Rho激酶影响大鼠海马神经元突起生长的实时成像

目的:观察Rho激酶对大鼠海马神经元突起生长的影响.方法:体外培养新生大鼠海马神经元5 d后,连续动态观察溶血性磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)及Rho激酶抑制剂Y-27632对神经元突起生长的影响.结果:对照组神经元一级突起迅速生长、延伸,不断发分支,形成丰富的二级、三级突起;用LPA处理后,神经元大部分突起进行性塌陷,一级突起逐渐缩短并且变细,二级、三级突起数量减少,且较细小;而预先用Y-27632处理后再加LPA,细胞突起塌陷的现象减少,神经元的突起不断分支、延伸,一级、二级、三级突起数量较LPA组增多且长度也增加.结论:Rho激酶参与LPA诱导海马神经元突起回缩的过程,抑制Rho激酶的活性可抑制LPA诱导的突起回缩.     

低剂量铅对神经细胞粘附分子表达的影响研究

为了探讨神经细胞粘附分子(NCAM)在铅神经发育毒性中的作用,分别从体内、体外途径观察了低水平铅暴露对海马NCAM表达的影响。结果表明:铅明显抑制了海马神经元NCAM的表达,抑制程度随时间延长逐渐减弱,随剂量增加逐渐增强。提示:无论体内还是体外,低水平铅均显著抑制了Wistar大鼠海马NCAM的表达,并造成海马NCAM表达时程上的延迟。     

新生大鼠海马神经元体外分散培养技术研究

在实验室建立了分散的新生大鼠海马神经细胞体外培养模型。该模型属原代培养。在体外能直接观察神经元的生长发育。研究表明：该模型稳定性好,差异性小：培养神经细胞可存活１个月以上,１４ｄ左右细胞生长最为丰满,且四周晕光明显,神经突起多而粗大,分枝互成网络;１４ｄ以后生长减缓。由于在此模型培养的条件下,即不存在血脑屏障问题,又容易控制条件,便于在细胞和分子水平上深入研究神经细胞的形态学,生理学,生化代谢及药     

Rho激酶对大鼠海马神经元骨架相关蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨Rho激酶对大鼠海马神经元突起生长和骨架相关蛋白mRNA表达的影响.方法:用Rho激酶的抑制剂Y-27632和激动剂溶血磷脂酸(LPA)干预海马神经元,观察突起的生长并用RT-PCR检测大鼠海马神经元神经丝结合蛋白(Dbn1)、微丝肌动蛋白(F-actin)、微管相关蛋白(Tau)、α-微管蛋白(α-tubulin) mRNA的表达.结果:用LPA干预2 h后突起从远端逐渐退缩,长度缩短,细小突起退缩明显;Y-27632干预2 h后细胞胞体和突起的远侧端新生出细小突起.RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合.内参照β-actin电泳条带在不同分组灰度较均一,呈高表达.Dbn1呈较高水平表达,激动剂LPA组表达下降(P<0.05),抑制剂Y-27632组表达量增多(P<0.05);F-actin和Tau表达呈低水平,激动剂作用后均使表达量相应的减少(P<0.05),抑制剂组表达增多(P<0.05);α-tubulin表达量最高,激动剂组表达量出现明显下降(P<0.05),抑制剂组表达增加(P<0.05).结论:激活Rho激酶下调Dbn、F-actin、Tau、α-tubulin mRNA的表达并诱导突起缩短,抑制则增加其表达并促进突起生长.     

大鼠海马神经元neurobasal无血清的原代培养方法

目的:建立纯度和活力较高的无血清原代培养海马神经元的方法。方法:新生SD大鼠海马,用neuro-basal培养基培养,免疫荧光鉴定神经元纯度,MTT法检测其活力。结果:神经元接种12~24 h后贴壁,并长出细小突起,3 d具有典型神经元形态特征,4 d突起形成稀疏的神经纤维网络,8 d后神经元5~10个聚集成团,突起密集,生长稳定,12 d后出现细胞碎片。Tubulin荧光染色显示清晰的神经元,突起绵长且相互交织,占细胞总数的66.7%;GFAP荧光染色的细胞数量少,突起短粗,占33.7%。培养1~5 d MTT代谢率逐渐上升,6~11 d处于平台期,11 d后下降。结论:neurobasal无血清培养获得的神经元纯度大于60%,6~11 d的细胞适于细胞学实验。     

5种甘肃道地中药对D-半乳糖致衰海马神经元影响的比较研究

目的:研究5种甘肃道地中药对D-半乳糖致衰海马神经元影响的差异.方法:将用D-半乳糖致衰原代培养的大鼠海马神经元分别用5种中药处理.实验分为正常组、模型组、纹党组、红芪组、当归组、大黄组和半夏组,MTT法检测海马神经元的增殖能力,以超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)为指标观察细胞的抗氧化能力,ELISA法检测海马神经元源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)含量的变化,Western blot法检测海马神经元BDNF和NGF的表达水平.结果:与正常组相比,模型组海马神经元增殖能力及SOD、GSH-Px、BDNF和NGF的水平显著降低,MDA含量显著增加.与模型组比较,各中药组海马神经元增殖能力及SOD、GSH-Px、BDNF和NGF的水平呈增加趋势,MDA含量呈降低趋势,纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.结论:纹党、红芪、当归、大黄和半夏的水提液可通过提高海马神经元增殖能力、提高衰老细胞的抗氧化能力、增加BDNF和NGF的水平而发挥抗衰老作用,纹党和红芪对海马神经元的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

腺病毒载体转导绿荧光蛋白表达在海马神经元树突量化分析中的应用

构建了表达绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-EGFP),并成功感染体外培养的海马神经元.结果表明:应用表达绿荧光蛋白腺病毒感染的海马神经元,结合荧光显微镜活细胞成像技术,能定量分析神经元树突发育过程的动态变化,可应用于神经元发育形态的动态研究及各种因素对神经元生长发育影响的研究.     

香芹酚对H2O2诱导神经细胞突触损伤的修复作用

主要探究香芹酚在神经细胞中对于神经突起生长的影响.首先,应用不同浓度H_2O_2处理PC12细胞建立神经细胞损伤模型;其次,将药物CA作用于处理后的PC12细胞,用MTT检测细胞活力、Hoechst33342染色观察细胞凋亡的变化;最后,在光镜下观察CA对于细胞突起的影响.另外,培养神经元细胞用神经生长因子作为阳性对照,进一步研究CA对神经细胞突起生长的影响,发现:浓度400μmol/L H_2O_2能明显地诱导PC12细胞凋亡,增加细胞凋亡率,导致神经突起短缩;而浓度0. 01 mmol/L的CA能明显降低细胞凋亡率,使神经突起延伸,对神经元细胞突起生长也有一定的促进作用.研究结果显示CA可保护神经细胞损伤,降低神经细胞凋亡,促进神经突起的生长.     

雌激素受体α在抑郁症模型大鼠海马中的分布

观察雌激素受体α(ERα)在正常大鼠和抑郁症模型大鼠海马中的分布.采用慢性不可预见性应激结合孤养方式构建抑郁症模型,Open-field法观察动物的抑郁行为,免疫组织化学方法观察海马神经元中ERα的分布.结果表明:与对照组相比,抑郁组大鼠水平运动、垂直活动和理毛次数显著减少(P0.01),体重增幅和糖水消耗量显著性下降(P0.01);在对照组和抑郁组,ERα免疫反应阳性神经元主要分布在海马的锥体层和颞叶皮层,DG区较少;与对照组相比较,抑郁组海马中ERα免疫阳性细胞数和染色强度均明显减少和降低;在对照组ERα染色主要位于神经元的胞核、胞质和/或突起,在抑郁组ERα染色主要位于神经元的胞质和突起,而位于胞核的则很少见.抑郁症的雌激素功能缺失或弱化机制,可能是应激诱导抑郁症过程中导致雌激素通过ERα核受体信号通路发挥神经保护作用的能力减弱.     

新生大鼠大脑皮层和海马神经元体外培养方法及改进

探索用24 h内新生SD大鼠进行神经元体外培养的方法.取新生SD大鼠的大脑皮层和海马,胰酶消化5～10 min后,放入含100 g/L血清的DMEM/F12培养基中培养.24 h后,更换含B27无血清培养基.以后每隔1d,半换液.结果显示绝大部分神经元于第2天长出突起,第3天神经元间形成复杂的联系,第7天神经元发育基本成熟.经神经元特异性烯醇酶(NSE)鉴定,培养细胞均为神经元,纯度可达90%以上,可以用于实验.     

枣仁皂甙A对海马神经细胞的影响

在实验室建立了体外培养新生大鼠海马神经细胞方法，观察和研究枣仁皂甙A（JuA）对海马神经细胞生长的影响，用免疫组化和免疫荧光法鉴定神经细胞，M1rr检测神经细胞存活率。试验结果表明，培养细胞为高纯度的海马神经细胞，JuA组的海马神经细胞存活率明显高于对照组（p〈0．01），且呈现一定剂量相关性，提示JuA对体外培养的新生大鼠海马神经细胞的生长有一定的促进作用     

胎鼠DRG神经元细胞培养方法的建立

目的建立胎鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元原代培养的方法。方法无菌条件下取E16天的胎鼠DRG进行原代培养,观察神经元生长状态并用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果培养的DRG神经元可存活1个月左右,并长出突起,形成密集的网络。NSE鉴定细胞阳性表达率高,神经元达到90%左右纯度。结论本文建立了DRG神经元细胞简洁、经济、高效的培养方法并成功鉴定了神经元。为对神经元的深入研究提供了实验模型。     

脑缺血大鼠大脑皮质IGF-Ⅱ免疫阳性神经元的变化及复方丹参的影响

目的:观察脑缺血大鼠大脑皮质胰岛素样生长因子II(IGF-II)免疫阳性神经元的变化,并探讨复方丹参的抗缺血机制。方法:双侧颈总动脉结扎建立永久性脑缺血模型,复方丹参腹腔内注射后用ABC法显示IGF-II免疫阳性神经元并进行定量分析。结果:大鼠大脑皮质II-V层有较丰富的IGF-II免疫阳性神经元分布,阳性细胞多见一个细长的突起。对照组大鼠阳性神经元分布较均匀、不密集,60、120、180 d光密度无明显变化;脑缺血组大鼠60 d时密集,较对照组增多明显,光密度增高,但120、180 d数量有所减少,光密度下降,但仍多于对照组。生理盐水处理组IGF-II免疫阳性神经元的变化与单纯缺血大鼠对应时间点相似,用丹参处理后60 d,阳性神经元的数量较缺血组和生理盐水处理组数量减少,光密度未见明显差异,120 d时数量仍然较密集,多于对照组,180 d进一步减少,接近对照组,但多突起的阳性细胞多见。结论:脑缺血性刺激可诱导大鼠大脑皮质IGF-II免疫阳性神经元增多,丹参干预后IGF-II免疫阳性神经元未见明显增多,但表达IGF-II免疫阳性神经元形态特征发生变化。     

抗性棉铃虫神经细胞的离体培养和超微结构分析

对棉铃虫幼虫神经细胞进行了离体培养,并建立了其体外培养的实用方法。神经细胞在增补棉铃虫幼虫血淋巴的TC-100培养基中可贴壁生长,存活5-7d,培养基中不加血淋巴,而增补谷氨酰胺时,细胞也可贴壁生长,但接种24h后出现老化现象,增补适量葡萄糖,细胞可存活22-28d。细胞存活的最适pH值为6。4.90%的细胞具多条突起,与在体内生长有明显区别。棉铃虫抗性种群、对照种群、同种群不同龄期幼虫以及同一个体胸、腹神经节的神经细胞体外培养时形态无明显差异,但抗生品系幼虫运动神经元内线粒体明显增多,且神经围鞘与神经世膜厚度之比明显增加。     

跑台运动对抑郁模型大鼠学习记忆及海马CA1区BDNF表达的影响

目的：观察4周跑台运动对慢性应激致抑郁大鼠空间学习记忆能力,血浆皮质醇（Cortisol,cort）含量和海马CA1区脑源性神经营养因子（Brain Derived Neurotrophic Factor,BDNF）表达的影响.方法：30只SD大鼠随机分为正常对照组、应激模型组及应激运动组,制作慢性不可预见性应激模型,用八臂迷宫实验观察各组大鼠学习记忆等行为学指标的变化,放射免疫法测试大鼠血浆cort含量,免疫组织化学结合图像半定量方法对海马CA1区BDNF神经元的数量及面积进行测量和分析.结果：慢性应激致抑郁大鼠血浆cort含量增加,八臂迷宫实验中应激大鼠完成八臂迷宫时间显著延长,工作记忆错误次数、参考记忆错误次数及总记忆错误次数均显著增加,海马CA1区BDNF表达减弱.而长期跑台运动可以显著改善抑郁模型大鼠的学习记忆能力,血浆cort含量降低,海马CA1区BDNF表达增强.结论：跑台运动可改善抑郁模型大鼠的学习记忆能力,机理可能与长期运动降低抑郁大鼠的血浆cort水平、拮抗HPA轴功能亢进及增强海马CA1区BDNF的表达有关.     

大鼠海马发育过程中netrin-1、nogo-A和tsp-1 mRNA的表达

目的:探讨神经元突起定向生长和突触形成过程的规律。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠发育不同阶段胶质细胞源性netrin-1、nogo-A和tsp-1 mRNA的表达。结果:RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合,未出现与DNA相同的杂带。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在胚胎、新生和成年时灰度较均一。netrin-1 mRNA以胎鼠和新生大鼠表达较多,成年大鼠弱表达(P<0.01)。nogo-A在各个阶段均呈高表达,以胎鼠和新生大鼠较多,其中新生大鼠表达最多(P<0.01),成鼠相对较低(P<0.01)。tsp-1以胎鼠和新生大鼠表达较多,成年大鼠表达微弱(P<0.01)。结论:大鼠海马胚胎和新生后是突起定向生长的主要阶段,抑制突起的生长则发生在发育的各个阶段,以新生后为主,突触结构和功能的发育发生在胚胎和新生后阶段。     

强直电刺激海马致痫后大鼠大脑皮质NOS神经元变化研究

采用强直电刺激大鼠海马建立致痫模型,观察NOS神经元在致痫大鼠和正常大鼠大脑皮质的分布特征,探讨NO在癫痫发作中的作用。实验结果表明,建模组大脑皮质的阳性细胞数较正常组明显增多NOS神经元弥散分布于致痫大鼠大脑皮质,细胞胞体较大,并借突起相互交织成网。由此可得到如下结论：癫痫发生时脑内NO作用明显,这可能与癫痫引起的神经元损伤及NO介导的痫性放电的发生、传播、汇集有关;NOS—NO途径可能参与癫痫的启动与传播。     

海洋胶原肽改善老年记忆作用试验研究

为探讨海洋胶原肽(MCP)对老年学习记忆的改善作用及其机制,选用20月龄雌性C57BU6J小鼠,随机分为老年对照组和3个MCP干预组,分别喂饲添加0、0.22%、0.44%和1.32%MCP的特殊加工饲料.另设3月龄青年对照组,喂饲普通小鼠生长饲料,干预6个月后应用跳台试验和Morris水迷宫试验进行行为学检测:nissl染色观察海马形态学;同时检测各组动物肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达情况.结果表明,MCP干预后老龄小鼠的空间学习记忆能力和被动回避能力明显提高;0.44%MCP干预组小鼠肝脏SOD活性显著高于老龄对照组,而MDA含量显著降低;0.44%和1.32%MCP干预组小鼠海马区BDNF的表达高于老年对照组.各组动物海马神经元数量无明显改变.因此,海洋胶原肽具有预防年龄造成的学习记忆能力下降的功能.其作用机制可能是抗氧化活性和促进BDNF的表达.     

文蛤多肽对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

研究了文蛤多肽对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用,结果表明,经5.0μg/mL文蛤多肽处理的体外培养的人肝癌细胞(SMMC-7721)生长缓慢,倍增时间延长,细胞生长抑制率达89.4%;处理后的癌细胞形态发生明显改变,处于G0/G1期的细胞明显增多,而S期和M期细胞减少,出现明显的凋亡峰,凋亡率为22.3%.实验结果表明,文蛤多肽能有效地抑制体外培养肝癌细胞的增殖活动,可通过改变肝癌细胞的形态及细胞周期而明显抑制细胞的增殖.     

地黄饮子含药脑脊液对海马神经元损伤的影响

探讨地黄饮子对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导体外原代培养海马神元损伤的保护作用．把离体培养的海马神经元分为6组：空白对照组、模型组、、VE组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组,分别测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和MTT自动比色微量分析,观察中药地黄饮子脑脊液对受损神经元的影响．表明中药地黄饮子脑脊液能明显降低Aβ25-35诱导的海马神经元细胞培养液中LDH含量,提高细胞生存活力．地黄饮子有效成分能穿透血脑屏障,对抗Aβ25-35诱导的海马神经元损伤,表现出对海马神经元一定的保护作用．