利多卡因对人角膜上皮细胞的毒性作用及其机理研究

利用不同浓度利多卡因（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）处理体外培养的人角膜上皮（ＨＣＥＰ）细胞系细胞,利用光镜观察、ＭＴＴ、荧光染色、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、流式细胞仪和透射电镜方法研究了利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞的毒性作用及其机理。光镜观察和 ＭＴＴ检测结果显示,质量浓度 １２５～１０００ｇ／Ｌ的利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的毒性作用,并具有浓度和时间依赖性;ＡＯ／ＥＢ荧光双染色结果显示,质量浓度 ０６２５～１００００ｇ／Ｌ的利多卡因可引起 ＨＣＥＰ细胞的质膜通透性显著提高,细胞凋亡率也具有浓度和时间依赖性;ＤＮＡ电泳和 ＴＵＮＥＬ检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞发生 ＤＮＡ断片化;ＴＥＭ观察结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞的超微结构出现了凋亡细胞的形态结构特征,如胞质空泡化、染色质浓缩、线粒体膨胀且嵴的结构紊乱、出现凋亡小体等;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色的流式细胞仪检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞质膜中的磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）发生外翻变化;ＥＬＩＳＡ检测结果显示,利多卡因还能引起 ＨＣＥＰ细胞中胱冬肽酶3、8、9、10表达量的增加,表明利多卡因确能引起 ＨＣＥＰ细胞发生细胞凋亡,而不是细胞坏死。由此可见,利多卡因在质量浓度大于 0.625ｇ／Ｌ时对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的细胞毒性,并具有浓度和时间依赖性,且其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中具有很大的毒副作用,应谨慎使用。     

贝特舒对人角膜上皮细胞凋亡诱导作用的实验研究

为了揭示常用青光眼药物贝特舒(betaxolol)对人角膜上皮(HCEP)细胞的毒性及其作用机理,使用不同质量浓度贝特舒对体外培养HCEP细胞进行了处理,并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法检测了质膜的通透性,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化,用透射电镜检测细胞的超微结构。发现在0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内,贝特舒对HCEP细胞具有显著的毒性,并随着质量浓度的提高和处理时间的延长而逐渐增大,处理24h即可使大部分细胞皱缩死亡;进一步的研究结果发现,质量浓度为0.17500~2.80000g/L的贝特舒能显著提高HCEP细胞的质膜通透性,并使其出现DNA断片化、染色质凝缩和形成凋亡小体等凋亡细胞的结构变化。可见,在贝特舒0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内对HCEP细胞具有显著的毒性,并具有质量浓度和时间依赖性,其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中毒副作用极大。     

氯化镉对条斑星鲽卵巢细胞的毒性作用及其机理研究

使用不同浓度的氯化镉（CdCl2）处理体外培养的条斑星鲽卵巢（BFO）细胞系细胞,利用毒理学和细胞生物学方法研究了重金属镉对BFO细胞的细胞毒性及其作用机理。毒性作用研究结果显示,BFO细胞对CdCl2敏感,浓度大于10ixmol／L的CdCl2对细胞的生长具有显著的抑制作用,能引起细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GST—Px）活性的持续降低和丙二醛（MDA）含量的持续升高,且具有浓度依赖性;机理研究结果显示．浓度大于40μmol／L的CdCl2可引起BFO细胞出现典型的凋亡细胞形态,BFO细胞在AO／EB荧光双染色中的质膜通透性显著提高,在单细胞凝胶电泳中出现明显的彗尾,且细胞凋亡率、彗尾的长度和亮度随CdCl2浓度的增加而逐渐升高,并具有浓度依赖性。可见,镉对BFO细胞具有显著的毒性作用,其毒性作用是通过诱导细胞凋亡来实现的,为利用BFO细胞系研究镉等重金属的细胞毒性及其作用机理奠定了基础。     

分子伴侣及其作用机理的研究概况

分子伴侣为一类与其他蛋白不稳定构象结合并使之稳定的蛋白质,广泛分布于各种生物体内。本文对分子伴侣的最新研究作一综述。     

冬季细颗粒物对人支气管上皮细胞的毒性效应

细颗粒物(PM_(2.5))作为冬季多发的雾霾的主要组成成分,对人呼吸系统有严重的毒害作用。实验采集太原地区冬季PM_(2.5),考察其对人支气管上皮细胞系(BEAS-2B)的毒性效应。研究发现,处理组细胞内能明显观察到颗粒物沉积,细胞器结构发生显著改变,说明PM_(2.5)中超微颗粒能够进入细胞并且会影响BEAS-2B细胞中细胞器结构。PM_(2.5)处理细胞后,细胞活性氧自由基(ROS)含量随着PM_(2.5)浓度的增高而增加,且在30μg/mL时达到最大。进一步研究发现,细胞超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GP_X)的含量随着PM_(2.5)浓度的增高而减少,并在30μg/mL浓度时,SOD的含量下降为对照组的51.02%,GP_X的含量下降为对照的54.10%。另外,细胞培养液中白介素6(IL-6)和IL-8的含量随着PM_(2.5)浓度的增高而增高,并在30μg/mL浓度时,IL-6的含量达到对照组的3.18倍,IL-8的含量达到对照的1.90倍。在PM_(2.5)暴露条件下,PM_(2.5)能够引起细胞发生氧化应激和炎性反应,并能抑制抗氧化酶的蛋白表达。     

低剂量黑碳诱发人肺上皮细胞的毒性效应及其氧化损伤

为了探讨黑碳对人肺上皮细胞(A549)的毒性及其氧化损伤效应,本研究采用MTT法测定了BC诱发A549细胞的毒性效应,并进一步检测了乳酸脱氢酶(LDH)、胞内超氧化物歧化酶(SOD)、微量丙二醛(MDA)和过氧化氢酶(CAT)的活力变化。研究结果表明,不同浓度BC处理A549细胞24 h后,随着细胞染毒浓度的增高,细胞活力显著下降;而且不同剂量BC处理组的LDH释放量均显著的高于对照组。     

细胞凋亡的分子机理

细胞凋亡是由一些基因编码和细胞主动自杀过程,又称程序性细胞死亡,它在机体的生长、分化与病理中具有积极意义。综述了核酸内切酶及凋亡相关基因在细胞凋亡中的作用,重点讨论了Caspase家族的研究进展。     

天门冬提取物对Hep细胞毒性作用研究

以Hep荷瘤小鼠为实验对象,每天给予Hep荷瘤小鼠天门冬提取物10.02、0.0g/kg体重(PO),连续给药10天后,对瘤体、胸腺和脾脏重量以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响进行检测分析。结果为:与对照组比,天门冬提取物对Hep瘤体生长抑制率为31.2%、67.1%,小鼠碳粒廓清指数分别提高了11.2%、37.2%,血清溶血素值分别提高了19.6%、36.5%,动物胸腺和脾脏的重量明显增加;组织病理学观察,给药组Hep瘤体均见坏死灶,坏死面积与给药剂量呈正相关。     

兔房水HPCE检测及其对培养角膜基质细胞的作用

目的:采用高效毛细管电泳(HPCE)的毛细管区带电泳(CZE)分离与检测兔房水中各蛋白组成,观察房水对培养角膜基质细胞的作用.方法:CZE 测定新西兰白兔房水蛋白成分:运行缓冲液硼酸钠-硼酸缓冲溶液(pH=8.7、9.1、9.4);毛细管柱温20 ℃;检测波长 200 nm;压力进样0.5 psi,进样时间10s;运行电压20 kV.第1代培养角膜基质细胞进行DMEM/F12培养,加入体积分数为10%的房水,CCK-8检测24 h后细胞增殖情况,每天倒置显微镜下观察细胞生长情况.结果:应用 pH=9.4的硼酸钠-硼酸缓冲溶液可获得分离效果较理想的兔房水毛细管电泳峰图.加入房水24 h后 CCK8检测吸光度增高(P＜0.05),角膜基质细胞生长良好.结论:HPCE可快速有效方便检测兔房水蛋白成分,体积分数为10%的兔房水可促进培养的兔角膜基质细胞生长与增殖.     

甘肃大蓟提取物对Hep细胞毒性作用研究

以Hep荷瘤小鼠为实验对象，给予不同剂量的甘肃大蓟提取物后，对瘤体、胸腺和脾脏重量以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响进行测定分析。结果为，每天给予Hep荷瘤小鼠甘肃大蓟提取物10．0、20．0g／kg体质量（口服），连续给药10天后测定，与对熙组比，Hep细胞增殖抑制率为46．4％、59．7％，动物胸腺和脾脏的重量明显增加；组织病理学观察，给药组Hep瘤体均见坏死灶。坏死面积与给药剂量呈正相关。     

纳米二氧化硅对人张氏肝细胞毒性作用研究

目的:以纳米二氧化硅(SiO2)为研究对象,探讨其对人张氏肝细胞(Chang liver cells)的毒性作用.方法:透射电子显微镜观察纳米SiO2粒径、形态及分散性.体外培养人张氏肝细胞,将细胞分为对照组及纳米SiO2暴露组.纳米SiO2暴露浓度分别为12.5、25、50、100、200(mg·L-1),作用外周全血细胞和张氏肝细胞24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态及结构;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生存率;DAPI染色观察细胞核形态;TRITC-Phalloidin染色观察细胞骨架微丝结构.结果:与正常对照组相比,纳米SiO2引起人张氏肝细胞存活率明显降低(P0.01);细胞胞体产生皱缩、变圆,细胞核固缩并出现空泡化,细胞骨架微丝结构破坏.结论:纳米SiO2作用于人张氏肝细胞会抑制细胞增殖,造成细胞形态改变,并呈现剂量依赖性.     

茉莉酸及其生理作用和分子机理

综述了茉莉酸的生理功能和作用分子模式的研究进展。     

Nrf2-ARE信号通路抑制剂OAD-85对肺癌A549细胞毒性作用机理研究

齐墩果酸(oleanolic acid,OA),是广泛存在于植物中的五环三萜类化合物,具有保肝、抗癌、抗突变、抗氧化、抗衰老等作用.临床上OA主要用于急慢性肝炎的辅助治疗,但由于其水溶性差、生物利用度低,限制了临床应用. OAD-85是齐墩果酸衍生物,通过研究发现其对多种肿瘤细胞具有较好细胞毒性,IC50值在7～16μmol/L之间.对肺癌A549细胞毒活性研究发现,OAD-85的细胞毒性与其抑制内源性抗氧化应激通路Nrf2 (转录因子)-ARE(抗氧化反应原件)密切相关.它能上调Nrf2胞浆锚定蛋白Keap1的表达,阻断Nrf2转位入核、增加核内转录阻抑蛋白Bach1的表达、阻断下游抗氧化信号的传递.在OAD-85作用下,细胞氧化应激产生大量活性氧(ROS),由于OAD-85对Nrf2-ARE通路的抑制作用,ROS不能及时被清除,大量累积于细胞中,最终导致A549细胞死亡.     

米氏凯伦藻对鱼类FHM细胞的毒性作用及其致死机制

探讨米氏凯伦藻培养液(Karenia mikimotoi culture solution,KMCS)及细胞提取物(Cell extracts,KMCE)对胖头鲤(Fathead minnow,FHM)细胞的毒性作用及致死机制。用光学显微镜观察细胞形态变化来分析KMCS和KMCE对FHM细胞的毒性作用,并用CCK法(Cell counting kit)分析KMCS和KMCE对FHM细胞活力的影响;用DNA特异性染料Hoechst 33342检测FHM细胞的细胞核变化,分析KMCS及KMCE是否导致FHM细胞发生程序性死亡及凋亡小体的形成;检测caspase-3的活性,分析KMCS和KMCE是否导致相关凋亡程序的发生。结果发现,用稀释两倍的KMCS和KMCE分别处理FHM细胞4h后,观察到FHM细胞形态均出现明显改变;将未稀释和稀释两倍的KMCS以及稀释两倍的KMCE,分别与FHM细胞孵育,4h后用CCK法检测细胞活性,发现FHM细胞的细胞存活率分别下降了63.6%,22.2%和26.7%。Hoechst 33342染色结果表明,KMCS和KMCE都可以导致FHM细胞中出现凋亡小体,对凋亡相关蛋白因子caspase-3活性的检测,结果显示实验组细胞caspase-3活性水平显著升高,分别为对照组的2.32倍和1.49倍。KMCS和KMCE对鲤鱼FHM细胞生长具有明显的细胞毒性,会导致细胞发生细胞凋亡。     

低剂量汞元素的毒性作用机理

低剂量汞毒性作用机理研究是当前毒理学研究的热点之一．着眼于低剂量汞元素毒性作用的特点，就其对蛋白质、脂类、遗传物质等的影响多个方面，对汞毒性作用机理的近期研究进展进行综述，并对该领域深入研究的方向提出了几点看法．     

肾脏细胞凋亡的分子机理研究进展

凋亡与增殖是调控细胞数目稳态的、作用相反的一对机制。细胞凋亡与肾脏疾病的发生、发展及转归均密切相关。本文综述了参与细胞凋亡的信号分子以及肾脏细胞凋亡领域的研究进展。     

分子路线图与中药复方作用机理研究的浅识

本文作者认为:如果运用当代高新科技的基因组学、比较基因组学和生物信息学手段以及关联分析的方法,开发出表示中药复方重要性状,尤其是数量性状基因的功能分子标记,总结出与中药复方作用机理相关的基因,形成与中药复方作用相关基因的终极列表,并构建出导致不同中药复方作用的共同的分子路线图。通过测绘这些路径的分子网络和信号通路,很有可能找到有效认识中药复方治疗作用机理的着眼点和目标,有望对中药复方的创新研发,开创新的思路和方法。     

人角膜细胞在体外培养的研究进展

人角膜是光通过的窗口，在维持眼压和对光路调节方面也起着重要的作用，由角膜缺损或病变引起的眼疾严重时会导致患者失明。目前治疗这类疾病的唯一办法就是角膜移植，但是及其匮乏的角膜供体使得多数患者失去重新获得光明的机会。近些年来兴起的组织工程人角膜体外重建技术给数以千万计的患者带来了福音。来自自体的人角膜细胞是上述组织工程所需的最理想的种子细胞，本文就人角膜细胞在体外的培养和扩增的进展和存在的问题进行综述。     

诺氟沙星与氧氟沙星同时与牛血清白蛋白分子作用的荧光光谱

氧氟沙星(OFX)、诺氟沙星(NOR)皆能使牛血清白蛋白(BSA)的荧光猝灭.当2种药物共存时可进一步使BSA荧光猝灭,借此利用荧光光谱法研究了诺氟沙星、氧氟沙星药物间的相互作用.研究结果表明2种药物间存在相互作用,使药物与蛋白的结合稳定性减小;BSA的荧光猝灭属于静态猝灭,药物与BSA结合位点数n近似为1.依据F(o...