有机磷对胆碱酯酶作用影响的生化分析

通过对有机磷抑制人乙酰胆碱酯酶（AchE）和丁酰胆碱酯酶（BuchE）以及猪和牛丁酰胆碱酪酶活性的测定，发现人乙酰胆碱酯酶和丁酸胆碱酯酶对有机磷较为敏感，结果表明，该方法既灵敏又稳定．     

植物酯酶分离纯化及酶促反应条件优化的研究

目的:建立一种快速检测牛肉中有机磷农药残留的方法.方法:从新鲜小麦粉、黄豆粉和玉米粉中分离植物酯酶,真空冷冻浓缩,羧甲基纤维素层析,真空冷冻干燥提取植物酯酶,并通过试验测得其酶促反应最适温度36.8℃,最适pH 7.7,酶促反应时间3 min,敌敌畏对其抑制时间8 min,显色剂2,6-二氯靛酚的最大吸收波长606 nm.结论:在相同条件下,提纯后的植物酯酶检测模拟有机磷农药残留阳性牛肉样品抑制率为99.5%,市售丁酰胆碱酯酶测得的抑制率为99.8%%,两者检测结果高度一致.     

有机磷生物传感器的研制

有机磷生物传感器对于环境分析十分必要.利用乙酰胆碱酯酶与有机磷农药之间的特殊的亲和力,以乙酰胆碱酯酶为固定相,采用石英晶体用来做载体的材料,研制有机磷传感器.初步得到酶固定的最佳pH值及其浓度环境为pH=7,乙酰胆碱酯酶浓度为C=0.0133mol.l-1.并对敌百虫溶液进行测定,证明了pH值和浓度条件的合理性.     

分子模拟研究多奈哌齐及其衍生物对AChE/BChE的抑制活性和选择性

乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱酯酶(BChE)是具有高度同源的蛋白质,其在胆碱能神经系统中发挥着重要的作用.在本文中,我们选取了已投入临床使用的药物多奈哌齐及其吡啶衍生物对AChE/BChE的抑制活性和选择性进行了研究.我们采用MM-PBSA方法对两种抑制剂与AChE/BChE间的相互作用能进行了计算,结果表明范德华相互作用在总的结合能中贡献最大,且多奈哌齐的吡啶衍生物表现出比多奈哌齐更高的抑制活性以及选择性,所得计算结果与实验上抑制剂的抑制常数有较好的吻合.     

基于酶三维结构的乙酰胆碱酯酶抑制剂—石彬碱甲及类似物研究

石杉碱甲是我国首先从石杉属植物Ｈａｐｅｒｚｉａ ｓｅｒｒａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｔｒｅｖ。中分离得到的一种新的生物碱,具有明显的抗胆碱酯酶作用,对老年痴呆病人可明显改善其记忆功能。从基于酶的三维结构出发对石杉碱甲及其类似物作用于乙酰胆碱酯酶的作用机理进行了理论计算研究。首先从同源的电鳐乙酰胆碱酯酶的三维晶体结构为模板,构建人乙酰胆碱酯酶的三维结构和活性中心的组成,再用分子模拟方法和分子力学方法得到石     

蚯蚓乙酰胆碱酯酶的分离与固定化试验研究

从蚯蚓中提取乙酰胆碱脂酶,通过硫酸铵盐析,离子交换层析等方法获得了较纯的胆碱酯酶,并对其部分性质进行测定.分别采用鸡蛋膜固定化法,活化载体-共价结合法和戊二醛交联法进行酶的固定.结果表明:蚯蚓体内乙酰胆碱酯酶含量较低,且纯化过程中损失较大,结果欠佳;活化载体-共价结合法固定得到的乙酰胆碱酯酶酶膜活性高,酶不易损失,重现性好.为建立快速的痕量有机磷类的酶法分析方法奠定了基础.     

分子模拟研究1,3,4-噻二唑类衍生物对AChE/BChE的生物活性和选择性机理

乙酰胆碱酯酶(ACh E)和丁酰胆碱酯酶(BCh E)均属于胆碱酯酶类(Ch Es),具有不同的催化特性及抑制模式,是具有高度同源性的两种蛋白质,在神经系统中发挥着重要的作用.揭示胆碱酯酶抑制剂的选择性机理是开发新型的阿尔茨海默症药物的重要课题.我们研究了3种1,3,4-噻二唑抑制剂对ACh E/BCh E的生物活性和选择性机理.采用MM-PBSA方法对3种抑制剂与ACh E/BCh E之间的相互作用能进行了计算.研究结果表明,3种抑制剂对ACh E均表现出较高的活性,说明这3种抑制剂能够选择性抑制ACh E,所得计算结合自由能排序与抑制剂的实验抑制常数吻合较好.     

基于普鲁士蓝/碳纳米管纳米棒修饰电极用于有机磷农药检测的研究

通过在碳纳米管(MWCNTs)表面原位自发还原形成普鲁士蓝纳米颗粒(PB),制备PB包覆的MWCNTs(PB@MWCNTs)纳米棒,并以壳聚糖(CS)为交联剂,制备了有机磷农药电流型乙酰胆碱酯酶(AChE)生物传感器.实验表明,PB@MWCNTs纳米棒独特的纳米结构,增强了PB稳定性,加快了电子传递的速率,保持了乙酰胆碱酯酶(AChE)活性.制备的传感器对有机磷农药(OPs)呋喃丹的检测具有检测限低3 nmol/L、灵敏度高和使用寿命长等优点.     

薄层层析—酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸类杀虫药剂

提出了用薄层－抑制乙酰胆碱酯酶法,检查蔬菜,水果,粮食中农药残留的方法,此法对乙酰胆碱酯酶的抑制是特异的,它适用于在不具备精密仪器设备的小型实验站内检测农药残留量,对大多数有机磷和氨基甲酸酯类农药来说,其检测限在0.5-1.0μg/mL范围。它为在现场测定农药残留提供一种廉价和快速的方法。     

荧光探针自组装膜对久效磷农药的检测

采用CdSe量子点作为荧光探针,将巯基丙酸稳定的CdSe、聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)和乙酰胆碱酯酶(ACHE)通过静电吸引法,层层组装到石英表面,构建一种荧光性自组装多层膜Quartz/PDDA/CdSe/PDDA/ACHE/PDDA.利用有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制机理,成功地将自组装膜用于痕量久效磷农药的检测.实验表明,在乙酰胆碱酯酶被抑制16 min,底物乙酰胆碱浓度为8.8 mmol.L-1的条件下,该膜对久效磷的检测限低至48.64 nmol.L-1.所构建的自组装膜稳定性较好、灵敏度较高,可以再生使用.     

抑制剂存在下不同种群烟粉虱乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布及其与抗药性的关系

为了探讨烟粉虱Bemisia tabaci不同种群个体乙酰胆碱酯酶敏感性差异及其与抗药性的关系,我们选用室内饲养的烟粉虱SUD-S敏感品系和6个田间抗性种群,采用酶标板酶动力学法测定了各品系(种群)乙酰胆碱酯酶对抑制剂的敏感性反应以及抑制剂存在时各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布。结果表明:在抑制剂浓度为300μmol/L时,敏感品系乙酰胆碱酯酶的活性基本上被完全抑制,可以明显地区分敏感品系与田间抗性种群。在抑制剂浓度为2000μmol/L时,各抗性种群个体乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布差异明显,其中ZZ-R种群和FZ-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布相似,大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在1.00～1.80mOD/min之间;SM-R种群和ND-R种群的乙酰胆碱酯酶残余活性频率分布也相似,大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分布在0.40～1.00mOD/min之间;LY-R和NP-R种群大部分个体的乙酰胆碱酯酶残余活性分别分布在1.00～1.60mOD/min和0.80～1.20mOD/min之间。各抗性种群乙酰胆碱酯酶高残余活性(大于1.00mOD/min)个体频率与对敌敌畏的抗性水平之间具有...     

特异性丁酰胆碱酯酶探针的研究进展

哺乳动物体内的丁酰胆碱酯酶（butyrylcholinesterase,BChE）能够将学习记忆相关的神经递质乙酰胆碱降解为胆碱和乙酸,以维持胆碱能系统的稳态。由肝脏产生的BChE经血液循环分布于全身多种组织中,具有多种药理相关活性,并且能够作为反映肝脏健康或疾病状况的生物标志物。因此,检测BChE的活性以及了解其在体内的分布和表达情况是开展相关研究基础,本综述简要概述了最近报道的用于定量检测和实时监测BChE的特异性荧光或化学发光探针。     

中华稻蝗山西晋源种群乙酰胆碱酯酶生化特性研究

对中华稻蝗山西晋源种群五龄若虫和成虫进行了马拉硫磷敏感性的生物测定，同时对若虫和成虫的乙酰胆碱酯酶（ACHE）特性进行了比较研究，生物测定结果表明，晋源种群若虫的LD50值（4．94μg／g虫重）是成虫（2．44μg/g虫重）的2．02倍；有机磷抑制剂对该种群若虫和成虫的AChE的体外抑制研究表明，晋源成虫AChE对氧化毒死蜱、对氧磷、甲基内吸磷的敏感性比晋源若虫分别高1．39、1．34和1．24倍．乙酰胆碱酯酶动力学研究结果表明，若虫动力学参数Km值和Vmax值均较成虫为高；用乙酰硫代胆碱（ATC）做底物测定AChE活性，若虫AChE活性是成虫的1．22倍．中华稻蝗晋源种群若虫对有机磷抑制剂敏感性下降可能与其AChE活性的增高有关，而成虫与若虫之间AChE活性的差异可能与不同阶段虫体对马拉硫磷选择压力的差异有关。     

远志、茯苓煎剂对小鼠空间学习记忆障碍的影响

目的观察远志、茯苓煎剂(Polygala tenuifolia and Poria cocos decoction,DPP)对戊巴比妥钠所致空间方向辨别障碍模型小鼠行为学的影响,并探讨其可能的作用机制.方法应用Morris水迷宫观察DPP对戊巴比妥钠所致的空间方向辨别障碍模型小鼠的影响,并测定其血清乙酰胆碱酯酶的含量.结果 DPP能缩短模型小鼠在定位航行实验中找到平台的潜伏期;缩短在空间探索实验中第一次到达平台的时间,并增加穿越平台的次数;DPP还能有效降低模型小鼠血清中乙酰胆碱酯酶的含量.结论 DPP能改善戊巴比妥钠所致的小鼠空间方向辨别障碍,改善空间方向辨别障碍小鼠的学习记忆能力;DPP可降低小鼠脑内乙酰胆碱酯酶活性,提示其可能通过抑制胆碱酯酶提高脑内乙酰胆碱水平而发挥改善学习记忆的作用.     

甘蒙锦鸡儿中乙酰胆碱酯酶抑制剂的分离及结构鉴定

从传统中药甘蒙锦鸡儿(Caragana opulens)树皮中提取分离具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的化合物.利用各种色谱法分离化学成分,然后通过理化性质和现代波谱技术鉴定其结构.得到的化合物采用薄层色谱生物自显影法初步筛选其乙酰胆碱酯酶抑制活性,再用改良的Ellman法进一步测定其对乙酰胆碱酯酶的抑制率.共分离得到7个化合物,分别鉴定为1,4-二(苯并恶唑-2-基)萘(1)、9,12,13-三羟基-10反式十八烯酸(2)、对羟基苯乙酮(3)、香草酸(4)、对羟基反式肉桂酸(5)、反式肉桂酸(6)、间羟基苯甲酸(7).其中化合物3能在薄层板上形成明显白斑,进一步测定其对乙酰胆碱酯酶抑制的IC50为1.4mmol/L,结果表明化合物3具有乙酰胆碱酯酶抑制活性.     

中草药中乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选

阿尔茨海默病是一种慢性中枢神经系统退行性疾病,是老年痴呆的主要类型。对于该病的治疗,一个有希望的策略是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用。为了寻找潜在的、高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,5种中草药的生物碱提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性通过经典的Ellman比色法被评价。结果表明,元胡与黄柏的生物碱提取物显示了显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其余3种中草药的生物碱提取物显示了非常弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性。结果暗示,从中草药的生物碱提取物中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂是可行的,能够为开发治疗阿尔茨海默病的新药提供有用的先导化合物。     

小菜蛾Plutella xylostella羧酸酯酶、酰胺酶及乙酰胆碱酯酶的研究

研究结果表明,小菜蛾(Plutella xylostella)乙酰胆碱酶、酰胺酶的最适pH值分别为8.0和8.5。pH值对闳酸酯酶活力影响较小,酰胺酶和羧酸酯酶反应速度在反应开始60钟内,仍在线性范围,乙酰胆碱酯酶反应速度在反应开始的8分钟内呈线性关系。羧酸酯酶、酰胺酶和乙酰胆碱酯酶的Vmax分别为551.81(nmol/mg,mln)、5.25×10~(-4)(μmol/mg.min)和20.36(nmol/mg.min);km分别为5.52×10~(-5)(mol)、1.18×10~(-3)(mol)和8.33×10~(-3)(mol)。     

蕨类植物丙酮提取物对乙酰胆碱酯酶活性抑制作用的研究

目的 对采自浙江天目山的40 种蕨类植物丙酮提取物进行乙酰胆碱酯酶活性抑制作用的研究.方法 采用乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选模型.结果 在供试质量浓度在1 mg/mL时,40 种植物的丙酮提取物均具有明显的的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中假长尾复叶耳蕨、假蹄盖蕨和延羽卵果蕨等11种蕨类植物表现出较强的抑制活性,抑制率均大于90%,其余大部分植物的抑制率均大于60%.而在供试质量浓度在0.025 mg/mL时,只有少数植物表现出较高的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其中虎尾铁角蕨的抑制率为(65.36 ± 1.65%),蜈松草的抑制率为(53.30 ± 3.32%),其余大部分植物的抑制活性均小于50%,甚至有些植物提取物不仅对乙酰胆碱酯酶没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用.结论 假长尾复叶耳蕨等蕨类植物丙酮提取物的乙酰胆碱酯酶抑制作用值得进一步研究.     

用于有机磷农药残留检测的植物酯酶筛选

利用酶法分析中的酶抑制原理，在不同pH条件下对可被有机磷农药抑制的不同来源的植物酯酶进行了筛选。以总酯酶活力和对敌敌畏的灵敏度为指标，确定了豫麦39中提取的植物酯酶为最佳的农药检测用酶，其最佳检测pH为6.5．     

饲养温度对小菜蛾(Plutella xylostella)AchE和CarE活力的影响

在湿度定义为干、湿球温度差为3℃、光照强度10000—12000lx、光照周期14L：10D条件下，探索饲养温度（X：24—36℃）之变化对小菜蛾（Plutella xylostella）4龄幼虫乙酰胆碱酯酶（Ache）和羧酸酯酶（CarE）活力（Y）的影响效应。实验结果表明，活力指数随着饲养温度的升高而降低，两者之间存在显著的线性相关关系：温度与乙酰胆碱酯酶（AchE）活力两者间的相关关系函数式为Y=0．3327—0．0068X；与羧酸酯酶（CarE）活力的为Y=3．1278—0．0780X。