反硝化细菌Y39-6的基因组及生理生化特征研究

菌株Y39-6是从哈尔滨周边地区地下水中分离的一株假单胞菌，具有异养反硝化和自养脱氮能力，由于假单胞菌属内的菌种鉴定存在复杂性，对菌株Y39-6的具体分类仍有争议。通过获得菌株Y39-6的全基因组序列，进行比较基因组学分析，分析了菌株的碳源利用和脂肪酸含量特征，对菌株的生理生化特征进行了系统研究。发现菌株Y39-6与模式菌Pseudomonas veronii CIP 104663T的基因组相似性更高，G+C的含量接近，共有基因数量最多，为368个，碳源利用特征相似，可以确定菌株Y39-6属于Pseudomonas veronii菌种。菌株Y39-6有15个特有基因，主要脂肪酸为C16∶0和C17∶0 cyclo,含量分别为22.05%和21.25%,与Pseudomonas veronii菌种的其他菌株相比，存在明显的特异性。通过以上研究，确定了菌株Y39-6的分类地位和生物学特征，为菌株Y39-6的进一步应用提供了生物学参考依据。     

假单胞菌Y5-11的分离筛选及比较基因组学研究

菌株Y5-11是从哈尔滨周边地区地下水中分离的一株假单胞菌,具有较高的自养脱氮能力。菌株Y5-11的16S rRNA基因序列与模式菌Pseudomonas koreensis Ps 9-14^T高度同源(99.72%)。获得了菌株Y5-11的全基因组序列,采用比较基因组学分析了菌株Y5-11的碳源利用和脂肪酸含量特征,对菌株的生理生化特征进行了系统研究,发现菌株Y5-11与模式菌Pseudomonas koreensis Ps 9-14^T在碳源利用上较为接近,但两株菌株在生长温度和硝酸盐还原方面存在差异。菌株Y5-11有17个特有基因,其在脂肪酸种类及含量上与其他菌株相比,存在明显的特异性,主要脂肪酸为C16:0和C17:0 cyclo,含量分别为19.37%和21.09%。通过以上研究,确定了菌株Y5-11的分类地位和生物学特征,为菌株Y5-11的进一步应用提供了生物学参考依据。     

两株水胺硫磷降解菌的分离与鉴定

从污泥中分离出两株降解水胺硫磷的细菌,编号为HDNJ-1和HDNJ-3;两者在琼脂平板培养时对40%水胺硫磷乳油的最大耐受浓度分别为14%和12%;液体培养96 h后两株菌对水胺硫磷的降解率分别为67%和74%;根据两株菌的培养特征和生理生化特征初步鉴定为沙雷铁氏菌属(Serratia)和假单胞菌属(Pseudomonas)细菌.     

在未知假单胞菌(Pseudomonas Incognita)中青霉素酶质粒所編碼的汞盐抗性

分离到一株抗氯化汞和甲基汞细菌,鉴定为未知假单胞菌(Pseudomonas Inco gnita)。经抗性消除、转移及Pe~r、Pe~s菌株对氯化汞抗性实验,并用琼脂糖凝胶电泳验证,说明该菌株的青霉素抗性基因和汞盐抗性基因左同一质粒上。抗汞性状是由青霉素酶质粒所编码。     

一株产纳米Ag/AgCl的厌氧菌菌株的分离与鉴定

利用硝酸银浓度梯度法从大庆油田石油污水中分离出一株能在含AgNO_3的液体培养基上生长的厌氧菌菌株wxz 01,并对其形态学、生理生化特征及16S r DNA进行了分析。发现wxz 01属于Garciella sp.,与梭菌科中的Garciella sp.EMZY-1同源性为99%。分别采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis)、X-射线衍射(XRD)和透射电子显微镜(TEM)的方法对该菌合成的Ag/AgCl纳米颗粒进行了表征,结果表明,可以利用该菌制备Ag/AgCl纳米颗粒。     

石油降解菌株的分离筛选及降解性能研究

从大庆油田石油污染土壤中分离出8株能够以原油为唯一碳源和能源的石油降解菌株,经鉴定分属假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、微球菌属(Micrococcus sp.)、产碱菌属(Alcaligenes sp.)、动性球菌属(Planococcus sp.)和纤维单胞菌属(Cellulononas sp.)5个属。同时对其中石油降解能力较好的两株菌进一步研究了其石油降解特性,发现原油浓度、pH值、N∶P等对菌株的降解能力有较强的影响。     

产脂肪酶菌株的分离、鉴定及其产酶条件优化

从长沙岳麓山和湘江等地富含油脂的样品中分离得到一株产脂肪酶菌株CS 1-1,经18S rDNA序列分析,确定该菌株为黑曲霉(Aspergillus,niger).对该菌株的产酶条件进行优化,发现该菌株在以体积分数为1%的橄榄油为诱导物,5 g/L蔗糖为碳源,40 g/L蛋白胨为有机氮源,1 g/L(NH4)2SO4为无机氮源,pH为6.5的培养基中,于28℃,180 r/min摇床培养48 h,可达最大酶产量(37.6±0.8)mmol·min-1·L-1.     

PCR-DGGE解析好氧-沉淀-厌氧工艺微生物群落多样性

为研究好氧-沉淀-厌氧(OSA)污泥减量工艺微生物群落结构和多样性,以及运行条件对微生物群落的影响,使用16S rDNA的PCR-DG-DGGE图谱分析方法结合条带割胶回收DNA序列比对,对OSA工艺微生物群落特征进行分析。DG-DGGE图谱聚类分析和多样性指数分析表明,OSA工艺微生物群落多样性比传统活性污泥工艺更加丰富。增加Ns和提高废水水质的复杂性,都能使Shannon指数略有提高,微生物多样性增加,但优势微生物种群基本不受影响。DG-DGGE图谱中优势条带序列分析表明,OSA工艺中的回收到的11个优势菌与α-proteobacte-ria,β-proteobacteria,CFB-group bacteria种属的微生物有很近的亲缘关系,β-proteobacteria约占63.6%。其中6个优势菌与强化生物除磷系统、反硝化系统中出现的微生物同源性非常高,证实了在OSA系统中存在的慢速生长微生物-反硝化菌和聚磷菌。     

一株饮用水净化细菌的分离鉴定及安全性评价

从松花江哈尔滨段饮用水水源地中分离获得一株饮用水净化细菌ZXY30,对水样处理24h后,UV254、TOC、CODMn三种指标的去除率分别达到19.16%、25.38%和20.69%。经过菌株形态特征、生理生化以及16SrRNA序列同源性分析,鉴定该菌株为恶臭假单孢菌(Pesudomonas putida)。小鼠急性毒性实验证明,该菌株不具有相关毒性,为丰富生物强化方法净化饮用水技术提供菌种储备。     

A_2N移动床生物膜反应器反硝化除磷特性研究

为了研究反硝化除磷过程中的脱氮除磷特性,采用厌氧/缺氧和硝化序批式MBBR系统(A2N-SBMBBR系统),在COD/TN平均值为2.98,单个运行周期为12 h的实验条件下,分析了单个代表性周期内反硝化除磷过程中三氮、TP和有机物的降解规律,并研究了A2N-SBMBBR系统单个代表性周期中DO、ORP和p H沿程变化规律。结果表明,在A2N-SBMBBR系统中实现了反硝化除磷现象,脱氮、除磷效率分别达到77.86%和76.14%;COD主要在厌氧和硝化阶段去除,TN主要在硝化和缺氧阶段去除,在硝化序批式MBBR中出现了同步硝化反硝化现象,在系统运行的缺氧阶段中,有一部分反硝化聚磷菌可以利用亚硝酸盐作为电子受体进行反硝化吸磷反应;厌氧、缺氧阶段DO控制在0.2 mg·L-1以下较为合适。     

2011年某三甲医院真菌和细菌耐药性分析

调查了2011年临床常见真菌、细菌、分离菌的耐药性．用VITEK32进行细菌鉴定和药敏实验,用纸片扩散法做药敏补充实验．临床共分离7961株菌,其中革兰氏阴性菌为50．76％,真菌为28．16％,革兰氏阳性菌为21．08％．分离的前6位菌依次为白色念珠菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌．酮康唑对真菌敏感率较高．金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林菌株率分别为76．1％、65．9％,未检测出耐万古霉素和利奈唑胺株．大肠埃希菌和克雷伯菌产ESBLs株分别为54．4％、37．2％,亚胺培南和美罗培南敏感率为100％．铜绿假单胞菌和不动杆菌属细菌表现多重耐药,铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率为30％以上,不动杆菌属细菌对其的耐药率达75％以上,铜绿假单胞菌和不动杆菌属细菌对头孢哌酮／舒巴坦敏感率分别为73．2％和87．2％．结果表明,真菌感染增加,三代头孢耐药率增高,非发酵菌呈多重耐药并存在泛耐药株,应加强菌株耐药性监测,及时指导临床合理用药,以减少耐药菌株的传播．     

苏云金芽胞杆菌cry7Ab9基因的克隆与杀虫活性的测定

以辽宁省千山市的22株苏云金芽胞杆菌进行PCR cry型的cry7类基因鉴定,对cry7类基因进行克隆表达及生物活性测定,为cry基因储备奠定基础.菌株QZG121经比对后发现含有cry7Ab基因.克隆该基因全长序列为3 417 bp,编码1 138个氨基酸残基,相对分子质量为130 000,并在Gene Bank中登记,基因登录号为GU936713,由苏云金芽胞杆菌国际命名委员会正式命名为cry7Ab9.通过构建原核表达系统获得cry7Ab9基因表达蛋白,并进行暗黑鳃金龟幼虫杀虫活性的测定,7天校正死亡率10 mg.L-1为11.11%、100 mg.L-1为25.93%;两周校正死亡率10 mg.L-1为33.33%、100 mg.L-1为48.15%,LC50为289.99 mg.L-1.     

沤麻用果胶酶产生菌的选育及脱胶过程中细菌种群的初步分析

由沤麻液中分离并选育得到两株果胶酶产生菌,分别命名为HDYM-01和HDYM-02。采用形态观察、生理生化特征及16SrDNA等方法进行鉴定,确定HDYM-01为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormacchei),HDYM-02为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。通过对沤麻过程中的微生物多样性的研究,确定了在沤麻过程中兼性厌氧菌起主要作用,在沤麻过程中可培养的兼性厌氧菌数最多,可达7.3×107cfu·mL-1。而对沤麻过程中优势菌群的分析可知,假单胞菌属是优势菌属。     

竹鼠志贺氏菌的分离及致病性研究

对云南某竹鼠养殖场发病死亡竹鼠进行肠道致病菌分离培养,经培养基分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定、16S r DNA扩增以及测序分析,结果表明该致病菌为志贺氏菌。将纯化的菌株进行小鼠致病性研究和药敏试验分析,结果显示该菌对小鼠具有很强的致病作用,经病理切片观察发现该菌会引发多种器官及肠道充血或出血,该菌对喹诺酮类药物和头孢类药物高度敏感。     

生物破乳剂产生菌的筛选及破乳效能研究

建立一套高效的生物破乳剂产生菌筛选方法是解决破乳剂产生菌筛选困难的主要途径,利用这种方法从大庆油田采油废水中分离、筛选得到1株对水包油型(O/W)和油包水型(W/O)两种乳状液均具有破乳效能的高效生物破乳剂产生菌,该菌对这两种乳状液在20 h的破乳率均可达90%以上。生理生化鉴定及基于16S rDNA基因序列的系统发育分析表明,该菌属于芽孢杆菌属(Bacillus),菌株编号LH1。实验发现,LH1菌的有效破乳成分为胞外代谢物质,低温、高温及超声破碎处理均对其破乳活性无明显影响,说明破乳菌LH1具有良好的应用价值。     

嗜热硫氧化硫化杆菌一新菌株的分离与鉴定

从云南腾冲酸性热泉富集物中分离到一株适度嗜热喜酸菌YN22.该菌革兰氏染色阳性,直杆状或微弯,长约1.6~2.8μm,直径0.4~0.7μm.该菌能在25~60℃下生长,最适生长温度为53℃;生长pH为1.0~5.0,最适pH为1.5;化能自养型,0.025%(w/V)的酵母提取物对其生长有明显的促进作用,在酵母提取物存在的情况下能快速氧化Fe2 ,但对S0和还原型硫化物的氧化能力较低.16s rDNA系统发育分析表明,该菌与嗜热硫氧化硫化杆菌(Sulfobacillus thermosulfidooxidans)的16s rDNA序列相似性达99%.YN22基因组DNA的G C含量为47.3 mol%,与嗜热硫氧化硫化杆菌模式菌株VKM B-1 269非常接近,后者基因组DNA的G C含量为47.5 mol%.基于形态特征、生理生化特性、系统发育学和G C含量的分析结果,YN22应归于硫化杆菌属(Sulfobacillus),为嗜热硫氧化硫化杆菌(Sb.thermosulfidooxidans)的一新菌株.这是国内首次分离,并经多种方法鉴定、确认的嗜热硫氧化硫化杆菌,从而为我国浸矿微生物的基础和应用研究提供了最典型的适度嗜热菌种.     

生物表面活性剂产生菌的筛选及鉴定

从大庆油田采集的原油样品中筛选出一株产表面活性剂的菌株HD-322-2,根据形态特征、生理生化性质和16S rDNA序列分析对菌株进行鉴定,并运用红外光谱法和排油圈法对产物进行分析。菌株HD-322-2的16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌的相似性达到98%,生理生化性质分析的结果亦与枯草芽孢杆菌相同,认定该菌株属于枯草芽孢杆菌。红外光谱分析结果表明:菌株HD-322-2产生的生物表面活性剂的主要成分为脂肽。该菌株具有较强的排油和降黏能力。     

甲胺磷农药降解菌的筛选及其降解效能研究

从长期施用有机磷农药的土壤取样,通过驯化、富集培养,筛选到2株能降解甲胺磷农药的菌株HK-1和GLY-1.利用分光光度法分析了菌株在含1.5 g/L MAP的无机盐培养液中培养72h下的降解率,菌株HK-1和GLY-1的甲胺磷降解率分别为85.71%和80.25%.2株菌的遗传稳定性较好,对甲胺磷农药的耐受浓度为3 g/L,且可降解有机磷乐果和久效磷.菌株生长的最适甲胺磷浓度、温度、pH和接种量分别为1.5 g/L、25-30℃、7.0和4%-6%.两株菌对常用抗生素表现出不同程度的敏感性,金属离子对菌株降解甲胺磷农药有不同程度的促进或抑制作用.通过Biolog鉴定系统,将HK-1和GLY-1初步鉴定为铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa sp.）和特瑞特西苍白杆菌（Ochrobactrum tritici sp.）。     

一株产淀粉酶中度嗜盐菌Nesterenkonia sp.DQ-1的分离鉴定

利用平板筛选法从大庆盐碱地土壤中筛选到一株产淀粉酶并能在广泛NaCl浓度范围(0～25%)和广泛pH值范围(pH值为6～10)生长的耐盐碱菌DQ-1,对其进行形态学、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析,DQ-1呈球形,大小约为0.5～0.8μm,最适培养条件为:NaCl 3%,30℃,pH=7.5;同源性比对结果表明,该菌株与多种涅斯捷连科氏菌的16SrDNA序列同源性高达99%。结合生理生化指标,初步确定DQ-1菌株可能是耐盐涅斯捷连科氏菌属的一个亚种。DQ-1产生的淀粉酶最佳反应条件为NaCl 2%、pH值在7～7.5、温度40℃,酶在0～12%的NaCl中具有活性,在pH值为5～12不失活,说明DQ-1产生的淀粉酶是一种能广泛耐盐碱的极端酶。     

大熊猫粪便微生物多样性分析及纤维素降解产氢菌的筛选鉴定

利用宏基因组测序技术对大熊猫粪便微生物进行了多样性分析,发现大熊猫粪便样品中含有大量可以降解纤维素的厌氧微生物种类,如梭菌科、瘤胃菌科和毛螺菌科等,因此,将熊猫粪便样品作为降解纤维素微生物菌种分离的来源具有可行性。采用刚果红染色法从大熊猫粪便样品中筛选具有降解纤维素产氢能力的菌株,分离获得1株纤维素降解产氢菌株Cel10,根据菌株的形态和生理生化特征并结合分子生物学,鉴定菌株Cel10属于缓纤维梭菌(Clostridium lentocellum),其16S rDNA序列的同源性为98%。菌株Cel10在pH 4.0～8.0、温度25～50℃范围内可以利用纤维素进行生长,其最适pH 7.0,最适生长温度37℃。本文丰富了大熊猫肠道纤维素降解菌的种类,为木质纤维素类农产品加工废弃物的开发和综合利用提供了良好的菌种资源和科学依据。