果实成熟与多聚半乳糖醛酶基因的研究进展

对与果实成熟相关基因多聚半乳糖醛酸酶（PG）基因的筛选、鉴定、表达及基因工程的研究进展作一个简要评述。     

甜瓜多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA的克隆和序列分析

以甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实mRNA为模板，经反转录合成和PCR扩增得到编码多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase，PG)基因全长cDNA，将其克隆于pUC19质粒中获得重组质粒pCMPG．此cDNA长1183bp，包括一个393个氨基酸残基组成的开放阅读框架，与已报道的甜瓜PG基因cDNA核苷酸序列比较同源性为99．3％，相应的氨基酸的同源性为98．5％．     

草莓多聚半乳糖醛酸酶基因RNAi植物表达载体的构建及表达鉴定

从草莓叶片中克隆到多聚半乳糖醛酸酶基因的1个281bp片断,构建含该正、反向互补重复序列DNA片段的中间载体,经测序证实连接正确后,克隆到植物表达载体p2300121中的GUS基因位置并经双酶切证实,得到RNAi表达载体。采用直接转化法将PG2300121导入根癌农杆菌菌株EHA105,并用新构建的工程菌对普通烟草进行了遗传转化研究。在Kanamycin选择压力下获得的烟草转化不定芽和完整植株,经PCR方法鉴定,证实了该基因已导入烟草基因组中。     

还原糖法测定多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白活性的研究

研究了一种测定ｅｎｄｏ－ＰＧ和ＰＧＩＰ活力的方法－３，５－二硝基水杨酸试剂定糖法，并发现硫酸铵、ＥＤＴＡ对３，５－二硝基水杨酸试剂显色反应有抑制作用，ＮａＣｌ对ｅｎｄｏ－ＰＧ有抑制作用，同时还研究了某些因素对还原糖法测定ＰＧＩＰ活力的影响。     

高压脉冲电场对多聚半乳糖醛酸酶活性及构象影响

本实验旨在研究高压脉冲电场(PEF)对多聚半乳糖醛酸酶(PC)活性及构象的影响.PG的活性随电场强度和脉冲个数的增加而降低.荧光光谱分析表明:PEF处理后PC蛋白的荧光发生不同程度的荧光淬灭,在高电场条件下将发生荧光峰的位移.另外,PG酶活性下降和荧光淬灭趋势一致,但呈非线性关系,说明酶构象改变与酶活性变化间存在密切的关系.     

超高压对果胶聚半乳糖醛酸酶的影响

研究测定了超高压 (4 0 0MPa以下 )对果胶半乳糖醛酸酶PG的影响 .从pH值、温度、加压时间、酶活力再生情况等几方面对PG酶的影响作了探讨 ,随压力升高 ,加压时间延长 ,酶活力下降 .经 4 0 0MPa,30min处理 ,下降约三分之一 ;经超高压处理后酶活力不会再生 .为高压处理果酱的生产提供理论依据     

果胶酶中两种类型聚半乳糖醛酸酶的性质

比较了果胶酶中两种类型的聚半乳糖醛酸酶的性质。结果表明，它们活性的最适条件、酶的稳定性、某些金属离子对活性的影响、动力学数据、分子量及氨基酸组成等均有明显差异，但它们的活性相似，且都是酸性蛋白质。     

聚半乳糖醛酸酶的发酵条件优化及对造纸白水DCS的控制

研究了黑曲霉液体发酵产聚半乳糖醛酸酶的培养基优化.研究表明,最佳发酵培养基为(g/L):麸皮40,鲜苹果渣20,(NH4)2SO4 20,NaCl l,MgSO4·7H2O6,KH2PO4 1.最佳初始pH3.5,接种量3%,装液量50 mL,发酵时间3d.经过培养基优化,酶活可达到1 505.8 U.用其处理BCTMP(化学热磨机械浆)的DCS(溶解物质和胶体物质)水,处理30min后,DCS水的CD(阳电荷需求量)降低27%.     

产碱性聚半乳糖醛酸酶嗜碱细菌抗利福平高产菌株的选育

分离得到产碱性果胶酶嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３，其聚半乳糖醛酸酶的产生强烈地受葡萄糖的代谢阻遏，对利福平敏感。通过抗得福平自然突变法，从出发菌株ＮＴＴ３３中筛选抗利福平突变株。     

河套蜜瓜成熟软化中PG、果胶质和细胞壁超微结构的变化

随着河套蜜瓜的成熟软化，原果胶含量降低，可溶性果胶含量增高；与之相应的ＰＧ（多聚半乳糖醛酸酶）比活力显著增加，而ＣＸ（纤维素酶）比活力则变化不大．乙烯利处理果实后，ＰＧ活力相应升高与果实软化呈明显的负相关．不同时期果实细胞壁超微结构观察表明，果胶层逐渐降解，胞壁纤维松驰，细胞器完整．     

RT-RAPD技术分析高温诱导双孢蘑菇相关基因片段

应用RT－RAPD技术，以6bp随机引物反转录双孢蘑菇（Agaricus bisporus)02菌株常温培养和高温诱导菌丝体的总RNA，10bp随机引物PCR扩增，得到几个高温诱导差异片段，对OPU13引物的差异片段02U13克隆并测序，发现该片段可能编码tRNA^Val (密码子GUC）基因。推测GUC可能是稀有密码子，在某些耐温基因中出现频率较高。识别该稀有密码子的tRNA^Val在常温条件下不表达或表达量很少，而在高温诱导下引发一定的调控机制促使它们大量的合成，进一步引发相关的耐温基因表达。     

砷代谢相关的全长新cDNA的克隆和功能初步研究

从人胎脑中获得mRNA建立cDNA文库,通过大规模测序克隆出一人类新基因cDNA,全长2255bp,开放阅读框（ORF）1532bp,用4umol/砷刺激L－02细胞2周,与未用砷刺激的L－02细胞作表达谱基因芯片杂交,发现该基因在胂刺激L－02细胞中表达量上调3倍,用不同浓度砷染毒L－02细胞2周,与未用砷染毒辣的L－02细胞抽RNA转膜作Northern杂交,结果显示文艺基因在未染毒L－02名几乎不表达;而在砷染毒细胞中该基因的表达量明显增加,且有随剂量增加表达量亦增加的趋势;同时Northern结果显示在2,3kb处有单一条带,用不同浓度砷染毒L－02细胞2周,作细胞原位杂交,结果显示该基因在未染毒细胞中几乎不表达,在各染毒组细胞中均有表达,据此,认为这可能是一条新的全长砷代谢相关基因,经HUGO／GDB人类基因命名委员会的同意,命名为ARGI（arsenite related gene 1)。     

以mRNA差异显示法分离牙鲆白化相关基因的初步研究

以正常和白化牙鲆表皮组织总RNA为模板,用Oligo d(T)13M(M分别为A、C、G)3种锚定引物和26种差异显示随机引物组合进行差异显示,PAGE凝胶电泳后,用新型高灵敏度核酸荧光染料SYBR GREEN I显示差异DNA条带,得到区分度较好的差异表达图谱,共分离49条牙鲆白化相关DNA片段,片段长度260～800bp左右,经克隆测序后将可作为新的ESTs进行同源序列比较.     

人类抗砷相关基因hARRG全长cDNA的克隆和在E.coli中表达

通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序,发现一条人类新基因,序列与仓鼠asr2序列高度同源,达88％,命名为人类抗砷相关基因（human arsenic resistance related gene.hARRG),hARRG与抗砷基因相关序列ARS2（AF082871）几乎完全全同源,仅比它短253bp,hARRG并不是全长基因而仅是一个cDNA片段,为了获得hARRG全长cDNA,运用Northern blot电子RACE和5－SMART－RACE的方法克隆了一条2999bp 的hARRG全长cDNA,通过Unigene染色体定位于7q21.3,经过生物信息学分析发现,该cDNA有完整的读码框,编码一个788个氨基酸的蛋白,预计分子质量为89．2ku,并在大肠杆菌中获得了成功表达。     

基因治疗临床应用的研究进展

基因治疗作为一种新型的疾病治疗手段,正在广泛用于多种疾病的治疗领域.简单介绍了基因治疗的基本途径和临床应用.     

肝癌基因治疗机制研究

肝癌是由多基因突变引起的,故用基因工程的手段进行肝癌的基因治疗是目前医学界研究的热点.主要研究了肝癌基因治疗中的免疫基因治疗、抑癌基因治疗、自杀基因治疗、反义基因治疗、耐药基因治疗、联合基因治疗的机制.