文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变…

十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ），脲（Ｕｒｅａ）等变性剂作用于ＡＣＰａｓｅ，以荧光法跟踪该酶的构象变化，随着ＬＤＳ浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移，而在Ｕｒｅａ中，荧光强度随着变性剂浓度上升而下降，发射峰明显红移，由３３０－３５０ｎｍ。分别测定其变性及失活的动力学常数，比较酶构象及催化活力的关系，结果表明：变性与失活为快相和慢相的一级反应，在ＬＤＳ作用下，失活速度大于变性速度，属于快活力慢构象变化的…     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变化的研究

十二烷基硫酸锂(LDS),脲(Urea)等变性剂作用于ACPase,以荧光法跟踪该酶的构象变化,随着LDS浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移,而在Urea中,荧光强度随着变性剂浓度上升而下降,发射峰明星红移,由330～350nm,分别测定其变性及失活的动力学常数,比较酶构象及催化活力的关系,结果表明:变性与失活为快相和慢相的一级反应,在LDS作用下,失活速度大于变性速度,属于快活力慢构象变化的模式,Urea的作用为变性速度大于失活速度,属于快构象慢活力变化的另一种模式,Urea作用后的变性酶,在测定其活力的10min内,没有观察到底物对变性酶的修复作用,以及稀释对变性酶的复活效应。     

中华猕猴桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与活力变化研究

研究中华猕猴桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱、紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化；酶的内源荧光强度随甲醇浓度的增加而增高，且发射峰略有红移．在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｎｍ范围内出现正峰，随甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移．ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ──螺旋度有不同程度的减少．在１０％～５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象，当甲醇浓度为３０％和４０％时，激活程度最大，约为天然酶活力的１５０％．     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

中华猕桃蛋白酶在甲醇溶液中的构象与变化研究

研究中华猕桃蛋白酶在不同浓度（Ｖ：Ｖ）甲醇存在下的内源荧光发射光谱，紫外差光谱及ＣＤ光谱的变化，并测定相应的活力变化，酶的内源荧光强度随甲醇深度的增加而增高，且发射峰略有红移。在甲醇存在下，酶的紫外差光谱在２２５～２３５ｍｎ范围内出现正峰，甲醇浓度增高，峰强度增大，且峰位蓝移。ＣＤ谱变化表明，在不同浓度甲醇存在下，酶的ａ－－螺旋度有不同程度的减少。在１０％－５０％甲醇存在下，酶有不同程度的激活现象     

磷酸盐及其结构类似物对文昌鱼酸性磷酸酶的影响

研究了磷酸盐（ＨＰＯ￣（２－）＿４）及其结构类似物钼酸盐（ＭｏＯ￣（２－）＿４），钒酸盐（ＨｖＯ￣（２－）＿４），钨酸盐（ＷＯ￣（２－）＿４）对文昌鱼酸性磷酸酶活力的影响及其抑制机理。实验结果表明：磷酸盐对文昌鱼酸性磷酸酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型，而其结构类似物则是通过非竞争性抑制的方式抑制酶活力．抑制常数Ｋｉ分别为：磷酸盐：３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ，钼酸盐：５．５×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钒酸盐：７．０×１０￣（－７）ｍｏｌ／Ｌ，钨酸盐：３．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，用酸盐对酶活力呈时间抑制过程，表明该类似物可能通过氧化—还原这种新的抑制机理来抑制酶的活力。     

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性磷酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂．它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体．酶的提纯倍数为６１２．５２．     

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性鳞酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂，它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体。酶的提纯倍数为６１２．５２。     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活…

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位的构象变化五活力变化的关系。酶于０．６ｍｏｌ／Ｌ Ｇｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２－２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系。     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

SDS滴定时氨基酰化酶的溶液构象和活力变化的研究

本文以荧光发射光谱和紫外差吸收光谱的方法，研究了ＳＤＳ滴定氨基酰化酶溶液时构象变化的情况，同时测定了相应的物的活力的变化。实验结果发现酶的构象变化程度与相应的失活的程度大致平行。这表明酶基酰化酶构象的完整性是酶具有催化活力的基础。     

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．     

小鼠生长过程中肝AKP的活性变化及细胞定位

用比色法、酶的原位复性电泳、组织化学和细胞化学方法等分析观察了小鼠生长过程中肝碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)同工酶变化和细胞定位.比色法和细胞化学法研究表明,在小鼠生长过程中,出生第 7天小鼠(D7)肝的AKP活性最强,成体肝(Da)活性最弱; AKP活性在肝小叶内带、中带、外带中的活性呈依次减弱的趋势;细胞化学显示,AKP活性主要出现在肝实质细胞的细胞膜上,尤以胆小管周围的细胞膜上最多.用酶的原位复性电泳测得小鼠生长过程中共出现四条AKP同工酶带,各同工酶活性随着小鼠的生长发育时间不同而发生变化.     

大气中甲醇监测分析方法的探讨

通过一系列实验,找到适合辽化地区的大气中甲醇的监测分析方法,给出各项指标,并进行讨论。     

1000吨/年甘氨酸生产母液中甲醇回收新技术

采用具有新型塔内件的高效填料塔技术，将甲醇回收率提高到９８％以上，甲醇纯度可达９９．８％。同时采用连续水蒸汽直接加热的精馏技术，提高了精馏热效率，节约了热能消耗，生产成本显著降低。应用本技术可创效益近９０万元／年