金属亲和层析法分离纯化醇脱氢酶

报道了用金属亲和层析法分离纯化酵母细胞中醇脱氢酶(ADH).以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,乙二胺为螯合配基,制备了金属螯合亲和吸附剂.通过溶胀法从酵母细胞中抽提胞内酶,粗抽提液再经过硫酸铵盐析以及亲和柱层析.收得率为16.9%,纯化倍数达11.5.     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。     

单克隆抗本亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗本的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ纯化得到ＩｇＧ纯品，分子量为１５０ＫＤ，与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明:从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法...     

兰色葡聚糖琼脂糖亲和层析法纯化T_4 RNA连接酶

T_4RNA连接酶首先由Silber等人在T_4噬菌体感染的E.Coli中发现和初步提纯的。当ATP存在时,它能够催化一定链长的单链寡聚核苷酸5′一端磷酸单酯与3′一端羟基之间形成分子内或分子间的3′,5′磷酸二酯键。RNA连接酶能催化3′,5′二磷酸核苷与寡核苷酸受体相连接。此反应可用于一定序列寡核苷酸的合成,和核苷酸3′一端的同位     

亲和层析法制备人血浆白蛋白

低温乙醇法FIV沉淀中含有白蛋白96．00±13．52g／kg．15倍生理盐水磷酸缓冲液可溶解其中的87．44％(约83．94±11．119／kg)．通过DEAE Affi-Gel Blue 亲和层析及DEAESepharose FF 离子交换层析两步分离的纯化工艺，可从FIV溶解液中回收白蛋白48．18±1.118／kg FIV，回收率为57．40±1.94％．白蛋白溶液呈淡黄色，澄清透明，纯度为98．28±1．68％，单体含量97．00±2．19％，吸收度为0．028±0．006．白蛋白试制品能耐受57℃50h热稳定性试验．各检测指标显示，通过亲和层析综合阴离子交换层析回收纯化的白蛋白制品各主要生化指标符合质检要求．     

亲和层析法分离牛脾二肽酶

牛脾二肽酶(Dipeptidyl Aminopeptidase Ⅰ,简称DAP-Ⅰ)是一种蛋白酶,它能从多肽链的自由N-末端连续切下二肽,直到遇到精氨酸、赖氨酸或脯氨酸为止,故可用于多肽的结构测定。但是,至今DAP-Ⅰ制剂仍是不均一的并且不能长期保存。 本文报导了用亲和层析法从DAP-Ⅰ中除去其它两个二肽酶——组织羧肽酶C(Cathe-ptic Carboxypeptidase C)和丝氨酰蛋氨酸二肽酶(Ser-Met Dipeptidase)等杂蛋白,并报导了将DAP-Ⅰ制成汞盐,在低温下长期保存的方法。     

利用氨基苄脒为配基的亲和层析法纯化t—PA

利用氨基苄脒修饰的硅胶为亲和吸附剂纯化组织纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ），讨论了亲和柱体积对纯化效率的影响。由于氨基苄脒对ｔ－ＰＡ的高度特异性，根据ｔ－ＰＡ的上柱量适当调整柱体积，可使纯化倍数达到１４０以上，远高于利用其它亲和吸附剂的结果。     

柱层析法纯化烯丙基硅烷

以四烯丙基硅烷(G0)为核心制备了第一代(G1)和第二代烯丙基硅烷(G2).产物以正己烷-乙酸乙酯V(正己烷)∶V(乙酸乙酯)=20∶1为流动相,采用一次硅胶柱层析法,用薄层层析(TLC)检测,成功脱除杂质,目标产物收率为67.6%(G1)和64.8%(G2).经核磁共振、热质量分析等表征提纯产物,表明目标产物结构完整.     

层析法分离纯化大豆卵磷脂

本文以大豆油脚为原料,用有机试剂提取制得粗品,后经柱层法分离纯化,获得大豆卵磷脂,经化学和红外等分析,证实其结构。     

Heparin-Argarose亲和层析法分离人甲状腺肿瘤组织中的bFGFs

本文介绍了甲状腺肿瘤组织中碱性纤维母细胞生长因子(basis Fibroblast Growth Factors.bFGFs)的提取过程和分子量鉴定。研究表明:bFGFs对肝素具有强的亲和力,组织匀浆通过Heparin-Argarose亲和层析柱后,用2.0mol/L的NaCl即可洗脱下来,收集其亲和峰值的洗脱组分,经三氯醋酸沉淀后即可得到bFGFs,经Western-blot方法分析其分子量有三种,分别为14KD、17KD、18KD。     

溶菌酶的精制——甲壳素亲和层析法和二乙氨乙基纤维素层析法

本文介绍了甲壳素亲和层析法和DEAE-纤维素层析法两种纯化步骤。通过控制pH,使溶菌酶于pH8～8.5在甲壳素上专一性吸附;于pH2.5的0.6%醋酸条件下,使酶解吸。吸附容量可达34～40mg 酶/克甲壳素。溶菌酶在pH8.5左右,可以自由地通过DEAE-纤维素柱,吸附去除其他杂蛋白。纯化后,进行了聚丙烯酰胺电泳鉴定。     

免疫亲和层析法从兔杂交瘤培养上清液中纯化兔抗烟草花叶病毒的单克隆抗体

报道一种较为简易的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中分离纯化单克隆抗体。先用过碘酸钠活化层析柱填料Sepharose4B,然后加入碱性碳酸钠缓冲液与羊抗兔IgG于4℃偶联过夜,冲洗后加硼氢化钠使偶联稳定,经1％BSA-PBS溶液封闭,冲洗后即得到免疫亲和层析柱。将兔抗烟草花叶病毒（TMV）杂交瘤细胞2E2和3C6的培养上清加入亲和柱中,37℃下吸附1h,冲洗后用pH3稀盐酸溶液洗脱,洗脱液用Tris溶液调至pH中性,供SDS-PAGE分析和Westernblot实验。洗脱液中存在分子量约为60000与52000的二条蛋白条带。Westernblot结果显示,纯化抗体对纯化TMV样品,以及TMV侵染的烟草病叶中的TMV都具有非常好的识别能力。利用所报道的免疫亲和层析技术,从兔杂交瘤培养上清中成功分离纯化到兔抗TMV的单克隆抗体。     

用柱层析法分离纯化蛋黄卵磷脂

对25％的蛋黄卵磷脂法应用柱层析法进行纯化分离，以硅胶为固定相，氯仿、甲醉作为梯度洗脱剂；应用硅胶G薄层层析法进行定性鉴定，薄层扫描仪定量分析，结果显示柱层析法纯化的卵磷脂经薄层层析分析呈单一斑点，经过薄层扫描仪测定纯度达97．5％，5g粗卵磷脂得到卵磷脂1．07g。     

疏水层析法分离纯化脂肪酶的研究

采用疏水层析法对商业解脂假丝酵母的中性脂肪酶粗制剂进行了分离、纯化,实验以Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ为固定相,异丙醇－哌嗪为流动相,经一次柱层析,从该粗酶中分离出的单一脂肪酶的比活可提高１０倍以上。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测定其分子量约为２０．８ｋＤ;管状等电聚焦法测其等电点约为４．５０。     

亲和层析法去除新生小牛血清内毒素的初步研究

以琼脂糖凝胶Sepharose 4 FF为介质,分别经CNBr和NHS活化后偶联多粘菌素B(Polymyxin B,PMB)为配基,制备两种不同间隔臂的亲和层析柱;选择偶联配基载量较高的亲和柱Sepharose 4 FF-CN-PMB,分析亲和层析温度、流速、pH值及盐离子浓度等参数对亲和层析效果的影响,优化小牛血清亲和层析去除内毒素工艺;通过细胞增殖实验研究内毒素去除工艺对小牛血清促细胞生长活性的影响。结果表明:制备了具有高PMB配基载量的亲和层析柱,利用该亲和层析柱建立了去除新生小牛血清内毒素的最优工艺;经该工艺处理后,小牛血清中内毒素含量大大降低,同时并未对其细胞增殖活性产生显著影响。本研究将为进一步降低小牛血清成本,提高小牛血清质量,推动生物制品开发奠定基础。     

胶体金免疫层析法在结核病快速诊断中的应用

目的:探讨用胶体金免疫层析法检测血清及胸水中结核抗体,评估其在结核病快速诊断试验的相关指标。方法:应用免疫层析技术来检测血清及胸水中的结核抗体。检测临床诊断肺结核患者112例(其中分菌阳组、菌阴组)和96例无结核病史的健康体检者的血清结核抗体水平;52例结核性胸膜患者胸水中的结核抗体水平,同时对胸水进行抗酸染色镜检。计算诊断试验的相关指标。结果:该检测方法临床诊断肺结核的敏感性为60.7%,特异性为95.83%,准确性为79.2%,诊断指数为156.53%,阳性预期值为94.44%,阴性预期值为67.6%;胸水中结核抗体阳性22例,敏感性为42%,胸水结核抗体阳性率和胸水抗酸染色阳性率结果有显著性差异p(0.05。结论:血清结核抗体检测具有较高的敏感性和特异性,可用于临床肺结核的辅助诊断,对评价肺结核的疗效有较高的实用价值。胸水中结核抗体检测对结核性胸膜炎的诊断也具有重要的临床参考价值。     

葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

用绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）高产变异菌株４１３１产生的纤维素酶粗酶分别过ｓｅｐｈａｄｅｘＧ２５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ５０、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１００和ｓｅｐｈａｄｅｘＧ１５０柱层析．结果表明：ｓｅｐｈａｄｅｘＧ７５对纤维素酶的分离效果最佳,并获得了一个ＣＭＣ酶组份,其比活力提高到原来的４９倍,回收率为４１６％．     

DEAE离子交换层析法分离和纯化乳酸脱氨酶同工酶

采用DEAE-52离子交换层析法,从经硫酸铵沉淀的猪心肌乳酸脱氢酶(LDH)中分离出LDH-1和LDH-2,比活力分别为461μ/mg和405μ/mg,纯度分别为95.5％和89.1％;从经5′-AMP-QT_4亲和层析纯化的兔骨骼肌LDH中分离出LDH-5,比活力为506μ/mg,纯度为95.1％。     

两种亲和色谱在中草药活性成分分离和纯化中的应用

亲和色谱多用于生物大分子的分离与纯化。随着技术的发展,出现了多种新型的亲和色谱,其应用范围也不断拓展。本文简要介绍了分子烙印亲和色谱和免疫亲和色谱的基本原理,以及它们在中草药活性成分分离和纯化中的应用概况。