设施养殖条件下不同因素对拟穴青蟹幼蟹存活率的影响

在水温25.2±1℃、连续充气和pH 7.8～8.03条件下,以蚊帐布和筛绢网制成网笼作为养殖设施,以7个盐度梯度、6种养殖密度和2种网衣材质的3因素多水平实验设计进行幼蟹养殖试验.结果表明:幼蟹存活率均在盐度25时最高,分别为C1 95.0%,C2 90.5%,盐度高于或低于25均有下降趋势,C1和C2在各盐度梯度组累计存活率均差异显著(p＜0.01),而在同一盐度梯度下差异不显著(p＞0.05);C1至C2和C2至C3在盐度5、30、35时发育时间为120±2h,而在盐度10、15、20、25时为96±2h,同时在盐度10、15、20、25组中幼蟹蜕皮的同步性优于盐度5、30、35组.在不同密度条件下,幼蟹均在密度为637 ind/m2时存活率最高,且C1的平均存活率(89.6%)比C2(84.5%)高,C1和C2在同一密度梯度下的存活率差异极显著(p＜0.01).在蚊帐布和筛绢网2种材质养殖容器中,C1的平均存活率分别为90.4%和88.7%.差异不显著(p＞0.05),而C2的平均存活率分别为86.6%和82.6%,差异极显著(p＜0.01),表明C1对养殖容器材质的选择性不强.综上所述,在盐度为25,养殖密度为637 ind/m2,蚊帐布为网衣材质的实验条件下,幼蟹生长最,存活率可达到最高值.     

铬胁迫对拟穴青蟹体内磷酸酶活性的影响

采用生态毒理学方法,研究了水体中Cr6+(0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/L)胁迫1,3,5,7,9 d后对拟穴青蟹鳃、肌肉和肝胰腺中磷酸酶活性的影响,以未添加Cr6+的自然海水组为对照组.结果表明,Cr6+胁迫1 d后拟穴青蟹鳃中酸性磷酸酶(ACP)活性显著升高(p0.05),肝胰腺、肌肉中ACP活性升高不显著(p0.05),Cr6+胁迫9 d后,2.0,4.0,8.0mg/L Cr6+浓度组拟穴青蟹肝胰腺中ACP活性显著降低(p0.05).5 d后不同Cr6+浓度组拟穴青蟹鳃中碱性磷酸酶(AKP)活性一直显著升高(p0.05),胁迫9 d后,0.5,1.0,2.0 mg/L Cr6+浓度组与对照组差异不显著(p0.05),4.0,8.0 mg/L Cr6+浓度组鳃中AKP活性仍显著高于对照组(p0.05).2.0,4.0,8.0 mg/L Cr6+浓度组肝胰腺、肌肉中AKP活性在Cr6+胁迫1 d后显著升高(p0.05).Cr6+胁迫显著影响拟穴青蟹生理生化效应.     

拟穴青蟹GnRH-R的免疫识别

促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体(GnRH-R)对生殖具有重要的调控作用.迄今无脊椎动物GnRH及GnRH-R的研究尚少.本研究采用兔抗人GnRH-R、兔抗果蝇GnRH-R和兔抗海鞘GnRH-R的抗体,应用免疫印迹和免疫共沉淀技术对拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)GnRH-R进行了免疫识别,所得结果如下:1)经免疫印迹检测,拟穴青蟹脑、胸神经团、视神经节和精巢中共有的免疫阳性条带分子质量为45~55 ku.脑和胸神经团中另有一条36 ku条带;在精巢中,兔抗人GnRH-R和兔抗果蝇GnRH-R抗体只有一条28 ku条带,而兔抗海鞘GnRH-R抗体显示有28,36和30 ku的条带.2)利用免疫共沉淀技术,分离出与GnRH-R抗体相结合的两种物质,分子质量分别为38.1和54.0 ku,分别与哺乳动物和非哺乳动物GnRH-R的分子质量接近.该发现提示拟穴青蟹体内存在GnRH-R,为深入了解甲壳动物生殖调控机理提供了理论依据.     

亚硝酸盐急性胁迫对拟穴青蟹相关免疫指标的影响

【目的】探讨亚硝酸盐急性胁迫对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)机体免疫力的影响,为拟穴青蟹养殖模式调整与产业化升级提供基础资料。【方法】测定拟穴青蟹在不同浓度亚硝酸盐(0 mg/L、20 mg/L、60 mg/L、100mg/L、140mg/L)胁迫下其组织中碱性磷酸酶(AKP)活力、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量在受胁迫48h内的动态变化。【结果】亚硝酸盐胁迫浓度达60mg/L以上时,青蟹肝胰腺及肌肉中AKP活力变化显著,肌肉中AKP活力随时间增加呈先升高后降低趋势,各组织中CAT活力变化也呈先升高后降低趋势,表现出一定的"毒兴奋效应",肝胰腺及鳃中MDA含量则随胁迫时间与胁迫浓度变化呈递增趋势。【结论】亚硝酸盐胁迫可通过破坏组织中非特异性免疫酶类体系运转,加剧组织中脂质过氧化方式导致机体免疫力下降。在拟穴青蟹人工养殖中,将亚硝酸盐浓度控制在20mg/L以下,有助于青蟹养殖模式调整与产业化升级。     

不同生境拟穴青蟹螯足肌肉营养品质评价

为探究不同生境、不同食物源拟穴青蟹(Scylla paramamosain,以下简称“青蟹”)的螯足肌肉营养品质的差异,本研究通过采集5种不同生境青蟹(生态青蟹、藤壶青蟹、天然青蟹、混饵养殖青蟹和单饵养殖青蟹),取其螯足肌肉组织测定基本营养成分、氨基酸含量和脂肪酸含量,并通过必需氨基酸指数(EAAI)、支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的比值(F)进行分析。结果表明,生态青蟹的蛋白质含量略高于天然青蟹和混饵养殖青蟹;藤壶青蟹的含水率最高,蛋白质含量最低;5种青蟹的粗脂肪和总灰分含量差异均不显著。生态青蟹的总氨基酸含量和必需氨基酸含量均最高,藤壶青蟹的鲜味氨基酸含量最高;藤壶青蟹的EAAI (112.48)和F (2.36)最高,生态青蟹的EAAI (95.35)和F (1.95)分别与天然青蟹的EAAI (96.15)和F (1.90)基本一致;单饵养殖青蟹的EAAI (72.00)和F (1.53)均最低。生态青蟹的单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸含量最高,其二十二碳五烯酸+二十二碳六烯酸(EPA+DHA)显著高于天然青蟹,且部分不饱和脂肪酸含量显著高于天然青蟹、混饵养殖青蟹和单饵养殖青蟹。从蛋白质、总氨基酸、必需氨基酸和不饱和脂肪酸的含量来看,生态青蟹的含量最高;从EAAI和F来看,藤壶青蟹的评价最高,说明2种红树林生态修复产出的青蟹品质较好。     

拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定

以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的血淋巴细胞为材料,刀额新对虾(Metapenaeus ensis)的血淋巴细胞为参照系,利用倍性分析仪结合外标定法测定其细胞核DNA含量.拟穴青蟹的血淋巴的细胞核DNA含量是2.677 pg/2c.此外,本文作者还发现拟穴青蟹血淋巴与肌肉组织细胞核DNA含量存在差异.报道了我国拟穴青蟹细胞核DNA含量,并且提供了拟穴青蟹的细胞遗传学特征,为蟹类系统重建与演化过程分析提供新资料.     

pH胁迫对拟穴青蟹体内几种免疫因子的影响

采用酶学分析方法研究pH(分别为4.5、6.0、7.5、9.0、10.5)胁迫下拟穴青蟹血清酚氧化酶(phenoloxidase,PO)以及血清、肌肉和肝胰腺超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),溶菌酶(lysozyme,UL)活性和抗菌力(antibacterial activity,Ua)等免疫因子的变化.结果表明,pH胁迫对拟穴青蟹血清PO和总SOD活性及Ua影响显著(p<0.05),而对UL活性影响不显著(p>0.05),对肌肉和肝胰腺总SDO活性影响显著(p<0.05);相同pH下肝胰腺总SOD活性差异显著(p<0.05),肌肉和血清总SOD活性差异不显著(p>0.05).综上所述,pH胁迫对拟穴青蟹的免疫反应影响显著,在pH 7.5～9.0范围内,其免疫力强.     

青蟹(Scylla spp.)养殖现状及拟穴青蟹(S. paramamosain)种群生物学研究

综述了国内外青蟹养殖的基本情况,包括养殖模式、养殖历史、人工育苗的现状,我国青蟹养殖在海水养殖中的地位及其特点,以及我国拟穴青蟹种群生物学研究现状及其在养殖中的重要性.     

不同底基隐蔽物、放养密度和饲料对网箱培育拟穴青蟹幼蟹的影响

在网箱内通过设置不同底基隐蔽物、放养密度和投喂不同饲料来进行拟穴青蟹幼蟹的中间培育,以观察其对幼蟹生长、存活率及残肢率的影响,培育时间为20 d。结果表明：在放养密度和投喂饲料相同的情况下,用网片做底基隐蔽物,幼蟹培育的成活率显著高于用泥蚶壳或砂做底基物的试验组（P〈0.05）;而不同底基物对幼蟹的残肢率无显著影响（P〉0.05）。在底基物和所投饲料相同的情况下,放养密度为150只/m^2的试验组比放养密度为250只/m^2的试验组幼蟹成活率要高,而残肢率要低（P〈0.05）。在底基物和放养密度相同而所投饲料不同的情况下,幼蟹成活率和残肢率在组间均无显著差异（P〉0.05）。不同试验组间幼蟹出箱的规格无显著差异（P〉0.05）。     

拟穴青蟹群体遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR技术对拟穴青蟹（Scylla paramamosain）3个地理群体：福建群体（FJ）、广西防城港群体（FC）和北海群体（BH）的遗传多样性进行检测。用10对ISSR引物对90个个体进行PCR扩增,用POPGENE32计算遗传参数,并用ARLEQUIN软件进行AMOVA分子变异分析。结果共检测到63个位点,多态位点数为56。福建、防城港和北海群体Nei＇s基因多样性指数（He）分别为0.2670、0.1819和0.2257,Shannon＇s信息指数（I）分别为0.3945、0.2708和0.3371,遗传多样性水平从高到低依次为FJ〉FC〉BH。He和I在群体水平上分别为0.2248和0.3341,在物种水平上分别为0.3186和0.4337。拟穴青触32.34%的变异发生在群体间,67.66%的变异发生在群体内,3个群体间的遗传分化系数为0.1542,产生了一定的遗传分化。     

人工感染呼肠孤病毒对拟穴青蟹部分免疫因子的影响

采用注射和浸泡的方式人工感染拟穴青蟹呼肠孤病毒,研究了其对拟穴青蟹血细胞密度以及血清中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AKP)活力的影响.结果表明:注射(第Ⅱ组)和浸泡(第Ⅳ组)方式均能感染健康青蟹,病发死亡时间为7～9 d,死亡率达100%,血细胞平均密度在试验36～72 h间迅速上升并达最高值,其血细胞密度最高值分别为1.4008×107cells/mL与1.8243×107cells/mL;感染病毒的青蟹PO活性均大致呈现下降的趋势,其中,第Ⅳ组感染12 h青蟹PO活性相对对照组显著升高(P<0.05),其值为(6.90±1.54),达实验所测PO活性最高值;各实验组血清SOD活性呈无规律的变化;AKP活性感染组与对照组表现不同.表明测定血细胞密度以及PO和AKP活性可用来辅助诊断青蟹疾病,而SOD活性变化不能很好地表征青蟹受病毒感染的状况.     

低温季节不同种群拟穴青蟹线粒体呼吸速率和酶活性的差异

已有研究显示分布于我国东南沿海的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)可能已分化为南、北2个种群.在低温季节从不同纬度的3个海域采集拟穴青蟹的野生个体,比较其南、北种群线粒体呼吸速率和酶活性的差异.结果如下:除了乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶以及肝胰腺细胞色素C氧化酶外,无论是北方种群还是南方种群,生活在纬度较高的宁波海域的拟穴青蟹的线粒体呼吸速率和酶活性都显著高于生活在纬度较低的儋州海域的个体;同一海域的南、北种群间,鳃、肌肉和肝胰腺线粒体呼吸速率和细胞色素C氧化酶活性总体上都是北方种群高于南方种群,纬度越高的海域的南、北种群间差异越显著;南、北种群肌肉的乳酸脱氢酶、丙酮酸激酶和己糖激酶活性相比,宁波海域北方种群的己糖激酶活性显著高于该海域的南方种群.上述结果表明,分布于我国东南沿海的拟穴青蟹的北方种群比南方种群对温度有更有效的代谢补偿能力,且纬度越高,二者的差异越显著,由此可见分布于我国东南沿海的拟穴青蟹的北方种群比南方种群更能适应低温环境.     

不同性别拟穴青蟹肝胰腺和肌肉的营养组成比较研究

比较了不同性别拟穴青蟹"肉蟹"的肝胰腺指数、出肉率,并分析了肝胰腺和肌肉的常规生化、脂肪酸和氨基酸组成。结果显示:(1)雌蟹的肝胰腺指数显著高于雄蟹,但雌雄蟹的出肉率非常接近,无显著差异(P0.05);(2)雌蟹肝胰腺和肌肉中的粗蛋白含量显著高于雄蟹(P0.05),水分和脂肪含量低于雄蟹;(3)雌雄蟹之间肝胰腺和肌肉的脂肪酸组成差异较小,主要表现在雌蟹肝胰腺的C20:4n6和Σn-6PUFA含量显著低于雄蟹,n-3/n-6和DHA/EPA比值显著高于雄蟹(P0.05);(4)雌蟹肝胰腺和肌肉的绝大多数氨基酸(16种)含量以及必需氨基酸总量ΣEAA、非必需氨基酸总量ΣNEAA和总氨基酸含量TAA均显著高于雄蟹(P0.05)。整体上,不同性别拟穴青蟹"肉蟹"相比,雌蟹的肝胰腺含量较多,且其肝胰腺和肌肉均具有更好的营养价值。     

氨氮胁迫对拟穴青蟹腺苷三磷酸酶和磷酸酶比活力的影响

采用实验生态学的方法研究了海水中分别添加氨氮(以NH4Cl作为氨氮源)0(C0组,对照组)、10(C10组)、20(C20组)、30(C30组)、40 mg/L(C40组),胁迫24,48,72,96 h对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)组织器官中腺苷三磷酸酶(ATPase)和磷酸酶比活力的影响.结果表明,拟穴青蟹鳃Na+-K+-ATPase比活力,C10组、C20组在胁迫24 h时随氨氮浓度升高而增大,胁迫48,72和96 h时则随氨氮浓度升高而下降(p<0.05),C30组、C40组则随胁迫时间延长一直下降;而C40组拟穴青蟹鳃Ca2+-Mg2+-ATPase比活力却随胁迫时间延长而升高.氨氮胁迫48,72和96 h,拟穴青蟹鳃和肝胰腺酸性磷酸酶(ACP)比活力显著下降(p<0.05);肌肉ACP比活力则随氨氮浓度升高和胁迫时间延长而显著下降(p<0.05);鳃和肝胰腺碱性磷酸酶(AKP)比活力随着氨氮浓度升高而下降(p<0.05);肌肉AKP比活力在氨氮胁迫24 h时随氨氮浓度升高而升高(p<0.05).可见,氨氮胁迫显著影响拟穴青蟹生理效应.     

拟穴青蟹视神经节孕酮受体的免疫识别

研究表明,在甲壳类中可能存在类固醇的调控系统,然而核受体在进化的过程中是否依赖配体作用一直存在着争论.应用免疫印迹和免疫组织化学方法对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)视神经节孕酮受体(PR)进行免疫识别.结果发现,拟穴青蟹视神经节中存在PR免疫阳性反应;其分子量约为70 ku,该物质广泛分布于视神经节的神经细胞核内.PR在拟穴青蟹视神经节的发现暗示着其类似于脊椎动物调节机制的存在;PR在神经细胞核中的定位表明其为核受体,很有可能在基因水平上参与拟穴青蟹视神经节的生理活动调节.     

不同造林密度对杂交相思生长的影响

为了找出杂交相思人工林合理的种植密度,以达到较佳经济效益,笔者选用5种不同密度,采用单因素、随机区组设计进行杂交相思密度试验。对经过5年的观测资料进行分析表明:杂交相思不同造林密度对胸径、材积的生长有一定的影响,随着密度增大,胸径、单株材积表现出与密度间的负相关,每公顷833株林分的平均胸径为107 cm,每公顷1 666株林分的胸径为9.6 cm;每公顷833株和1 000株林分的5年生林龄时平均单株材积较高,分别为0057 566和0.051 79 m3;5年生每公顷1 666株的林分材积为63.922 1 m3,分别比其他4种密度林分的高190%、52.0%、58.3%和103.3%。造林密度对树高生长无显著影响。     

不同造林密度对紫桦幼林生长的影响

为研究不同造林密度对紫桦幼林生长的影响。在青海门源县浩门林场老虎沟营林区,以2年生紫桦不同造林密度人工林为研究对象,采用随机区组试验设计研究不同造林密度(630,1 110,1 665,2 490株/hm~2)对2年生紫桦林木胸径、树高、冠幅、枝下高、单株立木材积等生长指标的不同影响及作用规律。结果表明:(1)紫桦林分平均胸径、冠幅及单株立木材积随造林密度的增加而减少;在630～1 110株/hm~2的造林密度下其平均胸径、冠幅和单株立木材积最大;(2)紫桦林分枝下高随造林密度的增加而增加;在造林密度为1 665株/hm~2时枝下高达到最大值;(3)紫桦的树高在不同造林密度下无显著差异。因此,初步确定门源地区紫桦合理造林密度为1 110～1 665株/hm~2。     

拟穴青蟹β-肌动蛋白基因的克隆与分析

β-肌动蛋白广泛存在于真核生物中,在维持细胞结构、细胞运动和细胞分裂等生理活动中发挥着重要作用.运用RACE技术克隆了拟穴青蟹(Scylla paramamosain)β-肌动蛋白基因,并用RT-PCR方法检测该基因在成体各组织中的表达情况.拟穴青蟹β-肌动蛋白cDNA全长1 337 bp,5′端非编码区为67 bp,3′端非编码区为139 bp,开放阅读框1 131 bp编码376个氨基酸.拟穴青蟹β-肌动蛋白与其他节肢动物β-肌动蛋白氨基酸序列的相似性高达98％～99％.系统进化树显示拟穴青蟹β-肌动蛋白基因的分子进化地位与其生物学分类地位一致.半定量RT-PCR分析结果表明,β-肌动蛋白基因在拟穴青蟹视神经节、脑神经节、胸神经节、性腺、鳃、心、胃、肌肉、肝胰腺共9个组织器官中的表达基本一致,具有良好的稳定性.     

拟穴青蟹形态性状与性腺重量的相关分析

选取16月龄池塘养殖雌性拟穴青蟹(Scylla paramamosain)67只,测量其头胸甲长(X1)、头胸甲宽(X2)、腹部宽(X3)、体重(X4)和性腺重(Y),利用相关分析和通径分析方法计算形态性状对性腺重的相关系数、通径系数和决定系数,明确影响拟穴青蟹性腺重的主要形态性状,为拟穴青蟹选育提供理论依据和技术支持.结果表明,形态性状与性腺重相关性极显著(P＜0.01),其中体重对性腺重的直接影响和决定程度最大(0.736,54.2％),腹部宽次之,头胸甲长最小.通过头胸甲长、腹部宽和体重估计性腺重的多元回归方程为:Y=14.467-1.556X1+1.626X3+0.245X4 (R2=0.499).     

拟穴青蟹PDI保守区域的克隆与序列分析

蛋白二硫键异构酶(PDI)是真核生物重要的多功能蛋白,其基因结构在虾蟹类尚未报道.从拟穴青蟹Scylla pa-ramamosain(Estampador,1949)脑组织中分离纯化总RNA,经逆转录得到cDNA第一条链,并以之为模板利用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术,扩增出一条950 bp的cDNA.将所得cDNA克隆到质粒载体pTZ57R/T,转化大肠杆菌DH5α细胞并对筛选的阳性克隆测序.通过与目前数据库中序列的比较,在此cDNA编码蛋白中发现其中101个氨基酸与其他物种已知蛋白二硫键异构酶(PDI)中的PDI_a_PDI_a'_C保守区域相似率在64%～79%之间.确定此cDNA编码拟穴青蟹PDI_a_PDI_a'_C保守区域.