94.44%,阴性预期值为67.6%;胸水中结核抗体阳性22例,敏感性为42%,胸水结核抗体阳性率和胸水抗酸染色阳性率结果有显著性差异p(0.05。结论:血清结核抗体检测具有较高的敏感性和特异性,可用于临床肺结核的辅助诊断,对评价肺结核的疗效有较高的实用价值。胸水中结核抗体检测对结核性胸膜炎的诊断也具有重要的临床参考价值。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

目的探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记鼠抗人IgG单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg,HEAg)、抗体(羊抗鼠lgG)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAV IgG,抗-HEV IgG两法总符合率分别为98.9%,98.9%,检测灵敏度可达1μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒lgM抗体的研究

目的建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法.方法采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAag,HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA测试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAVIgM,抗-HEVIgM两法总符合率依次为97.9%,98.4%,检测灵敏度可达2μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA测试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备.     

免疫微球吸附实验的建立：Ⅰ.兔抗人血清IgG检测

用免疫微球技术来检测抗原抗体是目前免疫诊断试剂研究的一个新方向。本文介绍了兔抗人血清ＩｇＧ的制备和利用彩色微球检测该抗体的检测方法；同时，探讨了影响实验敏感性的温度、浓度和ｐＨ值等主要因素。     

细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3和Eg10免疫差异的初步研究

表达纯化细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3(rEg14-3-3)和Eg10(rEg10),分别免疫小鼠,8w后进行细粒棘球蚴原头蚴攻击感染.计算免疫保护力,检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞亚群以及T细胞增殖情况.实验结果表明,rEg14-3-3免疫组小鼠具有85.3%抵抗细粒棘球绦虫感染的能力,而rEg10免疫组小鼠与对照组小鼠相比无免疫保护力;与PBS对照组相比,只有rEg 14-3-3免疫组的CD4+T细胞亚群的分布有明显差异,且rEg 14-3-3抗原能诱导淋巴细胞显著增殖.因此rEgl4-3-3蛋白能抑制细粒棘球蚴的生长,诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,可作为疫苗候选分子.     

生物素链霉亲和素联合免疫层析用于快速检测NT-proBNP

为提高常规免疫层析技术的检测灵敏度,引入生物素-链霉亲和素系统,以荧光微球作为标记物,建立了一种新型快速定量检测NT-pro BNP的方法.试验结果表明:新型试剂盒在0.02~30μg·L~(-1)范围能对NT-proBNP实现快速检测.在全血检测中,新型试纸条所测NT-pro BNP浓度与雷度快速免疫分析仪定量检测结果具有很好的一致性.新型免疫层析试纸条大大提高了快速检测的准确性,可广泛用于床旁检验(POCTs)等临床诊断阶段.     

心肌肌钙蛋白I-C复合物酶联免疫检测方法的建立

为了制备抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体、建立检测人cTnI链酶亲和素-生物素双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,用基因工程表达的人cTnI免疫雌性BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备得到三株特异性抗人cTnI的单克隆抗体记为6G3,6A6,3G9.三株杂交瘤细胞中6G3和6A6为IgG1,3G9为IgG2b,腹水效价分别为4×10-5,4×10-5和10-5.亲和常数为5.0×109,6.4×109和3.8×109mol-1.Westernblotting结果表明6G3和6A6能够识别cTnI-C复合物.把6G3抗体生物素化并制备抗cTnI、cTnC和cTnI-C的大鼠多克隆抗体.以多抗作为固相捕捉抗体,生物素化6G3抗体作为检测抗体,建立检测cTnI的双抗体夹心ELISA方法并初步应用于临床病人标本检测.以cTnI-C复合物多抗捕捉检测方法具有良好的灵敏度、特异性和准确性,灵敏度为0.9ng/mL,较包被其他抗体捕捉方法提高1~2倍.批内变异系数为5.03%,回收率为94.56%.测定17例AMI病人和18例血清样本临床诊断结果符合率为100%.     

乙型脑炎病毒(JEV)免疫荧光(IFA)检测方法的建立

目的建立乙型脑炎病毒(JEV)免疫荧光(IFA)检测方法,应用于猪及猪源性生物材料JEV的检测。方法滴定病毒TCID50,筛选JEV敏感细胞,依据国标IFA法制备抗原片,并进行特异性、敏感性和稳定性试验。结果选取BHK21细胞作为JEV敏感细胞,病毒感染力滴度(TCID50)为10-8.9.mL-1;与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;稳定性和敏感性试验显示,不同时间IFA检测灵敏度均为1∶2560;可检测到的病毒滴度最低为10-6.5.mL-1。结论建立的IFA法敏感性、特异性强,稳定性好,可用于猪及猪源性生物材料JEV的检测。     

花椰菜天然钙调素抗体的特性及其ELISA定量法的建立

钙调素是一种具有多种调节功能的钙结合蛋白质，其免疫原性很弱，本文采用两次基础免疫和多次加强免疫的方法，获得了免疫花椰菜天然钙调素抗血清，用免疫双扩散法鉴定，其效价为１：３２钙调节不易与固相载体结合，我们先用０．２％戊二醛处理聚苯乙烯板载体，再用于包被钙调素，在上述基础上建立了定量测定植物钙调素的竞争性酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）技术及检测动物血清中抗钙调素抗体的间接ＥＬＩＳＡ技术。     

特异性抗体和特异性免疫复合物的检测对结核病的诊断意义

以ＥＬＩＳＡ检测１０８例活动性肺结核、３９例稳定期肺结核、３０例肿瘤、１０１例非结核性肺部疾病患者及２０２例正常人血清的抗结核菌纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）ＩｇＧ抗体（简称抗－ＰＰＤ）和循环免疫复合物（ＣＩＣ）中的抗－ＰＰＤＩｇＧ抗体（简称ＣＩＣ－ＰＰＤ）。结果表明，活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平明显高于正常人和各疾病组患者的水平（Ｐ＜０．００１），但与其病变范围无关。单一测定活动性肺结核患者的抗－ＰＰＤ，敏感性为８５．２％，特异性为９８．５％；测定ＣＩＣ－ＰＰＤ，敏感性为８６．１％．特异性９６．９％。以两者任一项阳性作为诊断活动性肺结核的标准，则敏感性为９３．５％。此外，对１１例活动性肺结核患者的动态观察表明，随着治疗天数的增加和临床症状的改善，患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ水平会逐渐降低，前者于治疗后第２０～２４周降至正常水平，后者则于治疗后第１２～１６周降至正常值。研究结果提示测定患者的抗－ＰＰＤ和ＣＩＣ－ＰＰＤ的水平，可用于结核病诊断，对结核病的疗效判定亦有帮助。     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用.无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒,均获得了满意的结果.同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明:无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后2种方法,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为0.65ng,烟草花叶病毒为0.39 ng,小西葫芦黄化花叶病毒为0.45 ng;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适,这种底物可在室温下长期保存,并且反应产物为不褪色的紫色,易于观察和保存.     

An HTLV-III peptide produced by recombinant DNA is immunoreactive with sera from patients with AIDS

Human T-cell lymphotropic retrovirus type III (HTLV-III), also called lymphadenopathy-associated virus (LAV), has been identified as the aetiological agent of acquired immune deficiency syndrome (AIDS). The sera of most patients with AIDS or AIDS-related complexes, and of asymptomatic individuals infected with HTLV-III, contain antibodies against antigens of HTLV-III. The characterization of these antibodies and their corresponding viral antigens is important not only for understanding immunity against HTLV-III and the pathology of AIDS, but also for the development of diagnostic methods and preventive vaccine for AIDS. Following the successful establishment of a long-term T-cell line permissive for HTLV-III replication, large quantities of virus have been produced, facilitating the purification of viral proteins and the development of mouse monoclonal antibodies against several viral antigens. More recently, the structure of HTLV-III proviral DNA has been elucidated. We now report the production, by genetic engineering methods, of a peptide encoded by a gene segment of HTLV-III. A 1.1-kilobase (kb) EcoRI DNA segment from an isolate of HTLV-III was inserted into a lpp and lac promoter-coupled expression vector, pIN-III-ompA. Escherichia coli transformants of this plasmid produced a peptide of relative molecular mass (Mr) 15,000 (15K) which was strongly immunoreactive with anti-HTLV-III antibodies present in sera from AIDS patients. Lysates of the clones expressing this 15K peptide inhibited the reactivity of the p31 virion protein with AIDS sera, suggesting that it is a fragment of the viral p31 protein. The peptide reacted with sera from all 20 AIDS patients but none of the 8 normal controls tested. These results suggest that the peptide may be useful for detecting anti-HTLV-III antibodies in blood samples.     

HLA-D region beta-chain DNA endonuclease fragments differ between HLA-DR identical healthy and insulin-dependent diabetic individuals

The human HLA-D histocompatibility region encodes class II antigens each of which consists of two polypeptide chains (alpha and beta) inserted in the plasma membrane. These molecules are implicated in the regulation of the immune response but several human diseases are also found to be associated with certain HLA-DR antigens. The occurrence of insulin-dependent (type I) diabetes (IDDM) is strongly associated with HLA-DR3 and/or 4 (ref. 5). The class II antigens, however, show a marked genetic polymorphism associated with the beta-chains which seem, from hybridization studies, to be encoded by several genes. We have therefore used the beta-chain cDNA probe, pDR-beta-1 (refs 8, 10) to test whether there are differences in hybridization pattern between DNA from healthy individuals and diabetic patients, after digestion with restriction endonucleases. Among the HLA-DR 4 and 3/4 individuals, the IDDM patients showed an increased frequency of a PstI 18 kilobase (kb) fragment. A BamHI 3.7 kb fragment, frequent among controls (30-40%), was rarely detected in the IDDM patients (0-2%). These differences may be related to susceptibility to develop the disease.     

绿脓杆菌MSHA茵毛株菌苗与白血病免疫应答反应

绿脓杆菌(MSHA)菌苗是一种具有广谱抗感染效果的免疫调节剂。我们观察了20例白血病患者多次疫苗主动免疫的免疫应答反应,14例病人血中广谱抗体效价升高,临床上有很好的治疗反应,6例抗体效价无变化,而临床症状加重,最后均死于败血症。上述结果提示白血病病人对疫苗的免疫应答反应,在白血病缓解中起着重要作用,对临床早期准确判断白血病患者的预后很有意义。     

两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究

【摘要】 目的：比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA）法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。方法：用汉坦病毒76-118株感染Vero-E6细胞,取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清,分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶（HRP）建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原,并比较两者的检测灵敏度,用空斑形成实验结果作为金标准,以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果: 用两种检测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原,双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早,而且其病毒滴度均较IFA法高（P＜0.01）。结论：ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高,并且操作简单,可重复性好,便于大批量规模化检测,因此更适用于汉坦病毒的检测。