病理性瘢痕动物模型的研究进展

瘢痕（scar）是创伤愈合的必然产物。创伤修复异常时,出现以成纤维细胞为主的细胞增殖,活性增强;以Ⅰ、Ⅲ型胶原为主的细胞外基质（extracellar matrix,ECM）沉积;真皮组织过度增生,出现病理性瘢痕或称异常瘢痕（abnormal scar）。病理性瘢痕又分为增生性瘢痕（hypertrophic scar,HS）及瘢痕疙瘩（keloid,K）。目前,对于病理性瘢痕形成的发病机制仍不清楚,但由于动物与人皮肤结构的差异性,     

整合素αvβ3对正常和癌变的人滋养层细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

胚胎植入过程中,滋养层细胞对母体子宫内膜的侵润过程与肿瘤的迁移非常类似,显著区别在于前者是受严格调控的有节制侵润.利用体外培养的人早孕胚胎细胞滋养层细胞和人绒毛膜上皮癌细胞模型,通过RT-PCR、明胶酶谱和免疫细胞化学分析等手段,对比研究了整合素αvβ3对正常和肿瘤细胞产生基质金属蛋白酶的调节.结果表明,正常细胞滋养层细胞和绒毛膜上皮癌细胞均可产生整合素αvβ3;整合素αvβ3抗体能够促进正常滋养层细胞产生基质金属蛋白酶的能力,但抑制绒毛膜上皮癌细胞中基质金属蛋白酶的分泌.这表明整合素能够调节基质金属蛋白酶表达,同时也表明正常和肿瘤化的滋养层细胞中基质金属蛋白酶的表达存在截然不同的调节机制.     

转化生长因子-β与眼科疾病

转化生长因子-β(TGF-β)是一类具有多种生物学功能的多肽生长因子，能调节多种细胞的生长、分化和移行，参与细胞外基质成分的合成和免疫调节，它不仅是正常眼内组织代谢及功能的基本因素，在许多眼内病理过程中它也起着重要作用。文章就TGF-β的结构、功能以及它在眼科方面的进展作简要综述。     

整合素αvβ3对正常和癌变的人滋养层细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

胚胎植入过程中，滋养层细胞对母体子宫内膜的侵润过程与肿瘤的迁移非常类似，显著区别在于前者是受严格调控的有节制侵润.利用体外培养的人早孕胚胎细胞滋养层细胞和人绒毛膜上皮癌细胞模型，通过RTPCR、明胶酶谱和免疫细胞化学分析等手段，对比研究了整合素αvβ3对正常和肿瘤细胞产生基质金属蛋白酶的调节. 结果表明，正常细胞滋养层细胞和绒毛膜上皮癌细胞均可产生整合素αvβ3；整合素αvβ3抗体能够促进正常滋养层细胞产生基质金属蛋白酶的能力，但抑制绒毛膜上皮癌细胞中基质金属蛋白酶的分泌. 这表明整合素能够调节基质金属蛋白酶表达，同时也表明正常和肿瘤化的滋养层细胞中基质金属蛋白酶的表达存在截然不同的调节机制.     

绵羊创伤愈合过程的定量分析对比研究

在16只绵羊造成800mm~2的长方形皮肤全层缺损创,随机分为自然愈合组和氦氖激光照射组(每组各8只),研究了创伤愈合的过程,创口主动收缩的速度、创面变化的常数、抗张强度及两组的数理统计分析,结果表明,创伤愈合的过程分为三个阶段:回缩与停滞期、快速收缩期和缓慢收缩期:自然组和激光组的愈合时间(t)、创口收缩的速率(b)、抗张强度(TS)和常数(k)分别为25.38天、1.03mm/天、3.96kg/cm~2、-0.0783和22.13天、1.11mm/天、5.02kg/cm~2,-0.0686、差异均显著。本研究证实,低功率氦氖激光对绵羊创伤愈合的主要效应是缩短停滞期,延长快速收缩期、增大创面变化的常数 k,增强创口收缩的速率、提高生发层细胞的再生活性、使创伤愈合的过程提前完成,加速愈合组织的上皮化,从而增大抗张强度。     

兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养和增殖的研究

目的：研究兔和牛角膜上皮、基质及内皮细胞等3种细胞体外培养的生物学特性，探索和改进这3种细胞体外培养的方法，为组织工程角膜奠定基础。方法：采用消化法分离培养兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞，观察细胞贴壁生长情况，同时对生长良好的原代细胞进行消化传代，进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果：角膜上皮、内皮和基质细胞均在培养48～72h贴壁生长，培养6～9d能形成良好单层，细胞形态典型，进行多次传代后细胞仍维持原有形态和功能，获得的细胞能进行长期培养。结论：为兔和牛角膜上皮、内皮和基质细胞体外培养，提供了简单高效经济的方法。     

制备附载rhTGF-β1的PLGA缓释支架及其对MSCs细胞形态的影响

为探讨自制的附载转化生长因子-β1(rhTGF-β1)的D,L-乳酸-CO-乙醇酸(PLGA)体外缓释生物支架对人骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞形态的影响,制备了附载rhTGF-β1的PLGA生物支架,并检测了在PLGA的降解过程中rhTGF-β1的释药规律;同时分离培养人骨髓间充质干细胞,体外培养后分别接种于附载和未附载rhTGF-β1的PLGA支架上.通过扫描电镜观察不同时间段MSC在支架上的生长情况,实验结果表明,rhTGF-β1能被包裹进PLGA支架中,而且可在PLGA支架降解过程中持续释放出来.通过扫描电镜还观察到实验组支架上细胞呈多角或梭形,且有较多基质分泌,而对照组细胞较少.因此附载转化生长因子-β1的PLGA复合载体是一种较为理想的新型生物支架.     

花背蟾蜍蝌蚪变态期角膜发育过程中Ⅰ型胶原的免疫组化彩色图像分析

应用彩色图像分析技术对Ⅰ型胶原的免疫组化彩色图像分析可以弥补单纯应用定性指标或形态学指标的不足。花背蟾蜍蝌蚪在变态期角膜发育过程中随着Ⅰ型胶原的增多，内、外角膜逐渐愈合。Ⅰ型胶原的表达存在增龄变化，可以推测Ⅰ型胶原是构成角膜基质的主要成分，对建立和维持角膜支架有重要作用。     

采用图像信息学方法研究三维支架中细胞的信号通路

通过慢病毒介导的短发夹RNA对成纤维细胞的转化生长因子β(TGF-β)信号通路进行干扰,采用双光子荧光显微成像技术并结合基于细胞-细胞外基质三维系统的图像信息学方法,研究了植于多孔胶原蛋白支架中成纤维细胞分化过程的TGF-β信号通路.结果表明,在介导成纤维细胞分化的过程中,生长因子TGF-β1比TGF-β3发挥的作用更大,在TGF-β1介导的成纤维细胞分化过程中,蛋白SMAD1和SMAD3通过不同方式也发挥了重要作用.所得结果与通过生化或遗传学方法的结果相吻合.     

大鼠尿酸性肾病肾小管上皮细胞凋亡、增殖、表型转化及转化生长因子β1表达关系

采用腺嘌呤灌胃法建立了大鼠实验性尿酸肾病动物模型,应用原位末端标记(TUNEL法)、免疫组化、原位杂交检测了6例正常及30例模型大鼠肾组织肾小管凋亡、增殖、表型转化现象及促纤维化细胞因子TGF-β1蛋白及基因表达状况.研究发现:尿酸性肾病发生发展过程中,肾小管上皮细胞存在明显的凋亡、增殖及表型转化现象.伴随着肾小管间质纤维化的形成,损伤肾小管凋亡、增殖、表型转化与转化生长因子β1(TGF-β1)表达呈增高趋势,且阳性表达细胞分布趋势一致:多位于尿酸盐沉积处损伤及再生的肾小管上皮细胞,可见凋亡、增殖、表型转化及转化生长因子β1表达在肾小管上皮细胞间伴随发生的现象.在病变晚期,肾小管明显萎缩及扩张,肾间质异物肉芽肿形成及弥漫纤维化,肾小管上皮细胞凋亡、增殖、表型转化及转化生长因子β1表达数量随残存肾小管上皮细胞的减少而呈下降趋势,但仍可见凋亡、增殖、表型转化及转化生长因子β1表达在肾小管上皮细胞间伴随发生的现象.这些结果均表明尿酸性肾病致肾小管间质纤维化过程中,肾小管上皮细胞凋亡、增殖、表型转化是损伤肾小管上皮细胞的重要病理变化形式,肾小管上皮细胞通过增殖,完成损伤肾小管的再生;通过细胞凋亡,清除坏死细胞并抑制肾小管上皮细胞的过度增殖;增殖的肾小管上皮细胞通过表型转化及TGFβ1表达,成为细胞外基质和促纤维化细胞因子的重要来源细胞,在肾小管间质纤维化中发挥了核心作用.     

干细胞商业化成功的背后故事

 膜缘干细胞的缺乏使角膜上皮失去再生和修复能力, 引起角膜结膜上皮化、新生血管长入、慢性炎症、反复上皮缺损、基质瘢痕化以及角膜自溶和溃疡, 若不进行治疗, 该病最终可导致失明。     

脱细胞角膜基质制备方法研究进展

脱细胞角膜基质作为组织工程角膜的研究新热点,不仅保持了天然角膜的结构特征和力学性能,且含有人工合成支架所不具备的细胞生长因子等,为种子细胞生长提供了理想的环境,同时也去除了组织中可能引发免疫排斥反应的细胞成分。本文对最近几年异种脱细胞角膜基质的制备方法进行综述,并指出了各种方法的优缺点。     

应用脱水保存的角膜片进行同种和异种表面角膜镜片术的实验研究

用纯甘油脱水保存１５～１２０天的人、猴角膜片进行了３例人给猴，５例猴给猴表面角膜镜片术，结果２例人给猴，４例猴给猴的表面角膜镜片术后获得透明愈合；２例因层间上皮植入而失败，观察时间３～２４个月。于术后３、６和２４个月对实验动物角膜作了光镜观察、证实表面角膜镜片的上皮及基质内的角膜细胞被受主所替代，其结构与正常角膜相仿。     

花背蟾蜍角膜的发育和诱导

以花背蟾蜍的胚胎和变态期蝌蚪为材料,采用光镜、电镜、免疫荧光组织化学、放射自显曩、电镜细胞化学、皮肤片移植及类坏死处理等技术,研究：（１）在胚胎发育及变态期间角膜的发育过程;（２）细胞外基质的合成变化及其对角膜发育和诱导的作用;（３）角膜诱导期间的超微结构变化及类坏死对角膜诱导的影响;（４）在角膜下沉发育和诱导过程中的组织化学和视网膜感光细胞特异视蛋白的出现及二者间的可能关系。还提出角膜诱导的可能     

不同方法处理的角膜脱细胞基质组织学生物特性的比较

目的:比较不同的角膜脱细胞基质方法,旨在选择最适合的脱细胞基质方法,制备成为组织工程角膜支架材料和角膜替代物的脱细胞基质.方法:分别用胰酶-曲拉通法、SDS-戊二醛法、胰酶-冷冻法等方法对角膜进行脱细胞处理,并对脱细胞彻底的基质进行力学特性、透光率的分析.结果:用胰酶-冷冻法获得的兔角膜全层和分层基质脱细胞最彻底,基质的结构未见明显破坏,脱细胞基质在生物力学特性上与正常角膜接近,透光率低于新鲜角膜.结论:用胰酶-冷冻法获得的脱细胞基质与自然角膜接近,可作为组织工程角膜支架材料和角膜替代物.     

MiR-548d-3p调节过氧化氢刺激下人圆锥角膜成纤维细胞IL-1β的表达

氧化应激和炎性因子与圆锥角膜发病密切相关。MiRNAs作为重要的基因表达调控因子参与了角膜的生理病理过程。为了探讨MiRNAs是否通过靶向IL-1β调控圆锥角膜成纤维细胞中与基质重塑相关基因的表达,通过生物信息学软件预测可能与IL-1β靶定的MiRNAs(miR-21-5p, miR-24-3p, miR-26b-3p, miR-27b-5p, miR-181d-5p, miR-383-3p, MiR-548d-3p, miR-4700-3p),对体外培养的人圆锥角膜成纤维细胞添加过氧化氢处理0,6,12,24 h,采用实时荧光定量PCR检测上述MiRNAs及IL-1β基因的表达,并通过双荧光素酶报告分析实验确定MiR-548d-3p与IL-1β之间存在靶定关系。将MiR-548d-3p的模拟物转染至人圆锥角膜成纤维细胞内,发现在氧化应激条件下,MiR-548d-3p的模拟物可显著下调IL-1β的基因表达,并使MMP-1和MMP-3表达下降、Collagen I-α2表达升高。提示氧化应激条件下,人圆锥角膜成纤维细胞MiR-548d-3p可通过下调IL-1β表达促进角膜基质合成,减少降解,进而减缓圆锥角膜病变进程,为圆锥角膜患者治疗提供潜在靶点。     

机械牵拉对角膜成纤维细胞氧化应激、炎性因子和MMP-9表达的影响

探讨机械牵拉对人角膜成纤维细胞氧化应激水平、抗氧化能力、炎性因子及基质金属蛋白酶(MMP)表达的影响。对体外培养的正常人(NC)及圆锥角膜患者(KC)角膜成纤维细胞进行周期性机械牵拉(幅度15%,频率0.1 Hz,时间12 h).采用荧光染色法检测活性氧自由基(ROS)水平;采用实时荧光定量PCR检测抗氧化酶基因表达;采用酶联免疫吸附试验方法检测炎性因子和MMP-9表达。结果发现:静态培养条件下, KC细胞ROS水平、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、MMP-9均明显高于NC细胞;与静态培养组比较,机械牵拉显著增加了NC和KC细胞ROS、炎性因子和MMP-9蛋白表达水平;并使NC细胞部分抗氧化酶基因表达上调,但不同KC患者细胞牵拉后抗氧化酶表达不同。结果提示力学刺激可能通过处于较高氧化应激状态的圆锥角膜成纤维细胞释放更多的炎性因子,进而上调MMPs的表达,加速角膜细胞外基质降解,促进圆锥角膜的发生与发展。     

TGFβ1介导雌二醇对前列腺间质细胞smoothelin表达的促进作用

研究了雌激素在促进前列腺基质细胞化过程中作用的分子机制.在前列腺基质细胞培养液中分别添加TGFβ1,雌二醇、雌二醇和ICI182.780、睾酮、睾酮和芳香化酶抑制剂、双氢睾酮、雌二醇和TGFβ1中和抗体;用半定量RT-PCR的方法检测基质细胞中平滑肌细胞特异蛋白smoothelin和TGFβ1 mRNA的表达水平;用ELISA测定基质细胞培养基中TGFβ1的浓度.结果显示TGFβ1可明显促进smoothelin的表达;雌二醇和睾酮能明显刺激TGFβ1基因和蛋白的表达水平,而雌激素受体抑制剂ICI182.780和芳香化酶抑制剂可分别抑制雌二醇和睾酮对TGFβ1表达的促进作用;双氢睾酮对TGFβ1基因的表达没有影响.TGFβ1中和抗体能抑制雌二醇对smoothelin的促表达作用.结果显示雌二醇可能通过诱导TGFβ1促进前列腺平滑肌细胞特异蛋白smoothelin的表达.     

小鼠胚肝基质细胞在体外培养中的动态演化

胚肝基质细胞是研究胚肝造血调控的重要工具，本实验对小鼠胚肝基质细胞在体外培养过程中的生长、细胞类型组成及其组成比例的演变过程进行了观察．实验显示小鼠原代培养初期基质细胞是由平滑肌样上皮细胞、巨噬细胞以及成纤维样细胞、树突状细胞、内皮细胞构成的，经过多次传代后，巨噬细胞等类型的细胞逐渐丢失，平滑肌样上皮细胞和成纤维样细胞成为主体，表明体外培养的小鼠胚肝基质细胞在4代以内都能较真实的反映体内造血微环境的构成，适用于胚肝造血研究．此为进一步研究胚肝基质细胞在胚胎期造血过程中的作用奠定了工作基础．     

周期性机械拉伸对兔角膜成纤维细胞MMP-2/TIMP-2及TGF-β1表达的影响

研究了周期性机械拉伸对角膜成纤维细胞外基质中金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotei-nase-2,MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制剂-2(Tissue inhibitors of metalloproteinase-2,TIMP-2)及转化生长因子-β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)表达的影响。对正常兔角膜成纤维细胞进行幅度分别为5%、10%及15%的周期性机械拉伸,并分别于拉伸后6h、24h取细胞培养液,采用ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的含量。当拉伸幅度为5%时,6h、24h后,MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的含量与静态对照组相比均无统计学差异;当拉伸幅度为10%时,6h后MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的含量与静态对照组相比无统计学差异,24h后MMP-2的含量显著升高(p<0.05);当拉伸幅度为15%时,6h后MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的含量与静态对照组相比仍无统计学差异,拉伸24h后MMP-2、TGF-β1含量显著升高,TIMP-2含量显著降低(p<0.05)。结果表明,在体外以一定的幅度周期性拉伸角膜成纤维细胞一定时间后,细胞分泌的MMP-2、TIMP-2及TGF-β1发生显著改变,三者相互作用,共同调节角膜成纤维细胞的生物学行为。