微卫星标记引物的开发及其在棉花中的应用

本文综述了微卫星标记引物开发的三类主要方法:构建基因组文库筛选的方法、直接PCR扩增为基础的方法、数据库筛选为基础的方法。概述了每种方法的实验步骤,总结了其优缺点,提出了新的发展思路,并简述了微卫星标记在棉花中的最新应用情况。     

微卫星标记及其在微生物研究中的应用

微卫星标记技术应用于微生物学研究始于20世纪90年代,近几年来发展相当迅速.为了把握这个研究方向和促进该研究领域的发展,作者从微卫星的种类、微卫星在基因组中的分布及其功能、微卫星标记的应用前景等方面进行了概括和总结.介绍了基于杂交的SSR指纹、微卫星引动的PCR、锚定SSR、微卫星位点的PCR扩增、RAMPs标记、SAMPL标记等几种主要方法及其应用情况,并从简单重复序列在基因组中的分布及其功能、遗传标记、遗传作图、遗传多样性分析等方面总结了已有的研究成果.     

小麦雌性不育基因的微卫星标记定位

以普通小麦新601×雌性不育小麦XND126的F2群体作为育性调查以及基因标记群体.通过对育性基因的分析,确定在此组合中雌性不育基因由1对主效基因控制;结合混合分组分析法(Bulk Segregant Analysis,BSA),首次对小麦雌性不育基因进行了SSR分子标记,通过对一千对微卫星引物的筛选,确定微卫星引物cfd36标记与主效基因连锁,遗传距离为20.2cM.     

利用DNA微卫星标记定位水稻的抗稻瘟病基因

利用回交育种中产生的回交群体结合前人的研究结果构建了Pil基因区域的局部分子标记连锁图，通过BC1F2家系的接种结果判断其基因型，将Pil定位在RFLP标记RZ536与SSR标记RM144之间，图距分别为9．7、6．8cm，从而建立了一套完整的以PCR为基础的分子标记辅助选择体系。     

微卫星标记及其在畜禽遗传育种中的应用

微卫星是近十多年来发展起来的一种新型的分子遗传标记。它具有在基因组中数量大、分布广、多态性丰富、易于检测、呈孟德尔共显性遗传等优点,因此被广泛应用于基因定位、构建基因组图谱、个体及亲缘关系鉴定、群体遗传结构与遗传关系的分析、监测育种和遗传操作效应、标记辅助选择及杂种优势预测等方面。综述了微卫星DNA标记及其在畜禽遗传育种中的应用。     

大分舌蜂EST-SSR微卫星分子标记开发与特征分析

【目的】构建中国油茶（Camellia oleifera）主要传粉昆虫之一的大分舌蜂(Colleles gigas)cDNA文库并利用全国几个典型样本筛选微卫星DNA(Simple sequence repeat,SSR)位点,为该蜂种群遗传多样性和遗传分化研究提供可靠的分子标记。【方法】使用10头大分舌蜂雌性幼虫构建cDNA文库,用Illumina Hiseq TM 2500高通量测序平台测定cDNA文库数据,通过SSR筛选软件MISA进行检索发掘SSR标记;利用Primer Premier 5.0软件设计引物,利用荧光标记技术进行分型。【结果】从cDNA文库序列中筛选得到16 457个SSR,其中15 563个(占比为94.57%)是完整型SSR,872个(占比为530%)是不完整型SSR,22个(占比为0.13%)是复合型SSR;完整型SSR中单碱基SSR最为丰富,共10 910个,占总SSR数量的70.11%,其余依次是二碱基SSR (2 099个,占比为13.49%)、三碱基SSR(2 408个,占比为15.47%)、四碱基SSR(136个,占比为0.87%)和五碱基SSR (10个,占比为0.06%)。对80对EST-SSR引物在6个不同地理种群32头大分舌蜂中进行验证,共有6对EST-SSR引物较好地扩增出目的片段,共获得192个等位基因,平均等位基因数为11.833 332个,平均有效等位基因数为4.149 8个,香农信息指数范围为1.362 6～2.119 2,平均观测杂合度为1.000,平均期望杂合度为0.800,多态信息含量范围为0.710～0.879,且平均值为0.761。【结论】研究所开发的6对大分舌蜂EST-SSR引物对应的产物多态性较高,遗传多样性也较高,可以应用于该蜂种的遗传多样性、遗传分化、种质资源保护等领域的后续研究。     

利用微卫星标记分析贵州水牛的遗传多样性

通过对贵州水牛的遗传多样性进行分析,为正确评估贵州水牛的资源价值、制定合理可行的保种方案提供理论依据.利用11对多态性较高的微卫星引物对贵州7个水牛群体的有效等位基因数、基因杂合度、多态信息含量和遗传距离进行分析.贵州7个水牛群体的平均有效等位基因数、平均杂合度和平均多态信息含量分别为4.0823～4.8951、0.7450～0.7922和0.7021～0.7605;遗传距离最远的黔南水牛和毕节水牛为0.3084;由UPGMA聚类法将贵州7个水牛群体聚为4类.贵州水牛遗传多样性丰富,具有较好的遗传潜力;对贵州水牛的划分比传统分类法更能反映实际的生态地理环境及其历史形成状况.     

异源多倍化引起的小麦微卫星序列变异

利用80对小麦微卫星引物调查了小麦黑麦双二倍体形成过程中微卫星序列的变异情况.结果显示: 8对引物能从杂交F1植株及亲本小麦植株的基因组中扩增出相同的带型,而在新合成的双二倍体中条带缺失;4对引物从杂交F1植株及亲本小麦植株的基因组中扩增出相同的带型,而在新合成的双二倍体中扩增的条带变短;其余引物从亲本小麦、F1植株及双二倍体中扩增的带型相同.将有长度变化的条带回收测序,发现双二倍体中的条带变短现象是由二核苷酸重复单位减少所致.这些结果表明:常发生在二倍体生物中的微卫星序列变异现象在植物异源多倍化过程中也会发生,异源多倍化可能是促进微卫星进化的又一个不可忽视的动力.和二倍体生物一样,异源多倍化诱导的微卫星序列进化也表现为长的重复序列趋向缩短.     

微卫星标记定位紫粒小麦色素基因

通过对紫粒小麦漯珍1号×白粒小麦8901杂交后代遗传分析表明,紫粒小麦漯珍1号的粒色性状受2对独立的显性基因控制;采用SSR技术结合BSA方法,筛选到了2个与色素基因相连锁的微卫星标记--2A染色体短臂上的Xgwm47和3A染色体长臂上的Xgwm155.     

长白猪微卫星标记的遗传多样性

采用ESTMS20,SW2570和S0002等3个微卫星标记对长白猪进行了遗传多样性的研究。结果发现,3个卫星标记在长白猪中均具有多态性,遗传杂合度分别为0.69,0.70和0.41,多态信息含量分别为0.64,0.68和0.38。以上结果表明,这3个微卫星标记在长白猪群体中属于高度多态性座位,可以用于长白猪遗传多样性的评估。     

小麦SSR标记的应用

SSR技术是建立在PCR技术上的新型分子标记,同其他分子标记相比,具有多态性高,重复性好、探作简单、结果稳定等特点.本文阐述了小麦SSR标记的技术路线,概括介绍了SSR标记在小麦中的应用.     

小麦染色体2DS雌性育性位点遗传多态性分析

小麦雌性不育系XND126属于生态遗传型不育系.通过SSR分子标记分析,在2DS染色体上定位了一个雌性育性主效QTL位点.为了构建高密度遗传图谱并精细定位该主效位点,用2DS参考遗传图谱上的14对SSR标记,研究了59个育性正常的普通小麦品种与XND126的DNA多态性,筛选到不同生态型多态性较高的品种共12个,每个品种多态性标记达12~13个,这些品种可以用作杂交亲本,构建新的QTL精细定位群体.在品种组成的群体中,与主效基因位点最近的标记,表现出有较多的品种与雌性不育系具有差异.     

利用回交群体对小麦雌性不育基因的SSR标记

对普通小麦新601、雌性不育材料XND126及其BC1群体的育性进行了观察.分析结果表明,此组合中雌性不育表现为1对隐性基因的遗传.结合集群分析(Bulked Segregant Anal-ysis,BSA)法在亲本间筛选了1 080对微卫星引物,并利用回交群体对小麦雌性不育基因进行了SSR分子标记,确定微卫星引物cfd36标记与雌性不育基因连锁,其遗传距离为13.0 cM.     

粗山羊草Y189抗小麦白粉病基因SSR标记

从粗山羊草[Aegilops tauschii(Coss.)Schmal]Y189中鉴定出1个显性抗小麦白粉病基因,暂定名为PmAe Y2.应用分离群体分组法(BSA)筛选到Xgwm583-5D、Xgwm174-5D、Xgwm182-5D和Xgwm271-5D标记与该基因之间的遗传距离分别为25.7、16.7、9.1和7.0 cM.根据连锁标记所在小麦微卫星图谱的位置,PmAe Y2被定位在5DL染色体上.分析基因所在染色体的位置、抗病性特征认为PmAe Y2是一个新的抗白粉病基因,并可用于分子标记辅助选择.     

老芒麦野生种质资源遗传多样性的SSR分析

采用SSR标记技术,对来源于内蒙古5个盟市的7个样点的35份老芒麦（Elymus sibiricus）野生种质资源进行了遗传多样性分析．从筛选出多态性强、重复性好的20对引物中,检测出326个等位位点,平均每对引物产生12．55个多态位点;多态位点百分率为76．99％,遗传距离的变化范围在O．0000—0．3079之间,说明供试材料问亲缘关系较近;35份老芒麦种质的Nei’S遗传多样性指数（h）为0．2223,Shannon指数（I）为0．3288,意味着供试的35份材料间的遗传多样性相对丰富．在O．71水平处,测试材料大致分为两大类,来源于内蒙古东部、中部和西部区的材料交叉明显,表现出地理非同源性．本研究为探讨老芒麦遗传变异与环境的关系及老芒麦野生种质资源的保护提供了理论依据．     

小麦中源于中间偃麦草抗白粉病基因PmCH5026的SSR定位

CH5026是衍生于八倍体小偃麦TAI7045的新品系,用高感品种(系)CH5065、晋太170分别与CH5026配置组合,于温室接种并调查F2、F3、BC1F2群体的抗感分离之比进行遗传分析,结果表明CH5026成株期对白粉菌E09小种的抗性受1对显性基因控制,暂命名为PmCH5026.使用集群分离分析法(BSA),用378对SSR引物对CH5026×CH5065 F2代群体进行分析,筛选到标记Xcfd233、Xbarc11和Xgwm539与抗性基因连锁,位置顺序为:Xcfd233-7.2cM-PmCH5026-4.9cM-Xbarc11-5.5cM-Xgwm539.根据小麦微卫星遗传连锁图及利用中国春第2同源群缺四体、双端体对SSR标记的定位结果,将PmCH5026定位在染色体2DL上.     

SSR标记分离技术的研究概况

SSR标记是植物中目前运用的最广泛的分子标记之一，广泛地运用于植物种质鉴定、分子标记连锁图的构建和群体遗传学等诸多领域．由于SSR为共显性标记，可以区分纯合、杂合基因型，因而得到更广泛的应用．目前出现了有筛选文库、筛选富集文库、与其他现有技术结合、STMP技术等SSR标记方法．在这些技术中，目前运用最广泛而且比较成熟的方法是筛选富集文库的方法，STMP技术是目前效率最高的分离单个微卫星位点的方法，可以开发SSR标记．本文对这些技术的原理作了论述．     

利用SSR分子标记鉴定华南型黄瓜‘川绿15号’杂交种子纯度

目的 为了快速、简便和准确地鉴定华南型黄瓜‘ 川绿15号’杂交种子的纯度,方法 选用240个均匀分布在黄瓜基因组上的SSR分子标记对‘ 川绿15号’及其亲本进行多态性筛选及纯度鉴定。结果 本研究从240个黄瓜SSR分子标记筛选到2对SSR标记（Cs100和Cs109）符合父母本间呈互补带型的要求,可用于川绿15号’杂交种子的纯度鉴定。准确性验证结果显示Cs100和Cs109的分子鉴定结果与田间形态的鉴定结果一致并且均能将掺入的其他品种黄瓜种子区分开来。结论 本研究构建了以黄瓜特异性SSR分子标记Cs100和Cs109为核心引物的‘川绿15号’杂交种子纯度鉴定的技术方法,可快速、简便和准确地鉴定该品种的种子纯度,为该品种的制种和大面积推广提供技术支持。     

贵州西山系列玉米杂交种SSR标记纯度鉴定的研究

以11个贵州西山系列玉米杂交种及相应的15个亲本自交系为材料,采用SSR（Simple Sequence Repeat）分子标记方法,从60对多态性高的引物中分别筛选了双亲互补型特异引物,并利用特异引物进行玉米杂交种纯度鉴定的检验．