良凤江南宁市段水质的初步分析与评价

研究采用酶底物法测定总大肠菌群数和大肠埃希氏菌数,稀释平板法测定细菌总数,并利用藻类进行水体富营养化检测,结合理化检测对良凤江水质进行初步评价.结果显示良风江水质较差,据此提出相应的建议和措施.本研究可为整治内河环境,保护邕江水质,改善南宁市的水环境质量提供科学依据和指导.     

中国传统发酵食品中溶栓酶活性检测方法比较

通过正交实验设计建立最佳琼脂糖-纤维蛋白平板法,并比较改进的纤维蛋白平板法和四肽底物法测定中国传统发酵食品中溶栓酶的活力的线性和精密度,以找出一个灵敏易操作、经济实惠、快速准确地标示溶栓酶效价的活性检测方法。实验结果显示纤维蛋白平板法和四肽底物法分别在50～800IU.mL-1、0.03～2.60U.mL-1范围内具有良好的线性关系,且日间和日内变异系数均小于6%。因此,纤维蛋白平板法与四肽底物法均能用于溶栓酶的活性检测,前者测定结果比较直观,但四肽底物法操作比较简单,经济成本相对较低,灵敏度高,更适合溶栓菌株的高通量筛选。     

关于城市污水粪大肠菌群两种检测方法的比较

比较多管发酵法和滤膜法用于污水中粪大肠菌群的检测,通过对检测结果进行统计,得出两种方法测出的数据相关性趋向一致,但是多管发酵法检出的粪大肠菌群要多于滤膜法检出的粪大肠菌群。在实际污水检测工作中可以挑选滤膜法为污水厂检测粪大肠菌群的检测方法。     

α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法，实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA，以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体，转化Bl21表达菌株进行蛋白表达.使用亲和层析方法纯化His-A4酶，选择显色底物验证酶活性.同时，改进了传统的ELISA方法，直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中，以红细胞膜表面抗原作为直接底物，用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法，以此方法验证了A4酶的活性，证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应，且具有浓度和时间依赖性.     

锇聚合物修饰丝网印刷电极的辣根过氧化物酶传感器

酶生物传感器检测环境污染应用前景良好。该文采用戊二醛-牛血清白蛋白交联法将锇-聚乙烯基吡啶(Os(bpy)2(PVP)10Cl2,Os-PVP)与辣根过氧化物酶(HRP)依次固定在丝网印刷电极上,制备电流型过氧化氢生物传感器。通过循环伏安法对修饰电极的氧化还原性质进行研究,并采用计时-电流法对传感器的固定化和工作参数进行了研究,以便提高信号响应的灵敏度和稳定性。在最适合条件下,底物在修饰电极表面进行催化反应的表观Michaelis-Menten常数kampp为1.79 mmol/L,并确定以HRP酶为标记物的免疫传感器所采用的底物浓度宜大于20倍的kmapp。     

固定化双酶体系（葡萄糖淀粉酶—葡萄糖异构酶）的性质研究

采用大孔型阴离子交换树脂吸附与戊二醛交联法相结合,制备固定化双酶.该酶是将葡萄糖淀粉酶(GA)和葡萄糖异构酶(GI)同时固定在同一载体上,其酶作用的最适pH为6.8,最适温度为55℃,最适底物浓度为15％,热稳定性在50℃以下较稳定.     

锇聚合物修饰丝网印刷电极的辣根过氧化物酶传感器

酶生物传感器检测环境污染应用前景良好。该文采用戊二醛-牛血清白蛋白交联法将锇-聚乙烯基吡啶(Os(bpy)2(PVP)10Cl2,Os-PVP)与辣根过氧化物酶(HRP)依次固定在丝网印刷电极上,制备电流型过氧化氢生物传感器。通过循环伏安法对修饰电极的氧化还原性质进行研究,并采用计时-电流法对传感器的固定化和工作参数进行了研究,以便提高信号响应的灵敏度和稳定性。在最适合条件下,底物在修饰电极表面进行催化反应的表观Michaelis-Menten常数kampp为1.79mmol/L,并确定以HRP酶为标记物的免疫传感器所采用的底物浓度宜大于20倍的kmapp。     

固载葡萄糖氧化酶的壳聚糖/二氧化硅杂化膜的制备及表征

利用生物相容性良好的天然高分子聚合物壳聚糖(CS)与甲基三甲氧基硅烷(MTOS)通过原位溶胶-凝胶法制备壳聚糖/二氧化硅有机无机杂化复合膜,用此膜对葡萄糖氧化酶进行固定,用红外光谱法、扫描电镜法对膜进行了表征.以电沉积普鲁士蓝的玻碳电极和固定化酶膜构建葡萄糖生物传感器,用循环伏安法和记时电流法对固定化酶的效果进行了评价,结果表明,用于研制固定化酶生物传感器时,杂化膜比单纯的壳聚糖膜对底物的响应时间快并能很好地保持酶的活性.     

农药靶标乙酰胆碱酯酶的分离纯化及性质研究

采用了Sephadex G-25层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,对家蚕头部粗酶匀浆液中的乙酰胆碱酯酶进行纯化,得到的样品经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和SDS-PAGE检测均为一条带,用SDS-PAGE法测得其分子量为77.8 kDa.酶的最适反应温度为37 ℃,最适pH为7.5,对底物碘化硫代乙酰胆碱(ATChI)的Km值为0.392 mmol/L,最适底物浓度为1.6 mmol/L,在1.6 mmol/L底物浓度以上观察     

溶液粘度和EcoRI限制性核酸内切酶—P_2-DNA复合物解离的动力学

Eco.RI限制性内切酶像所有球蛋白一样是动力学系统,并且存在着大量的构象底物。酶和底物之间能够发生反应,仅仅在酶蛋白被底物诱导而变构以后,变构能克服起动化学反应的阈值。粘度不仅影响扩散和分子彼此碰撞,而且也影响酶的变构。温度影响溶液粘度,从而也可间接地影响酶的变构。为了证明这种观点,我们在不同粘度和温度条件下,用Eco.RI限制性内切酶切割P_2—DNA,研究了酶——底物复合物催化速度常数的改变。一起考虑来自所有溶液的资料,酶——底物复合物的解离速度常数作为固定粘度下的温度函数和固定温度下的粘度函数被研究。酶——底物复合物的转变速度依赖于溶液粘度,溶液粘度在测定蛋白质动力学状态中起着重要的作用。我们的实验资料表明,最大的催化速度常数Kc值,出现在20%(V/V)的甘油溶液中,在不同温度下,Kc值在高于最适粘度的广大粘度范围内,将随粘度的增加而下降,反之,在低于最适粘度时,Kc值将随粘度的下降而下降。实验结果暗示,EcoRI酶——P_2—DNA复合物解离速度常数值,对于粘度和周围介质产生的酶的调控作用是敏感的。可能的机制将被讨论。     

浅论粮食食品卫生检验的几种方法

目的:了解食品中大肠菌群的污染状况,比较不同检验方法对大肠菌群的检出效果。方法:随机采集本市250份食品,采用常规法与PCR法进行大肠菌群鉴定。结果:250例标本结果如下,常规法的检出率为32.8%,PCR的检出率为48.4%,两组相比有显著性差异(P<0.05)。结论:分子生物学的发展对建立更敏感快捷的食品卫生检测方法已经起到了积极的促进作用,将从根本上改变微生物的检测方法,具有非常广阔的应用前景。     

Trichoderma reesei纤维素水解酶的糖苷合成性质

通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(从(Trichoderma reesei天然纤维素水解酶中分离纯化得到了一种相对分子质量约为65 000的蛋白组分.分别以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal和Avicel作为底物,均检出该组分的水解活性.此外该酶对CMC-Na有可被测出的弱活性.以pNP-Glu为底物,45℃时,其水解酶性质的米氏常数Km=3.04 mg/mL,Vmax=3.77 μmol/min.用DNS法和对硝基苯酚法(仅对含有对硝基酚结构的底物pNP-Glu、pNP-Gal和oNP-Gal)分别检测了在180 min反应时段内产物还原糖和对硝基苯酚的含量变化,结果显示在封闭的反应体系中有明显的可逆反应存在,并出现了周期性振荡的特征,有糖苷合成活性的表现,水解产生还原糖和对硝基苯酚的量,呈现出分别为25.43±8.34 min和36.25±2.50 min的含量增减振荡周期.与此同时,为了证实该酶糖苷合成活性的存在,以葡萄糖作为底物与酶反应,得到了7.00±4.83 min的葡萄糖含量周期性波状振荡结果.对底物为pNP-Glu反应15 min后的产物作乙酰化处理GC/MS分析,结果产物中有含二糖结构的产类型,揭示了这个水解酶的糖苷合成的特点.这是首次从Trichoderma reesei纤维素水解酶中分离得到了具有糖苷合成活性的酶.     

酪蛋白糖巨肽酶解物的二肽基肽酶-4抑制作用

为探讨酪蛋白糖巨肽(GMP)酶解物的二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制作用,选择木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶分别酶解GMP获得糖巨肽酶解物,选择甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺为底物的发色底物法检测DPP-4活性.结果表明,GMP酶解物的DPP-4抑制效果优于GMP本身,并且随酶解时间的延长酶解物DPP-4抑制作用逐渐增加,其中GMP木瓜蛋白酶解物对DPP-4抑制效果最好,GMP木瓜蛋白酶酶解物作为DPP-4抑制剂具有潜在应用价值.     

新型氢供体底物用于酶催化反应的研究

采用合成的新型苯基荧光酮类试剂2,4-二羟基苯基荧光酮(DHPF)作为过氧化物酶氢供体底物,用含杂原子的Huckel分子轨道理论方法(HMO)处理试剂分子的π电子体系,通过计算机使用自编程序进行计算,得到试剂分子中不同原子不同化学键的物理化学参数,为探讨试剂作为酶催化反应底物的反应机理提供了理论依据.以血红蛋白（Hemoglobin,Hb）为过氧化物模拟酶,拟定了以DHPF为氢供体底物测定H2O2的分析方法.检测范围为3.2×10-7～1.4×10-5mol/L,检出限为3.2×10-7mol/L.分析灵敏度高于4-氨基安替比林（4-aminoantipyrine,4-AAP)的苯酚、苯胺类方法.探讨了酶催化反应底物试剂的可能反应机理.     

易错PCR法定向进化D-海因酶的初步研究

D-海因酶是生物转化D-型氨基酸的关键酶,在一定浓度M n2 存在下,经易错PCR法重复扩增,产物构建成pET-HDT重组子,并建立突变体文库.经筛选获得了内源DNA序列变异的变异株.进化酶催化底物海因水解的活性为亲本重组酶的1.3倍,催化底物对羟基苯海因水解的活性为亲本重组酶的2.4倍.     

壳聚糖的溶菌酶降解

用粘度法和还原糖法研究了溶菌酶降解壳聚糖过程中温度、pH值、时间、酶浓度、底物浓度以及金属离子对降解速度的影响.比较合适的降解条件是:温度45℃,pH值5.0,适当增大酶浓度和底物浓度能够加速壳聚糖的降解,在一定的底物浓度下溶菌酶降解壳聚糖的反应不遵循简单的一级反应动力学.一定浓度的Cu2+、Zn2+、Ba2+、Cr3+能够促进壳聚糖在溶菌酶作用下的降解,而K+、Ca2+和高浓度的Zn2+会抑制酶活力的发挥.     

上海师范大学教学设施卫生状况调查与研究

采用微生物检测技术与致病菌检测技术对教室内环境卫生状况进行检测.分别检测教学环境和教学设施中细菌菌落总数、大肠菌群和致病菌3项微生物指标.利用平板法检测空气中存在的细菌菌落;利用棉拭采样法对教具、设施等进行大肠菌群和致病菌的检验.根据检测结果,了解环境动态变化趋势和教室环境污染状况,针对不同的微生物群制定合理的消毒方法和程序.经检测,9、10月份教室空气质量较好,平均菌落总数不超过10.教学设施在使用后检测到的平均菌落总数要大于使用前的数量,9月检测到的平均菌落总数要大于10月检测到的数据.其中课桌检测到的平均菌落总数范围值在80~120之间,手把检测到的平均菌落总数范围值在10~50之间.教学用具检测到的平均菌落总数范围值在40~80之间.同时,大肠菌群和沙门氏菌的检测结果呈阴性.     

大理学院下关校区附近餐馆冰箱冰柜卫生状况调查

目的:通过检测冰箱和冰柜内的大肠菌群,了解冰箱(柜)的卫生状况,预防食源性疾病的发生。方法:采用大肠菌群快速检验纸片法检测冰箱(柜)内的大肠菌群。结果:共检测冰箱7台,冰柜9台,大肠菌群阳性率为81.25%;生熟不分所占的比例为12.5%,杂物所占的比例为43.75%,污染物所占的比例为50%,异味所占的比例为12.5%;冰箱与冰柜大肠菌群阳性率之间比较差异无统计学意义;冷藏室与冷冻室大肠菌群阳性率之间比较差异无统计学意义。结论:冰箱冰柜的大肠菌群阳性率高,一般卫生状况较差。     

环氧化硅胶固定木瓜蛋白酶及其动力学性质

以硅胶为载体,γ-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷为偶联剂,对木瓜蛋白酶进行了固定化.最适固定化条件如下:温度为25℃,pH为8.0,时间为18 h,酶量为每100mg环氧化硅胶固定24 mg酶.同时以酪蛋白为底物,研究了固定化条件对酶活力回收的影响,并比较了固定化酶和溶液酶的动力学性质,结果表明:固定化酶的最适pH和最适温度都比溶液酶有所提高,且有较好的操作稳定性.     

不同预处理方法对棉秆酶水解的影响

研究稀硫酸法、亚硫酸法、亚硫酸盐法预处理的化学药品添加量对棉秆酶水解的影响,对预处理前后的棉秆进行扫描电镜观察,并对3种方法进行了比较.在固液比1∶4、温度180,℃、保温20,min的预处理条件下,纤维素酶用量(相对于绝干底物)10 U/g、纤维二糖酶用量(相对于绝干底物)3.6 U/g的酶水解条件下,稀硫酸法预处理在98%浓硫酸添加量为5.52%时,棉秆的酶水解转化率为42.63%;亚硫酸法预处理在亚硫酸添加量7%时,棉秆的酶水解转化率为81.25%;亚硫酸盐法预处理在98%浓硫酸添加量0.92%、亚硫酸氢钠添加量为8%时,棉秆的酶水解转化率为70.06%.